作者：李玉萍，曾宪伟 ，叶军，苏虎 ,刘华，周春丽
【摘要】 目的观察马齿苋活性成分对人肺腺癌细胞系(a-549 cell)、人喉表皮样癌细胞系(hep-2 cell)、人宫颈癌细胞系(hela cell)和人恶性胚胎横纹肌瘤细胞系（rd cell）生长的影响。方法体外培养条件下用不同浓度的马齿苋活性成分处理4种癌细胞，通过溴化二甲噻唑二苯四氮唑（mtt）试验法测定癌细胞的增殖；同时处理s180荷瘤小鼠，观察荷瘤小鼠的体重、瘤重、死亡率和抑瘤率。结果马齿苋生物碱对离体培养的a-549肺癌细胞、hela细胞和hep-2细胞的增殖均具有明显抑制作用,马齿苋多糖对hela细胞有较强的抑制作用, 马齿苋脂肪酸对hep-2细胞有一定的抑制作用，马齿苋黄酮对rd细胞有很强的抑制作用，并存在浓度剂量效应，高浓度抑制作用强。结论马齿苋活性成分能选择性地杀伤癌细胞，有进一步研究的潜在价值。 【关键词】 马齿苋； 活性成分； 溴化二甲噻唑二苯四氮唑试验； 抗肿瘤活性
1 仪器与材料
1.1 仪器与试剂rpmi 1640培养液：美国gibco公司产品；胎牛血清（fbs）：杭州四季青生物
工程有限公司产品； 溴化二甲噻唑二苯四氮唑 (mtt)、胰蛋白酶和二甲基亚砜(dmso)为amresco公司产品；其余试剂均为国产分析纯(国药集团)。倒置荧光显微镜(ix-71)：日本olympus产品；二氧化碳培养箱(thermo forma ries-ii，美国 thermo scientific，forma公司)产品；全自动酶标仪(multiscan mk3, labsystems公司)产品。
1.2 材料新鲜马齿苋portulaca oleracea l.于2005-09购于江西省南昌市农贸市场，经本校药学院药 理学 教研室鉴定。用清水洗净，沥干水分，60℃鼓风干燥6 h，粉碎备用。称取上述备用马齿苋干粉50 g，加蒸馏水（按1∶30的比例分3次加蒸馏水），煮沸后煎20 min，取其上清液减压浓缩使其生药浓度为2 g/l，得粗提取液，置4℃冰箱保存备用。同时，称取相同重量的马齿苋干粉，分别采用周晶［4］、上官新晨［5］、黄阿根［6］等的方法提取马齿苋粗多糖、不饱和脂肪酸、生物碱、黄酮及定量，所得样品4℃干燥保存备用。临用时配制使用。
2 方法
2.1 细胞株及体外抑瘤作用观察
2.1.1 肿瘤株选用人肺腺癌细胞(a-549 cell)和人宫颈癌细胞(hela cell) 由南昌大学医学院第二附属 医院 细胞研究室友情提供，人喉表皮样癌细胞(hep-2 cell)和人恶性胚胎横纹肌瘤细胞（rd cell）由江西省疾控中心友情提供。
2.1.2 马齿苋活性成分对a-549 细胞生存能力的影响选对数生长期的a-549细胞，用0.25％胰蛋白酶消化后，用含10％fbs的rpmi1640培养液制成5×104个细胞/ ml，接种于96孔板中培养24 h后， 吸去上清液。阴性对照组加入同体积的未添加马齿苋活性成分的培养液；实验组分别加入含有终浓度为10， 50， 100， 200 μg/m1的总提取液、多糖、不饱和脂肪酸、生物碱、黄酮的培养液处理4 h后，更换培养液继续培养24 h，采用mtt法间接测定癌细胞生存能力［7］，按公式 计算 其抑瘤率。抑瘤率(％)=［(对照组a值一实验组a值)／对照组a值］×100%。
2.1.3 马齿苋活性成分对hep-2细胞、hela细胞和rd细胞的作用实验方法与“2.1.2”项基本相同，不同之处是：取指数生长期的hep-2 cell、rdcell和hela cell，用含10% fbs的dmem培养液配制成1×105个细胞/ml悬液，接种于96孔板中，随后的处理同“2.1.2”项。
2.2 实验动物及体内抑瘤作用观察
2.2.1 实验动物及瘤株昆明种小鼠，雌雄各半，5周龄，体质量19～23 g，由江西省医学实验动物中心提供(合格证号：021-97-03)，一级动物。实验小鼠肉瘤s180腹水型瘤株由江西省医学实验动物中心提供。
2.2.2 小鼠s180实体瘤模型建立与分组s180肉瘤细胞接种选择接种s180细胞后1周的小鼠脱颈椎处死，无菌条件下抽取腹水，用生理盐水调节细胞浓度至1×107 个细胞/ml。以每只小鼠0.2 ml接种于小鼠右腋下皮下。将动物随机分为6组，每组6只，其中一组为阴性对照组，其余5组为实验组。
2.3 统计学处理实验结果以±s表示，计量资料用方差分析法分析，用t检验统计处理。p<0.05被认为两变量之间有统计学显著性差异。
