一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法
1.本发明涉及制糖废密再利用技术领域，尤其是指一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法。
背景技术：
2.制糖废蜜含有大量的多种类的糖和蛋白质,是发酵酿造工业中廉价质优的原料，如多种矿物质、维生胺类等，是微生物进行发酵的理想复合原料。目前,国内外利用废糖蜜进行发酵所获得的主要产品有：酒精、柠檬酸、味精,已经大宗生产。除此之外,糖蜜还可以用来发酵生产酵母、甘油乳酸、丙酮、丁醇、富马酸、丁二醇、丁酸及赖氨酸等有用的产品。
技术实现要素：
3.本发明要解决的技术问题是提供一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法，能制备出有利于固氮净化吸收土壤重金属，改善土质的微生物菌剂，提高农作物品质。
4.为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
5.一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法，包括以下步骤：
6.s1，菌种活化：挑选胶冻样类芽孢杆菌、侧孢短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、酿酒酵母分别进行活化；
7.s2，对s1完成活化的菌种进行扩增；
8.s3，将s2中完成扩增的菌种按比例混合制成初始混合菌剂；
9.s4，利用制糖废蜜制作培养基；
10.s5，将s3中初始混合菌剂放入s4的培养基中进行发酵，得到微生物菌剂。
11.优选地，步骤s2中各菌种的混合比例如下：25～35％的胶冻样类芽孢杆菌、27～32％的侧孢短小芽孢杆菌、15～25％的巨大芽孢杆菌、8～14％胶质芽孢杆菌及6～12％的酿酒酵母。
12.优选地，步骤s4中的培养基由以下重量份的原料组成：干牛粪80～120份、煤渣30～40份、秸秆碎40～60份、尿素1～3份、石膏2～4份、制糖废蜜1～2份、水适量。
13.优选地，步骤s5中菌种在培养基中的发酵时间为7～8天。
14.优选地，步骤s2中至少采用两种扩增培养基进行扩增培养。
15.本发明的有益效果：
16.本发明能制备出有利于固氮净化吸收土壤重金属，改善土质的微生物菌剂，提高农作物品质。
具体实施方式
17.为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
18.实施例1
19.从冰箱中取出甘油冻管保藏的胶冻样类芽孢杆菌、侧孢短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、酿酒酵母，在经紫外灭菌的超净工作台中融解，移液无菌吸取1ml接入已灭菌的10ml液体种子活化培养基中。
20.用于活化胶冻样类芽孢杆菌的培养基成分以质量百分比计，包括0.9％的淀粉、0.4％的制糖废蜜、0.5％的磷酸氢二钾、0.5％的的硫酸镁、0.2％的豆饼粉、0.1％的硫酸锌及适量水培养基的ph值调到7.0，将培养基在115℃条件下灭菌20分钟后再用来活化胶冻样类芽孢杆菌。
21.用于活化侧孢短小芽孢杆菌的培养基为营养琼脂培养基，培养基的ph值调到7.0，将培养基在115℃条件下灭菌20分钟后再用来活化侧孢短小芽孢杆菌。
22.用于活化巨大芽孢杆菌的培养基为lb斜面培养基，lb斜面培养基在120℃条件下灭菌15分钟后再进行巨大芽孢杆菌活化。
23.用于活化酿酒酵母的培养基的成分以质量百分比计，包括1.0％的酵母膏、2.0％的蛋白胨、2％的蔗糖，将培养基在115℃条件下灭菌20分钟再用来活化酿酒酵母。
24.实施例2
25.胶冻样类芽孢杆菌接入液体种子活化培养基后，在37℃的温度条件下活化12小时；侧孢短小芽孢杆菌接入液体种子活化培养基后，在37℃的温度条件下活化12小时；巨大芽孢杆菌接入液体种子活化培养基后，在32℃的温度条件下活化12小时；酿酒酵母接入液体种子活化培养基后，在30℃的温度条件下活化24小时。
26.无菌条件下吸取活化好的各菌种1ml，接入50ml的扩增培养基中，进行一级培养。胶冻样类芽孢杆菌、侧孢短小芽孢杆菌在37℃、50rpm条件下培养12小时左右；巨大芽孢杆菌在35℃、200rpm条件下培养12小时左右；酿酒酵母在30℃、50rpm条件下培养18小时。其中，胶冻样类芽孢杆菌、侧孢短小芽孢杆菌的一级培养用扩增培养基的组成为：1％制糖废蜜，0.5％酵母膏，1％氯化钠，ph值调至7.0；酿酒酵母的的一级培养用扩增培养基组成为：2％制糖废蜜，1％酵母膏。扩增培养基均在115℃条件下灭菌20分钟后再分别用来一级培养。
27.将一级培养好的种子液以2％的接种量接入新鲜扩增培养基中进行二次培养，胶冻样类芽孢杆菌、侧孢短小芽孢杆菌在37℃、200rpm条件下培养10小时左右；巨大芽孢杆菌在30℃、100rpm条件下培养10小时左右；酿酒酵母在30℃、200rpm条件下培养15小时。其中，胶冻样类芽孢杆菌、侧孢短小芽孢杆菌的二级培养用扩增培养基的组成为：1％制糖废蜜，0.5％酵母膏，1％氯化钠，ph值调至7.0；巨大芽孢杆菌的的二级培养用扩增培养基成分为mrs；酿酒酵母的的二级培养用扩增培养基组成为：2％制糖废蜜，1％酵母膏。扩增培养基均在115℃条件下灭菌20分钟后再分别用来二级培养。
28.将二级培养所制得二级种子液按照30％的胶冻样类芽孢杆菌、30％的侧孢短小芽孢杆菌、20％的巨大芽孢杆菌、10％胶质芽孢杆菌及10％的酿酒酵母混合，即做成初始微生物混合菌剂。
29.实施例3
30.将初始微生物混合菌剂接入含糖蜜的无机盐培养基中，其中，含糖蜜的无机盐培养基由以下重量份的原料组成：干牛粪100份、煤渣35份、秸秆碎50份、尿素2份、石膏3份、制糖废蜜1.5份、水适量。然后在微好氧发酵7天，得到本发明的微生物菌剂。
31.经测试，本本发明的微生物菌剂活菌浓度》109cfu/ml，室温下能稳定保存12个月，按此比例混合，本菌剂能发挥最佳效果的条件，同时本菌剂能适应多种含磷土壤的修复处理。最佳应用条件：温度为20～40℃；ph为6.5～8.5。
32.将上述方法制备得到的微生物菌剂分别进行测试，按照土壤含磷等重金属的实际情况配置不同浓度的微生物菌剂肥，对土壤进行预埋处理。测试结果表明本微生物菌剂具有解磷、解钾的功能；具有活化土壤中硅、钙、镁中量元素的作用；具有提高铁锰铜锌钼硼供应的功效；具有提高或延长肥效，减少化肥用量；还能提高作物抗逆性，预防或减轻病害。
33.本实施例中的所有技术特征均可根据实际需要而进行修改。
34.上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本技术方案构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。
技术特征：
1.一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法，其特征在于：包括以下步骤：s1，菌种活化：挑选胶冻样类芽孢杆菌、侧孢短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、酿酒酵母分别进行活化；s2，对s1完成活化的菌种进行扩增；s3，将s2中完成扩增的菌种按比例混合制成初始混合菌剂；s4，利用制糖废蜜制作培养基；s5，将s3中初始混合菌剂放入s4的培养基中进行发酵，得到微生物菌剂。2.根据权利要求1所述的一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法，其特征在于：步骤s2中各菌种的混合比例如下：25～35％的胶冻样类芽孢杆菌、27～32％的侧孢短小芽孢杆菌、15～25％的巨大芽孢杆菌、8～14％胶质芽孢杆菌及6～12％的酿酒酵母。3.根据权利要求1所述的一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法，其特征在于：步骤s4中的培养基由以下重量份的原料组成：干牛粪80～120份、煤渣30～40份、秸秆碎40～60份、尿素1～3份、石膏2～4份、制糖废蜜1～2份、水适量。4.根据权利要求1所述的一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法，其特征在于：步骤s5中菌种在培养基中的发酵时间为7～8天。5.根据权利要求1所述的一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法，其特征在于：步骤s2中至少采用两种扩增培养基进行扩增培养。
技术总结
本发明涉及制糖废密再利用技术领域，尤其是指一种利用制糖废蜜生产微生物菌剂的方法，包括以下步骤：S1，菌种活化：挑选胶冻样类芽孢杆菌、侧孢短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、酿酒酵母分别进行活化；S2，对S1完成活化的菌种进行扩增；S3，将S2中完成扩增的菌种按比例混合制成初始混合菌剂；S4，利用制糖废蜜制作培养基；S5，将S3中初始混合菌剂放入S4的培养基中进行发酵，得到微生物菌剂。本发明能制备出有利于固氮净化吸收土壤重金属，改善土质的微生物菌剂，提高农作物品质。提高农作物品质。
技术研发人员：孟梁 潘恒玉 孟晨 刘华君 潘竟海 宋百权 阿不都卡地尔
受保护的技术使用者：新疆农业科学院经济作物研究所
技术研发日：2022.08.12
技术公布日：2022/11/25
