植物组织培养实验报告解析

更新时间:2024-03-28 13:59:40 阅读: 评论:0

2024年3月28日发(作者:企业文化策划)

植物组织培养实验报告解析

实验一 植物组织培养实验报告

一 实验目的

让植物组织经过脱分化作用,形成愈伤组织,经过再分化作用,愈伤组织又能重新分化为

有结构的组织和器官,最终形成完整的植株。

二 实验原理

植物组织培养是把植物的器官,组织以至单个细胞,应用无菌操作使其在人工条件下,能

够继续生长,甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下,原来已经分化

停止生长的细胞,又能重新分裂,形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。这一过程称为

“脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织,在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及

根和芽等组织和器官,这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用,吲

哚乙酸( IAA )和 6 –苄基氨基腺嘌呤( 6 – BA )的比例,决定了根和芽的分化。

三 实验器材

(一)试剂

乙醇、IAA 或 2 , 4 – D 、HgCl 2 (或次氯酸钠)、6- 苄基氨基腺嘌呤( 6-BA )

MS 培养基

(二)仪器设备

培养室,高压灭菌锅,水浴锅,解剖刀,三角烧瓶( 100mL ),烧杯,量筒,培养皿,超

净工作台,分析天平,长镊子,剪刀,橡皮筋等

三 实验步骤

1. 配制培养基

( 1 )愈伤组织诱导培养基: MS 培养基(蔗糖含量为 10 g/L , 2,4 – D 含量为 2

mg/L ,琼脂 10 g/L )。

( 2 )试验培养基:在 MS 培养基中按表 33 – 1 加入 IAA 和 6–BA 。

吲哚乙酸先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解, 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L

HCl 溶解,然后用蒸馏水稀释,再加入培养基中。

2. 培养基灭菌

将配好的培养基加入琼脂加热溶解,调至 pH 5.8 ,趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中,

每瓶约 20 mL 。待培养基冷却凝固后,用两层称量纸包扎瓶口,并用橡皮筋扎牢,然后

在高压灭菌锅中 121 ℃( 1 kg/cm 2 )下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上,

冷却后备用。接种操作所需的一切用具(如长镊子、解剖刀、剪刀等)及灭菌水,需同时灭

菌。

3. 诱导产生愈伤组织

( 1 )取健壮的玫瑰、菊花茎数段,每段约 5 cm 长,于烧杯中用 0.1% 氯化汞(升汞)

浸泡 20 min ,取出用无菌水洗 3 ~ 4 次,置于无菌培养皿中,在接种箱中按无菌操作

要求剥去外皮(接种箱事先用紫外灯灭菌 30 min ),用解剖刀切成 5 mm 厚的圆片(弃

去开始一片和最后一片),用长镊子将它接种在诱导培养基上,注意圆片的切口朝向培养基,

每瓶接种 4 片,接种后扎好瓶口。

( 2 )将已接入植物组织(外植体)的三角烧瓶,培养在 25 ℃温室中,每星期检查 l ~

2 次,剔除材料已被杂菌污染的三角烧瓶, 3 ~ 4 周后产生愈伤组织。

( 3 )选取愈伤组织生长良好的三角烧瓶,用解剖刀将愈伤组织切下,转移到含有不同激

素的试验培养基中(也可以连同原来的外植体一起转移),每瓶放 1 ~ 2 块,仍培养在

25 ℃温室中,每周 1 ~ 2 次观察不同处理的三角烧瓶中,愈伤组织分化情况,直至长出

根和芽。长成的幼小植株即为“试管苗”,可移栽于花盆中。

四 实验结果

植物分生组织培养室指对植物体的分生组织进行离体培养。 因为时间有限及实验严密

性等问题,大部分都失败了,但是仍然有小部分分化发育了出来。已经证明了植物组织能够

经过脱分化作用,形成愈伤组织,经过再分化作用,愈伤组织又能重新分化为有结构的组织

和器官,最终形成完整的植株。

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