HPLC法同时测定辣椒面中碱性橙2,21,22和酸性橙II的含量

HPLC法同时测定辣椒面中碱性橙2,21,22和酸性橙II的含

量

杨园园;许乾丽;黎殊

【摘 要】建立辣椒面中碱性橙2,21,22和酸性橙II的高效液相色谱(HPLC)同时测

定的方法.样品经70％乙腈超声提取后离心,采用C18色谱柱分离,以乙腈和10

mmol/L乙酸铵水溶液(乙酸0.12％)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,

紫外检测器进行检测.结果表明:碱性橙2,21,22在1～9μg/mL和酸性橙II在0.1～

0.9μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,样品在添加水平为0.1～0.6 mg/kg时,

平均回收率为91％～107％,相对标准偏差(RSD)为1.1％～7.8％.该方法具有操作

简单、重复性好和准确度高等优点,适用于辣椒面中碱性橙2,21,22和酸性橙II的

测定.%A method is developed for the determination of basic orange

2,21,22 and acid orange II levels in chili power by high performance liquid

chromatography(HPLC).The samples are extracted with 70％

acetonitrile,and then parated on a C18 column,and detected by HPLC-

photodiode array detector, with acetonitrile and 10 mmol/L ammonium

acetate solution (0.12％ acetic acid)as a mobile pha, the flow rate is 1.0

mL/ results show that a good linear relation with the basic orange

2,21, 22 in the concentration range of 1～9μg/mL and the acid orange II in

the concentration range of 0.1～0.9μg/mL is average

recoveries are 91％～107％,with the relative standard deviation (RSD)of

1.1％～7.8％ under the addition level of 0.1～0.6 mg/ method has

the advantages of simple operation,good repeatability and high

accuracy,and can be applied to the detection and analysis of basic orange

2,21,22 and acid orange II levels in chili powder.

【期刊名称】《中国调味品》

【年(卷),期】2018(043)006

【总页数】3页(P165-167)

【关键词】辣椒面;HPLC;碱性橙2;碱性橙21;碱性橙22;酸性橙II

【作 者】杨园园;许乾丽;黎殊

【作者单位】贵州省食品检验检测所,贵阳 550001;贵州省食品检验检测所,贵阳

550001;贵州省食品检验检测所,贵阳 550001

【正文语种】中 文

【中图分类】TS207.3

辣椒面作为贵州具有特色的辣椒制品，深受消费者喜爱。近年来，因违法添加染料

等非食用物质而导致的食品安全事故时有报道。卫生部在2008年以来就陆续发布

了5批《食品中可能违法添加的非食用物质名单和易滥用的食品添加剂名单》,其

中就包括碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22和酸性橙II等非食用物质，这4种属

于染料，由于其着色稳定、价格低廉，被一些商家非法添加到辣椒面中以改善色泽。

但长期接触这些染料可能会致癌，因此严禁将此使用于食品中。为此，建立简单、

快速、准确的检测方法变得尤其重要。通过文献报道，染料类物质的检测方法主要

有高效液相色谱法[1-5]、高效液相色谱-质谱法[6]等，目前关于同时测定辣椒面中

碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22和酸性橙II的国标方法未见报道。本实验通过

提取、离心、测试，建立了辣椒面中碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22和酸性橙II

的HPLC测定方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器

戴安Ultimate 3000高效液相色谱仪；Chromeleon 7.0工作站 美国Thermo

Fisher公司；电子天平 梅特勒-托利多仪器有限公司；离心机 长沙平凡仪器仪表

有限公司；XW-80A涡旋振荡器 海门市其林贝尔仪器制造有限公司。

1.2 材料

碱性橙2对照品(批号：6A15G020， 98%)；碱性橙21对照品(批号：4A14K050，

100%)；碱性橙22对照品(批号：6A16G050，100%)；酸性橙II对照品(批号：

C1573500，德国torfer，96.3%)；乙腈(色谱纯，默克公司)；乙酸铵、

乙酸(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)；辣椒面样品(贵州省食品药品监督管理局

稽查部门抽样提供)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制

分别精密称取碱性橙2 对照品0.01096 g、碱性橙21对照品0.01071 g、碱性橙

22对照品0.01036 g、酸性橙II对照品0.01012 g，置于100 mL量瓶中，加少

量水溶解，再加50%甲醇至刻度，得到4种对照品储备液，浓度分别为107.41，

107.1，103.6，97.456 μg/mL。

吸取酸性橙II储备液10 mL于100 mL量瓶中，加水至刻度摇匀，制得溶液浓度

为9.7456 μg/mL。

加标实验所需的标准溶液：分别吸取碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22储备液各

1.00 mL，酸性橙II储备液0.5 mL于25 mL容量瓶中，加水至刻度摇匀，制得碱

性橙2、碱性橙21、碱性橙22和酸性橙II溶液浓度分别为4.296，4.284，

4.144，1.949 μg/mL。

2.2 样品溶液的制备

准确称取5 g样品于50 mL塑料离心管中，加入10 mL 70%乙腈水溶液，超声提

取20 min后，以4000 r/min离心10 min，取20 μL液相色谱测定。

2.3 色谱条件

2.3.1 色谱柱

Capcell PAK C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)。

2.3.2 流动相

A:乙腈；B：10 mmol/L 乙酸铵水溶液(乙酸0.12%)0 min→14 min(A：

30%→82%)；14 min→15 min(A：82%→82%)；15 min→16 min(A：

82%→30%)。

2.3.3 检测波长

酸性橙II和碱性橙2为450 nm；碱性橙21和碱性橙22为485 nm；柱温：

35 ℃；流速：1.0 mL/min。分别吸取标准溶液和样品加标溶液注入色谱仪，其色

谱图见图1。

图1 A：混合标准溶液色谱图；B:加标样品溶液色谱图Fig.1 A:The

chromatogram of mixed standard solution; B:The chromatogram of spiked

sample solution

2.4 方法学考察

2.4.1 碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、酸性橙II的线性关系考察

分别精密吸取碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、酸性橙II每种各1，3，5，7，9

mL于100 mL容量瓶中，制备成混合标准溶液。注入液相色谱仪，进样体积为

20 μL，记录峰面积A，以峰面积A对浓度C(μg/mL)进行线性回归计算，结果见

表1。

表1 碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、酸性橙II的回归方程、线性方程和线性范

围Table 1 The regression equation, linear equation and linear range of

basic orange 2, basic orange 21, basic orange 22 and acid orange II化合物

相关系数(R)线性方程线性范围(μg/mL)检测波长(nm)检出限(mg/kg)碱性橙

20.9996y=1.0469x-0.514161.074～9.6654500.02碱性橙

210.9998y=1.4192x-0.671921.071～9.6404850.02碱性橙

220.9995y=2.314x-1.87481.036～9.3254850.02酸性橙II0.9998y=1.0876x-

0.061330.0974～0.8774500.02

2.4.2 精密度测试

取标准曲线第二点，即碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22标准溶液浓度为3

μg/mL，酸性橙II为0.3 μg/mL，连续进样6次，每次20 μL，测得碱性橙2、

碱性橙21、碱性橙22、酸性橙II峰面积的RSD分别为0.5%，1.0%，0.8%，

1.6%。结果表明：本实验所用仪器精密度良好。

2.4.3 回收率测试

准确称取5 g样品(精确至0.01 g)，共9份，置于50 mL塑料离心管中，加入标

准溶液(碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22浓度分别为4.296，4.284，4.144

μg/mL)各0.25，0.5，0.75 mL，1.949 μg/mL酸性橙II各加入 0.3，1.0，1.5

mL，按2.2项下制备加标样品溶液，取20 μL样品溶液注入液相色谱仪测定,结果

见表2。

表2 回收率和RSD结果表Table 2 The results of recoveries and RSDs参数名

称背景值(mg/kg)添加量(mg/kg)检测值(mg/kg)平均回收率

(%)RSD(%)0.2150.195917.8碱性橙

2<0.020.4300.404942.20.6440.601933.30.2140.2181025.4碱性橙

21<0.020.4280.411961.50.6430.611953.10.2070.2211074.2碱性橙

22<0.020.4140.397962.60.6220.603971.80.1170.1191021.4酸性橙

II<0.020.3900.359921.10.5850.550941.5

由表2可知，加标含量在0.1～0.6 mg/kg之间，回收率在91%～107%之间，

RSD在1.1%～7.8%之间，符合食品理化检测(GB/T 27404-2008《实验室质量控

制规范 食品理化检测》的要求。

2.4.4 检出限测试

准确称取5.00 g样品(精确至0.01 g)，置于50 mL塑料离心管中，加入经稀释的

标准溶液(碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、酸性橙II的浓度分别为0.2148，

0.2142，0.2072，0.1949 μg/mL)0.5，1.0，1.5 mL，按2.2项下制备样品溶液。

取20 μL样品溶液注入液相色谱仪测定。记录保留时间和峰面积，当峰面积与基

线噪声比值(S/N)为3时，以此时所加标的量来计算实际检出限。测得当碱性橙2、

碱性橙21、碱性橙22、酸性橙II的加标浓度分别为0.1074，0.1071，0.1036，

0.09745 μg/mL时，S/N为3，当称样量为5 g时，碱性橙2、碱性橙21、碱性

橙22、酸性橙II的实际检出限为0.2 mg/kg。

3 讨论

最近2年，在进行国家监督抽检和省级监督抽检的辣椒面样品中，偶有发现添加

非食用物质的情况，尤其是违法添加工业染料酸性橙、碱性橙等，本实验室以辣椒

面为基质，探索同时检测碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22、酸性橙II的高效液相

色谱法。该方法处理简单、快速，重复性和准确度可靠，可用于辣椒面中碱性橙2、

碱性橙21、碱性橙22、酸性橙II的含量测定，为监控辣椒面的质量提供可靠、快

速的依据。

参考文献：

[1]李晶，李雪梅，徐济仓，等.超高效液相色谱法快速分离测定糖精钠、芝麻酚、

酸性橙II和碱性嫩黄[J].光谱实验室，2013，30(3)：1311-1315.

[2]王荣艳，贾丽，范筱京.高效液相色谱法测定食品中非食用色素[J].食品研究与开

发，2010，3(11)：164-166.

[3]范文锐，吴青，劳扬，等.高效液相色谱法同时测定食品中7种非食用色素[J].分

析化学，2012，40(2)：292-297.

[4]冯然军，粟智，刘俊.高效液相色谱法同时测定功能饮料中7种禁用酸性染料[J].

现代化工，2014，34(12)：158-160.

[5]徐琴，刘琳，傅余强，等.高效液相色谱法测定食品中的酸性橙II[J].食品科学，

2010，31(2)：219-222.

[6]刘华良，荣维广，王联红，等.液相色谱串联质谱法检测鲍鱼汁中的酸性橙II[J].

中国食品卫生杂志，2010，22(1)：16-18.