牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

2023年12月12日发(作者：树状图怎么做)

牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

肠激酶(enterokina, EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD 1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、 rEKL (recombinant

enterokina light chain, rEKL) 纯化、 N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、 N端15个氨基酸序列与文献报道一致. 图5 参17

作 者：李德华 苟兴华 胡海洋 徐琦 刘忠荣 吴洽庆 余晓东 LI

Dehua GOU Xinghua HU Haiyang XU Qi LIU Zhongrong WU

Qiaqing YU Xiaodong 作者单位：李德华,LI Dehua(重庆师范大学生命科学院,重庆,400047;成都地奥制药集团有限公司,成都,610041)

苟兴华,胡海洋,刘忠荣,GOU Xinghua,HU Haiyang,LIU

Zhongrong(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041)

徐琦,XU Qi(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041;四川大学化工学院,成都,610065)

吴洽庆,WU Qiaqing(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041;中国科学院成都生物研究所,成都,610041)

余晓东,YU Xiaodong(重庆师范大学生命科学院,重庆,400047)

刊 名：应用与环境生物学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE

JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY 年，卷(期)：2006 12(6) 分类号：Q78 关键词：肠激酶(enterokina,EK) 甲醇酵母(Pichia pastoris) 高密度发酵