常用蛋白酶切割位点

2023年12月12日发(作者：团支委)

常用融合蛋白切割位点

PROTEASE

Thrombin （凝血酶）

COMPANY Protea Capture

Amersham-Biosciences, Novagen,

Leu-Val-Pro-Arg▼Gly-Ser

SIGMA, Roche

L-V-P-R▼G-S

Factor Xa （Xa因子）

Ile-Glu/Asp-Gly-Arg▼

I-E/D-G-R▼

Enterokina （肠激酶）

New England Biolabs,

Asp-Asp-Asp-Asp-Lys▼

Novagen, Roche

D-D-D-D-K▼

TEV protea （烟草蚀纹病毒蛋白酶）

Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln▼Gly

E-N-L-Y–F-Q▼G

PreScission （PreScission 蛋白酶）

Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln▼Gly-Pro

L-E-V-L-F-Q▼G-P

TAGZyme （标记酶）

Qiagen

His-tag removal by Exoproteolytic Digestion

Intein Site （内含肽）

New England Biolabs

dithiothreitol cleavage（二硫苏糖醇清除）

HRV 3C Protea（3c蛋白酶）

Novagen

Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln▼Gly-Pro

Ni-NTA (6His recomb. enzyme)

DTT elimination by dialysis （透析）

Ni-NTA (6His recomb. enzyme)

Amersham-Biosciences GSTrap for GST fusion enzyme

Invitrogen – Life Technologies Ni-NTA (6His recomb. TEV)

Trypsin Inhibitor-Agaro

Amersham-Biosciences,

New England Biolabs,

Roche

Benzamidine-Agaro

Benzamidine-Agaro L-E-V-L-F-Q▼G-P

SUMO Protea

Invitrogen – Life Technologies,

recognize the tertiary structure of the ubiquiLifeSensors

tin-like (UBL) protein, SUMO

Ni-NTA (6His recomb. enzyme)

Kex-2

Invitrogen – Life Technologies,

-Arg-X-Lys/Arg-Arg▼

Arg前为lys效率最高，不切-Arg-lys，Pro影响KEX2切割

羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg；羧肽酶

羧肽酶A可以切割C端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸，但如果倒数第二个氨基酸为Pro两种羧肽酶均不能作用

KEX2对arg的专一性高，要求最重要。

Ni-NTA (6His recomb. enzyme)

1.胰蛋白酶属肽链内切酶，能把多肽链中Lys和Arg残基中的羧基侧切断。

2.胰凝乳蛋白酶（亦称糜蛋白酶）属肽链内切酶，主要切断多肽链中的芳香族氨基酸（Phe、Trp、Tyr）残基的羧基一侧。

3.羧肽酶（分A和B型），一般的题目中没有特别指明的话就是两种类型的功能都具备，可以从羧基端切除氨基酸（若羧基端的第1个或第2个氨基酸为Pro的则不能切除）。

4.溴化氰处理，专一性的切割甲硫氨酸羧基端的肽键。