一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的制作方法
1.本发明涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂。
背景技术：
2.新型冠状病毒大流行对检测提出了巨大需求。目前，最流行的新型冠状病毒检测方法是通过逆转录结合聚合酶链反应检测其rna基因组。
3.基本原理是从组织、细胞、体液等多种类型样本中分离病毒rna，通过逆转录结合聚合酶链反应，将样本中微量的病毒信息成倍放大，最后以荧光信号的强弱对rna进行相对定量。具有高灵敏度、高特异性、适用样本类型广泛等优点。
4.病毒检测从采集样本开始。目前推荐的新型冠状病毒检测使用拭子从上呼吸道采集样本，或从下呼吸道采集痰或唾液。从鼻咽或口咽收集的拭子样本浸入病毒转移培养基中中以形成病毒悬浮液。病毒悬浮液立即用于检测或在4℃下储存72小时，或在-20℃下储存更长时间。病毒转移培养基中由生理盐水溶液或细胞培养基加上抗生素组成。
5.最常用的病毒核酸检测包括两个步骤:病毒核酸纯化步骤，然后是采用rt-pcr试剂和新型冠状病毒特异性探针进行检测。
6.采用上述方式，病毒核酸纯化过程会导致病毒检测时间延长，降低了对病毒的检测效率。
技术实现要素：
7.本发明的目的在于提供一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，旨在解决现有的病毒核酸检测方法的检测效率较低的问题。
8.为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，包括以下步骤：
9.将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；
10.将百里酚、2-苯基苯酚和吐温20溶解在乙二醇中，得到病毒保存组合物；
11.采集生物样本；
12.将所述生物样本与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第一反应混合物；
13.将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，同时通过核衣壳基因探针进行检测，得到第一病毒检测结果。
14.其中，在步骤将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，得到病毒检测结果之后，所述方法还包括：
15.将灭活病毒与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第二反应混合物；
16.在室温下孵育所述第二反应混合物5-30min，得到孵育组合物；
17.将所述孵育组合物与荧光反应混合物进行混合，得到第二反应混合物；
18.使用非离子去污剂对所述第二反应混合物进行处理后进行实时荧光定量分析，得到第二病毒检测结果；
19.使用所述第二病毒检测结果对所述第一病毒检测结果进行评估。
20.其中，所述碱性乙二醇组合物中的所述二醇的浓度范围为10％-25％。
21.其中，所述生物样本包括下呼吸道样本和上呼吸道采集拭子中的任意一种；
22.所述下呼吸道样本包括唾液样本和痰样本。
23.其中，所述非离子去污剂包括tween 20、triton x-100、np 40和brij 35。
24.其中，所述采集唾液样本，包括：
25.通过唾液采集储存装置抽取目标口腔内的唾液；
26.将所述唾液浸入病毒转移培养基中，得到唾液样本。
27.其中，所述唾液采集储存装置包括储存管、活塞和吸入机构，所述活塞设置于所述储存管内侧壁，所述吸入机构设置于所述储存管底部。
28.第二方面，本发明提供了一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，包括碱性乙二醇组合物和病毒保存组合物；
29.所述碱性乙二醇组合物包括二醇和碱性化合物；
30.所述碱性化合物包括碱性乙二醇溶液和聚亚烷基二醇中的任意一种；
31.所述碱性乙二醇溶液包括65g peg 200、0.252g koh和34.75g ml水；
32.所述聚亚烷基二醇包括聚乙二醇、丙二醇和聚丙二醇；
33.所述病毒保存组合物包括25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2-苯基苯酚和50mg/ml的吐温20。
34.本发明的一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，通过将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；将百里酚、2-苯基苯酚和吐温20溶解在乙二醇中，得到病毒保存组合物；采集生物样本；将所述生物样本与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第一反应混合物；将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，同时通过核衣壳基因探针进行检测，得到第一病毒检测结果，本法发明无需对病毒核酸纯化，基于碱性乙二醇组合物可以快速、可靠和灵敏地检测病毒核酸，在不到1小时的时间内通过逆转录结合聚合酶链反应检测病毒核酸，解决了现有的病毒核酸检测方法的检测效率较低的问题。
附图说明
35.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
36.图1是本发明提供的一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的流程图。
37.图2是唾液采集储存装置的结构示意图。
38.图3是唾液采集储存装置剖视图。
39.图4是图3细节a处的放大图。
40.图5是核酸提取后样本及hank’s液直扩存在大量抑制无法扩增的rt-qpcr扩增曲线图。
41.图6是核酸提取后样本及hank’s液加入不同浓度不同种类的表面活性剂后的rt-qpcr扩增曲线图。
42.图7是核酸提取样本及hank’s液加入不同浓度碱性聚乙二醇后样本的rt-qpcr扩增曲线图。
43.图8是核酸提取样本及hank’s液加入不同浓度碱性聚乙二醇和表面活性剂的rt-qpcr扩增曲线图。
44.1-储存管、2-活塞、3-吸入机构、4-橡胶圈、5-连接板、6-拉杆、7-手柄、8-弹性杆、9-密封板、10-密封垫、11-复位弹簧、12-滑杆、13-限位块、14-底板。
具体实施方式
45.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
46.请参阅图1至图8，第一方面，本发明提供一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，包括以下步骤：
47.s1将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；
48.具体的，所述碱性乙二醇组合物中的所述二醇的浓度范围为10％-25％。
49.s2将百里酚、2-苯基苯酚和吐温20溶解在乙二醇中，得到病毒保存组合物；
50.具体的，所述病毒保存组合物，其包含在溶液中或作为干燥化合物混合物的本发明化合物，用于保存生物样本中的rna，包括病毒rna，用于rna检测测试，包括直接rt-qpcr。
51.所述病毒保存组合物包含唾液和vtm，辅以百里酚(cas89-83-8)、2-苯基苯酚(cas9043-7)和吐温20(cas9005-64-5)。所得溶液病毒保存组合物包含25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2-苯基苯酚和50mg/ml的吐温20。补充唾液或vtm后，最终浓度范围为:百里酚为50pg/ml至1mg/ml，2-苯基苯酚为0.2pg/ml至30mg/ml，吐温20为0.2mg/毫升至50毫克/毫升。
52.在这些浓度下，组合物是50x储备溶液，即每ml唾液或vtm添加20ulvpc，以获得0.5mg/ml百里酚、0.4pg/ml2苯基苯酚、10mg/mltween20的最终组合物浓度。具有其他最终浓度的溶液，在本发明中对这三种化合物指定的范围内，以及仅含有百里酚和2-苯基苯酚的组合物也可以制备和用于本发明。对于本发明的rt-qpcr使用，与tween20结合使用，2苯基苯酚的最大非抑制浓度为0.5pg/ml唾液。
53.百里酚和2-苯基苯酚是已知的抗微生物化合物。两者都具有广泛的抗菌作用。百里酚可以与蛋白质结合并抑制多种酶促反应。
54.2-苯基苯酚及其钠盐和钾盐被用作广谱杀菌剂和表面杀菌剂的活性成分。
55.吐温20作为一种表面活性剂，可以通过破坏衣壳的脂质双层。tween20和tritonx100被发现可有效支持使用去污剂灭活的唾液样本对病毒核酸进行直接rt-qpcr测试。
56.s3采集生物样本；
57.具体的，所述生物样本包括下呼吸道样本和上呼吸道采集拭子中的任意一种；
58.所述下呼吸道样本包括唾液样本和痰样本。
59.所述采集唾液样本，包括：
60.s31通过唾液采集储存装置抽取目标口腔内的唾液；
61.具体的，所述唾液采集储存装置包括储存管1、活塞2和吸入机构3，所述活塞2设置于所述储存管1内侧壁，所述吸入机构3设置于所述储存管1底部。
62.在抽取唾液样本时，首先向靠近所述吸入机构3的一侧推动所述活塞2，使得所述活塞2杆移动至所述储存管1的最底部，然后将所述吸入机构3对准目标口腔的唾液处，并向远离所述吸入机构3的一侧拉动所述活塞2，并将唾液抽到所述储存管1内进行储存，减少唾液与空气的接触，避免空气中的杂质对唾液造成污染，影响后续检测的精确度。
63.具体的，所述活塞2包括橡胶圈4、连接板5、拉杆6和手柄7，所述橡胶圈4设置于所述储存管1内侧壁，所述连接板5与所述橡胶圈4固定连接，并位于远离所述储存管1的一侧，所述拉杆6与所述连接板5固定连接，并位于远离所述吸入机构3的一侧，所述手柄7与所述拉杆6固定连接，并位于远离所述连接板5的一侧。
64.所述橡胶圈4用于增加所述连接板5与所述储存管1之间的密封性，所述拉杆6用于增加所述手柄7与所述连接板5之间的间距，便于所述连接板5滑动到所述储存管1最底部时，所述手柄7仍处于所述储存管1外，便于拉动所述连接板5。
65.具体的，所述吸入机构3包括底板14、弹性杆8、密封板9和密封垫10，所述底板14与所述储存管1固定连接，并位于所述储存管1底部，所述弹性杆8设置于所述底板14内侧壁，所述密封板9与所述弹性杆8固定连接，并位于所述储存管1内，所述密封垫10与所述密封板9固定连接，并位于靠近所述底板14的一侧。
66.所述底板14为所述弹性杆8提供安装条件，所述底板14具有进液口，在所述连接板5带动所述橡胶圈4向远离所述底板14的一侧滑动时，唾液经进液口推动所述密封板9，使得所述密封板9拉动所述弹性杆8从所述底板14内侧壁滑出，此时，所述密封板9与所述底板14之间产生间隙，唾液从间隙处进入所述储存管1内，唾液抽取完成后，向靠近所述底板14的一侧推动所述连接板5，所述连接板5通过所述储存管1内的唾液推动所述密封板9，使得所述密封板9推动所述弹性杆8进入所述底板14内，并将所述底板14上的进液口封闭，所述密封板9上的所述密封垫10可提高对进液口的密封效果。此时可避免在运输环境下，所述储存管1内的唾液造成污染。在对唾液进行核酸检测时，在干净的环境下，通过所述手柄7将所述连接板5完全从所述储存管1内抽出，此时，最后将所述储存管1内的唾液倒出即可。
67.具体的，所述弹性杆8包括复位弹簧11、限位块13和滑杆12，所述复位弹簧11与所述底板14固定连接，并位于所述底板14内侧壁，所述限位块13与所述复位弹簧11固定连接，并与所述底板14滑动连接，并位于所述底板14内侧壁，所述滑杆12与所述限位块13固定连接，并与所述密封板9固定连接，并位于所述限位块13与所述密封板9之间。
68.所述限位块13将所述滑杆12连接在所述复位弹簧11上，所述复位弹簧11在所述储存管1运输过程中通过所述滑杆12拉动所述密封板9与所述底板14紧密接触，对所述进液口进行密封。
69.s32将所述唾液浸入病毒转移培养基中，得到唾液样本。
70.具体的，vtm，病毒转移培养基，一种用于储存和转移含有病毒的生物样本的液体，
有时被指定为通用转移培养基(utm)。通常与含有上呼吸道标本的拭子或口腔拭子一起使用。
71.s4将所述生物样本与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第一反应混合物；
72.s5将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，同时通过核衣壳基因探针进行检测，得到第一病毒检测结果。
73.具体的，所述核衣壳基因探针包括检测sars-cov-2基因组核衣壳基因o和n区的探针。
74.本发明优选的样本是唾液(痰)。通常，收集1ml至3ml，优选1ml唾液，但也可以收集其他体积更小或更大的唾液。收集的唾液可立即使用，室温保存5小时，或在4℃保存2天，或在-20保存更长时间。
75.唾液是一种在体内支持活病毒的生物液体，也能够在体外条件下维持病毒。与新型冠状病毒的情况一样，单链rna基因组受到衣壳的保护，免受降解，衣壳由结合核蛋白、膜蛋白和刺突糖蛋白的蛋白质基质组成。
76.具体的，最优选的组合物被制成包含两体积的唾液或vtm和一种碱性peg200溶液。碱性peg200溶液是包含65％peg200和45mmkoh的水溶液。
77.因此，最优选的碱性乙二醇加工组合物包含按体积计:67％(v/v)的唾液和21.7％(v/v)的peg200，以及按重量计:65％的唾液和22.8％的peg200。
78.由于组合物中二醇的量为约10％至低于25％，碱的体积约为0.3％，因此生物样本的体积可高达组合物体积的约90％。组合物中生物样本的最低体积可以是少量动物细胞的体积。在小体积样品的情况下组合物包含碱性乙二醇溶液和额外量的水，以达到本发明指定范围内的最终乙二醇浓度和ph值。
79.在组合物加工过程中，病毒核酸从病毒包膜中释放出来，可用于包括逆转录和rt-pcr在内的酶促反应。唾液等生物样本含有抑制rt-pcr的碳水化合物和蛋白质，包括核糖核酸酶。含有乙二醇和高碱性ph值的加工组合物可降低这些抑制剂的作用，并允许通过直接rt-pcr有效检测病毒rna，无需rna纯化。组合物的碱性ph范围为ph11.5至ph14.0，优选的ph范围为ph11.8至ph13.0，最优选的范围为ph12.2至ph12.8。组合物的碱性ph值由强矿物碱(如koh和/或naoh)和二醇维持。
80.s6将灭活病毒与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第二反应混合物；
81.s7在室温下孵育所述第二反应混合物5-30min，得到孵育组合物；
82.具体的，在室温下孵育组合物5分钟至30分钟。如有必要，组合物中的孵育时间可延长至1小时。
83.s8将所述孵育组合物与荧光反应混合物进行混合，得到第二反应混合物；
84.具体的，孵育后，组合物添加到专为rt-qpcr反应混合物中。组合物与rt-qpcr反应混合物混合后，所得组合物的ph值显着降低，并在8.0至8.5的范围内，这是最佳rt-qpcr性能所需的。因此，无需对rt-qpcr进行ph调节步骤来降低ag加工组合物的高碱度
85.s9使用非离子去污剂对所述第二反应混合物进行处理后进行实时荧光定量分析，得到第二病毒检测结果；
86.具体的，在本发明中，用于rt-qpcr反应混合物的试剂盒的推荐组合物包含浓度为约0.1％至约5％的非离子去污剂，包括tween20、tritonx-100、np40和brij35。
87.s10使用所述第二病毒检测结果对所述第一病毒检测结果进行评估。
88.具体的，在组合物和rt-qpcr中使用非抑制性化合物对于sars-cov-2检测的有效性至关重要。
89.术语定义：
90.道尔顿，符号da，摩尔质量单位，1da＝1g/mol。
91.rt，逆转录酶催化的反应，从rna模板生成互补dna。
92.rt-lamp，环介导等温扩增，rt-lamp用于从rna序列合成(cdna)。该cdna的扩增通过使用dna聚合酶和识别目标dna序列内互补区域的四个引物进行链置换而发生。
93.rt-pcr，逆转录聚合酶链式反应，结合rna模板的逆转录以产生互补dna，并使用与目标dna区域互补的序列特异性引物通过聚合酶链式反应(pcr)扩增dna。
94.rt-qpcr，定量rt-pcr，rt-pcr的一个子组，用于定量(量化)rna分子的数量，包括病毒rna和信使rna。
95.直接rt-qpcr，用于检测rna的rt-qpcr，其中生物样品直接进行rt-qpcr以对样品的rna进行定量，无需rna纯化步骤。直接rt-qpcr可能涉及样品的简单处理，例如加热和/或与化合物一起孵育以改善rna检测。
96.ct，定量pcr和rt-qpcr中的临界阈值(ct)，荧光曲线表现出最大曲率并超过背景荧光阈值的扩增循环。ct用作pcr中产物积累的定量测量。
97.本发明的新型冠状病毒检测测试基于碱性乙二醇(ag)组合物处理，可以快速、可靠和灵敏地检测病毒核酸，可以自动化或手动设置。可以处理唾液或拭子样本，在不到1小时的时间内通过逆转录结合聚合酶链反应(rt-pcr)检测病毒核酸。使用ag处理消除了对rna纯化步骤的需要，并且不需要加热样本。含有新型冠状病毒(sars-cov-2)的样本通过在室温下在ag处理组合物中孵育进行处理。该处理基于生物样本的乙二醇-碱性处理，优选在ph12.2至ph12.8在此过程中，病毒rna可用于rt反应，并且rt-pcr的抑制剂被充分灭活，从而检测到目标rna与使用纯化rna的测试相当。直接处理组合物中的简单孵育无需进行核酸提取来检测病毒核酸。
98.本发明公开了用于检测病毒rna的组合物和方法，包括收集、处理和检测生物样本中的病毒核酸。
99.本发明使用碱性乙二醇处理含有病毒的生物样本，用于病毒核酸检测测试，包括rt-pcr。
100.本发明的碱性乙二醇处理导致病毒充分裂解和生物样本中存在的rt-pcr抑制剂失活，从而允许通过直接rt-qpcr有效检测病毒rna，无需病毒rna提取纯化步骤。
101.本发明的组合物和方法简化了检测病毒核酸的检测。同时，本发明的病毒rna检测的灵敏度与包括提取纯化病毒核酸检测方法相当。
102.第二方面，本发明提供了一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，包括碱性乙二醇组合物和病毒保存组合物；
103.所述碱性乙二醇组合物包括二醇和碱性化合物；
104.所述碱性化合物包括碱性乙二醇溶液(peg200，平均分子量为200的聚乙二醇)和
聚亚烷基二醇中的任意一种；
105.所述碱性乙二醇溶液包括65gpeg200、0.252gkoh和34.75gml水；
106.所述聚亚烷基二醇包括聚乙二醇、丙二醇和聚丙二醇；
107.所述病毒保存组合物包括25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2-苯基苯酚和50mg/ml的吐温20。
108.具体的，peg200为65％，指化合物的重量百分比相对于含有所述化合物的溶液的总重量。例如，20％乙二醇水溶液中含有20g乙二醇和80g水。koh为45mm。％(v/v)是指化合物或化合物混合物在含有所述化合物的溶液中的体积百分比。
109.所述碱性乙二醇组合物包含二醇和聚亚烷基二醇，例如:聚乙二醇、丙二醇、聚丙二醇。优选的二醇是聚乙二醇。本发明中使用的聚乙二醇或peg可商购获得，其分子量范围为200至100，000da。优选的分子量范围是200da到10，000da，最优选的分子量是200da。用于碱性乙二醇加工的组合物中二醇的浓度范围为约10％至低于25％，优选浓度为20％至23％。
110.图5至图8中，δrn＝r+n-r-n,计算δrn,其中,r+n是表示每点测量的荧光强度,r-n表示荧光基线强度。实时荧光定量pcr是利用荧光信号的变化，实时检测pcr扩增反应中每次循环扩增产物量的变化，通过循环阈值和标准曲线的分析对标本中起始模板拷贝数进行定量分析。
111.cycle：是扩增循环数，在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，使每一个循环变得“可见”，最后通过循环阈值(cycle threshold，ct)和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
112.以上所揭露的仅为本发明一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。
技术特征：
1.一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；将百里酚、2-苯基苯酚和吐温20溶解在乙二醇中，得到病毒保存组合物；采集生物样本；将所述生物样本与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第一反应混合物；将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，同时通过核衣壳基因探针进行检测，得到第一病毒检测结果。2.如权利要求1所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，在步骤将所述反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，得到病毒检测结果之后，所述方法还包括：将灭活病毒与所述碱性乙二醇组合物组合后置于所述病毒保存组合物中进行保存，得到第二反应混合物；在室温下孵育所述第二反应混合物5-30min，得到孵育组合物；将所述孵育组合物与荧光反应混合物进行混合，得到第二反应混合物；使用非离子去污剂对所述第二反应混合物进行处理后进行实时荧光定量分析，得到第二病毒检测结果；使用所述第二病毒检测结果对所述第一病毒检测结果进行评估。3.如权利要求1所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，所述碱性乙二醇组合物中的所述二醇的浓度范围为10％-25％。4.如权利要求1所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，所述生物样本包括下呼吸道样本和上呼吸道采集拭子中的任意一种；所述下呼吸道样本包括唾液样本和痰样本。5.如权利要求2所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，所述非离子去污剂包括tween 20、tritonx-100、np 40和brij 35。6.如权利要求2所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，所述采集唾液样本，包括：通过唾液采集储存装置抽取目标口腔内的唾液；将所述唾液浸入病毒转移培养基中，得到唾液样本。7.如权利要求2所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，所述唾液采集储存装置包括储存管、活塞和吸入机构，所述活塞设置于所述储存管内侧壁，所述吸入机构设置于所述储存管底部。
8.一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，应用于权利要求6所述的用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂的检测方法，其特征在于，包括碱性乙二醇组合物和病毒保存组合物；所述碱性乙二醇组合物包括二醇和碱性化合物；所述碱性化合物包括碱性乙二醇溶液和聚亚烷基二醇中的任意一种；所述碱性乙二醇溶液包括65g peg 200、0.252g koh和34.75g ml水；所述聚亚烷基二醇包括聚乙二醇、丙二醇和聚丙二醇；所述病毒保存组合物包括25mg/ml的百里酚、20pg/ml的2-苯基苯酚和50mg/ml的吐温20。
技术总结
本发明涉及生物化学技术领域，具体涉及一种用于新型冠状病毒快速核酸检测的直扩试剂，包括将二醇与碱性化合物按照预设比例组合，得到碱性乙二醇组合物；将百里酚、2-苯基苯酚和吐温20溶解在乙二醇中，得到病毒保存组合物；采集生物样本；将生物样本与碱性乙二醇组合物组合后置于病毒保存组合物中进行保存，得到第一反应混合物；将反应混合物中的病毒核酸从病毒包膜中释放出来进行逆转录结合聚合酶链反应，同时通过核衣壳基因探针进行检测，得到第一病毒检测结果，本法发明无需对病毒核酸纯化，在不到1小时的时间内通过逆转录结合聚合酶链反应检测病毒核酸，解决了现有的病毒核酸检测方法的检测效率较低的问题。检测方法的检测效率较低的问题。检测方法的检测效率较低的问题。
