槲皮素、白藜芦醇、维生素E 抗衰功效

2024年4月2日发(作者：动员大会)

China Cosmetics Review

槲皮素、白藜芦醇、维生素E

抗衰功效研究

文｜薛文斌 卢正君 董长青

目的：研究三种原料槲皮素、白藜芦醇、维生素E化妆品抗衰功效上的应用。方法：DPPH自由基清除实验

检测槲皮素、白藜芦醇、维生素E的抗氧化能力。MTT法检测槲皮素、白藜芦醇、维生素E对人真皮成纤

苷酶染色检测细胞衰老情况。结果：槲皮素、白藜芦醇、维生素E都具有清除DPPH的能力，且呈剂量依赖性。

MTT结果显示槲皮素、白藜芦醇均在0.556mg/mL浓度范围内对细胞无毒性，维生素E在1.667mg/mL

的染色面积。结论 槲皮素、白藜芦醇、维生素E能够清除自由基抗氧化，抑制细胞衰老，可在化妆品抗衰

功效上有一定的应用。

浓度范围内对细胞无毒性；

β

-半乳糖苷酶染色显示，槲皮素、白藜芦醇、维生素E均能减少诱导衰老细胞

维细胞（HDF）的毒性；选择无毒性浓度进行抗衰测试，通过高糖培养HDF构建细胞衰老模型，

β

-半乳糖

关键词：槲皮素；白藜芦醇；维生素E；抗衰；HDF细胞；

β

-半乳糖苷酶

物学上讲，细胞具有有限的分裂倾向，细胞每次分裂，染

这一过程不

细胞就会进入生长停滞期，无法继续增殖

[1]

。

在因素会加速皮肤衰老，比如光老化，化学物刺激，环境

英国的Harman于1956年提出自由基学说，指出自由基

加速细胞衰老。

终引起细胞损伤

[2]

，

可逆，称为自然衰老。然而，除了自然衰老外，还有各种外

影响等，这些外在因素也是化妆品抗衰开发的重点方向。

延缓皮肤衰老一直是化妆品研究领域的热点，从生

色体端粒都会缩短，缩短到一定程度则触发DNA损伤，

此外槲

素具有很强的抗氧化能力，能够抵抗多种自由基

[4]

，

研究发现，槲皮

如芦丁(芸香苷)、槲皮苷、金丝桃苷等

[3]

。

皮素还能促进人成纤维细胞增殖，提高人成纤维细胞透明

白藜芦醇（Resveratrol），一种植

质酸和胶原蛋白含量

[5]

。

物多酚，广泛存在于自然界中，虎杖、藜芦、葡萄、花生、凤

梨等植物或水果中都含有白藜芦醇。研究发现，白藜芦醇对

可提升

H

2

O

2

诱导的HaCaT细胞氧化损伤具有保护作用，

醇还能降低人皮肤成纤维细胞UVB照射后基质金属蛋白

具有很强的抗炎作用，可显著降低大鼠炎症模型各种炎症

白藜芦

H

2

O

2

处理后HaCaT细胞SOD和GSH-Px活性

[6]

。

大量、过多的积累，会产生氧化应激，损伤细胞核及线粒

体DNA，导致生物膜脂质过氧化、蛋白质交联变性等，最

的关注。槲皮素（Quercetin），存在于许多植物的花、叶、

近年来，天然植物提取物的抗衰功效越来越受到人们

另外，白藜芦醇还

酶MMP-1活性，并减少细胞凋亡率

[7]

。

果实中，常取自豆科植物槐的干燥花蕾，多以苷的形式存在，

现的维生素之一，在食油、水果、蔬菜及粮食中均存在。天

维生素E（VE），又名生育酚或产妊酚，是最早发

指标

[8]

。

研究发现，VE能够对

然VE是一种强有效的抗氧化剂

[9]

，

101

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研究应用

Rearch And Application

起到防护作用，提高UVA照射后I型和Ⅲ型胶原蛋白的表

关于化妆品抗衰的研究目前主要集中在抗氧化以及

达

[11]

。

提高胶原蛋白含量上，对于化妆品是否可以从整体上抑制

VE三种原料在化妆品抗衰功效上的应用。

实验材料

1.1受试样品

还能对UVA诱导的人皮肤成纤维细胞光损伤

护作用

[10]

。

H

2

O

2

诱导的人脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤起到保

制完成后，按反应表格加样，轻轻摇匀，室温下避光静置

反应5分钟，在酶标仪517nm附近测定吸光值；后室温

样要求具体见表1。

避光静置反应24h，再次在517nm附近测定吸光值。加

细胞衰老的研究较少，本研究通过DPPH自由基清除实验

白藜芦醇、

结合

β

-半乳糖苷酶细胞染色实验来探讨槲皮素、

样品溶液（μl）

95%乙醇（μl）

DPPH乙醇溶

液（μl）

平行次数

95%乙醇溶剂

（μl）

100

50

-

50

100

50

-

50

150

50

-

-

表1 DPPH自由基清除实验样品加样表

溶剂本底

150

50

-

-

01

自DSM Nutritional Products China，人真皮成纤维细

基、DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素链霉素双抗、

胰蛋白酶购自Gibco；台盼蓝购自Thermo；MTT购自

Biosharp；二甲基亚砜（DMSO）购自Admas-Beta；β-

科技有限公司。

1.2仪器设备

槲皮素购自Indena、白藜芦醇购自Symri、VE购

3/样1/样3/样1/样

胞购自广东博溪生物科技有限公司；DMEM低糖培养

2.2细胞培养及传代

T75培养瓶中，低糖DMEM（含10%胎牛血清和1%青霉

融合率为80%~90%时进行传代，用0.25%的胰蛋白酶

消化细胞，离心吹打混匀，传代培养，以每瓶2.0×10

6

个

人真皮成纤维细胞以每瓶2.0×10

6

个细胞接种于

半乳糖苷酶染色试剂盒购自上海联迈生物工程有限公司；

DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）购自上海联硕生物

待细胞

素链霉素双抗），37℃，5% CO

2

培养箱培养3d。

细胞接种于T75培养瓶中，3d传一次代。

2.3实验分组

海尚道，BHC-1300ⅡA2）、酶标仪（TECAN，Infinite

Countess Ⅲ）、倒置显微镜（奥林巴斯，CKX53）、水浴锅（江

阴市保利科研器械有限公司，BHS-4）、—80℃超低温冰箱

（澳柯玛，DW-86L290）。

实验方法

（上海博迅，BC-J160）、生物安全柜（上

CO

2

培养箱

F50），离心机（湖南湘仪，H1850R）、细胞计数仪（Thermo，

对照；β-半乳糖苷酶染色实验设置阴性对照和样品。

2.4细胞实验样品处理

细胞毒性检测设置空白对照、阴性对照、样品及阳性

浓度为100mg/mL的溶液。给药时将上述溶液200μl加

入到3.8mL低糖DMEM（含10%胎牛血清）中，20μm

过滤膜过滤除菌，制成含槲皮素为5mg/mL的培养基溶

液，再以3倍稀释，制成含槲皮素浓度为1.667mg/mL、

维生素E处理同上，以上样品现配现用。

2.5细胞毒性检测

0.556mg/mL、0.185mg/mL、0.062mg/mL、0.021mg/

mL、0.007mg/mL、0.002mg/mL的培养基溶液。白藜芦醇、

槲皮素称取0.5g，用乙醇定容至总体积为5mL，制成

02

在时，DPPH自由基被部分清除，最大吸收波长处的吸光

DPPH在517nm附近有强吸收，当有自由基清除剂存

2.1 DPPH自由基清除实验

度会减小，由此可评价实验样品清除自由基的能力，即抗

氧化活性大小。本实验三个原料分别进行5个浓度DPPH

清除实验，将槲皮素、白藜芦醇、VE按浓度0.08mg/mL、

0.04mg/mL、0.02mg/mL、0.01mg/mL、0.005mg/mL进

行溶液配制。再配制0.12mg/mL的DPPH乙醇溶液。配

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102

匀，计数，按每100μl/孔含4.0×10

4

个细胞铺于96孔板中，

人真皮成纤维细胞培养后，用胰酶消化，离心吹打混

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后小心吸弃每孔培养基，加入含不同

37℃，5% CO

2

培养箱培养24h。24h

浓度待测物的培养基，共8个浓度，

析及作图处理。

所有实验数据以x±s表示，采用Excel及GraphPad Prism8进行数据分

实验结果

每个浓度3个复孔，继续放入37℃，5%

20h后每孔加

CO

2

培养箱培养20h。

入5mg/ml的MTT溶液，继续放入

小心吸弃每孔上清，加入150μL/孔

的DMSO吹打至充分混匀，室温避

液再次吸打混匀，在酶联免疫检测仪

值）。

4h后

37℃，5% CO

2

培养箱培养4h。

03

0.08mg/mL的浓度下，避光反应5min后，DPPH清除率都能达到75%以上，

除率在55%左右。

当把反应体系放置室温避光反应24h后再进行测定，发现白藜芦醇所有

DPPH自由基清除实验结果显示槲皮素和VE的清除能力都很强，在

3.1 DPPH自由基清除

而白藜芦醇0.08mg/mL初始的清除率并不高，避光反应5min后，DPPH清

浓度的DPPH清除率都有明显提高，而槲皮素和VE的清除率变化没有白藜芦

明显，说明白藜芦醇清除自由基的能力是缓慢的、持续的。

清除率趋势见图1。

从趋势图可以看出三者DPPH自由基清除能力都具有剂量依赖性。DPPH

光放置30min。用移液器将细胞悬

OD492nm处测量各孔的吸光值（OD

2.6细胞毒性计算

*100%

白OD）/(阴性对照OD-空白OD）

2.7 β-半乳糖苷酶细胞染色

细胞相对活率%=（样本OD-空

消化，离心弃上清，重悬吹打混匀，计

数，使用高糖DMEM培养基诱导细

胞衰老。细胞按2×10

4

个细胞/孔

接种到96孔板，每孔100μL，37℃，

培养6d后，

5% CO

2

培养箱培养6d。

吸弃96孔板中的培养基，按照MTT

培养基，阴性对照孔中加入正常的细

毒性结果，选择无毒性样品浓度进行

胞培养基，每孔100μL。给药完毕后

养箱中继续培养4d。培养4d后，按

行细胞染色，表达SA-β-gal的细胞

为阳性细胞，呈现蓝绿色。

2.8统计分析

照

β

-半乳糖苷酶染色试剂盒说明进

3.2细胞毒性结果

将96孔板放置在37℃，5% CO

2

培

图1 DPPH清除率趋势图

人真皮成纤维细胞培养后，胰酶

给药，受试物孔中加入含有受试物的

藜芦醇均在0.556mg/ml浓度范围内对细胞无毒性，VE在1.667mg/mL浓度

范围内对细胞无毒性。具体见表2。

本实验视MTT结果中细胞相对活率90%以上为无毒性标准，槲皮素、白

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研究应用

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活率（%）

0.002

槲皮素

白藜芦醇

VE

101.44

±1.17

101.63

±0.75

表2 槲皮素、白藜芦醇、VE对HDF细胞毒性结果

0.007

101.48

±0.83

101.15

±1.12

0.021

101.13

±0.99

99.54

±0.99

0.062

99.50

±0.50

99.87

±1.07

0.185

99.72

±0.84

98.92

±0.43

0.556

98.34

±1.32

98.78

±1.96

97.89

±1.04

1.667

45.65

±1.22

96.06

±0.63

60.41

±1.68

103.99

±1.13

103.64

±0.94

103.20

±1.27

101.09

±1.26

101.04

±0.68

29.77

±3.06

63.90

±1.76

26.26

±1.03

5

的重点对象，寻找具有抗衰功效的原

04

结论

抗衰一直是化妆品行业研究

料成为研究的热点，纯天然植物提

取物因其毒性小、安全性高而更受

消费者青睐。本研究选取了三种植物

实验来探讨它们在化妆品抗衰功效

提取物抗衰原料，通过DPPH自由基

上的应用。本次实验发现，槲皮素和

VE的抗氧化能力都很强，在0.08mg/

mL的浓度下，反应5min，DPPH清

除率都能达到75%以上，但是在细

胞实验中，槲皮素的高浓度却没有体

现出明显的抗衰功效。实际上，细胞

3.3 β-半乳糖苷酶细胞染色结果

0.556mg/mL对细胞衰老没有明显抑制作用，而在0.185mg/mL时体现出抑制

0.185mg/mL、0.062mg/mL，VE浓度在1.667mg/mL、0.556mg/mL、0.185mg/

被大面积染成蓝绿色；槲皮素浓度在

胞大量衰老，显示出

β

-半乳糖苷酶活性，

染色结果显示，经过高糖DMEM配合延长培养时间的诱导，阴性对照细

清除实验和

β

-半乳糖苷酶细胞染色

作用，在0.062mg/ml时，抑制作用又有所降低；白藜芦醇浓度在0.556mg/mL、

mL对细胞衰老均有抑制作用，且高浓度抑制效果更明显。细胞染色结果见图2。

衰老是一个十分复杂的过程，不同

原料对皮肤抗衰的机制也是不同的，

阴性对照 40X阴性对照 40X阴性对照 40X

槲皮素（0.556mg/mL） 40X

槲皮素（0.185mg/mL） 40X槲皮素（0.062mg/mL） 40X

白藜芦醇（0.556mg/mL） 40X白藜芦醇（0.185mg/mL） 40X白藜芦醇（0.062mg/mL） 40X

图2 β-半乳糖苷酶细胞染色结果

VE（0.556mg/mL） 40XVE（0.185mg/mL） 40XVE（1.667mg/mL） 40X

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抗氧化只是抗衰老的一种途径，

也是一个不可忽视的问题

一个最佳的使用浓度，

[12]

。另外，

但不是惟一的途径，

作用于细胞的药物浓度，

而且抗氧化剂之间的平衡

并不是越高越好，

素、

还需要经过反复的实验来验证。本研究初步探讨了槲皮

并对其功效添加浓度有一定的参考意义。

能够抗氧化和抑制细胞衰老，

白藜芦醇、维生素E三种原料抗氧化和抑制细胞衰老的作用，

可作为抗衰化妆品配方及产品开发可考虑的原料，

发现它们都

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作者介绍

上海宜侬生物科技有限公司研发中心

薛文斌 卢正君 董长青

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