间接抗人球蛋白试验(IAT)操作规程

2024年3月27日发(作者：学习名人名言)

间接抗人球蛋白试验（IAT）操作规程 SXYJ-GZ-0211

1 目的 检出和鉴定不完全抗体；红细胞血型抗原鉴定。

2 适用范围 血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验及其他特殊研究。

3 职责 检测者负责按此程序进行间接抗人球蛋白试验操作。

4 材料与设备 抗人球蛋白试剂（-IgG/-C

3

d、-IgG、-C

3

d）、 IgG抗D血清、AB型血清、3%D

阳性红细胞悬液、0.9%无菌生理盐水；一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200

型离心机；CH20BIMF200型电子显微镜；S648型电热恒温水温箱（37℃）等。

5 操作方法

5.1 待检标本的准备及要求

5.1.1 待检标本准备两管血，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝；

5.1.2 血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清；

5.1.3 细胞：从待检的抗凝标本中吸出部分红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤四遍，配制

成3%红细胞盐水悬液；

5.1.4 根据试验目的准备相应的抗血清（待检血清或已知抗体的血清）

、

3%已知抗原的红细

胞或受检红细胞悬液

。

5.2 盐水悬浮法

5.2.1 取试管3支，标明受检管、阳性对照及阴性对照/自身对照；

5.2.2 按下表将各反应物加入相应试管内，混匀，37℃孵育45～60min；

5.2.3 用生理盐水洗涤3次（KA-2200型离心机Ⅲ档）。末次洗涤后，将上清液除尽，并用

滤纸将附着于管口的盐水吸去 ；

5.2.4 每管加抗人球蛋白血清2滴混匀， 3400转离心15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档），观

察反应结果。

5.3 Liss悬浮法

5.3.1 将被检者红细胞用生理盐水洗涤3次，用Liss配制3%红细胞悬液；

5.3.2 按下表在试管中加入各反应物后，37℃孵育15min；

5.3.3 以下同步骤5.2.3和5.2.4。

5.4 PEG法

5.4.1 按下表在试管中加入各反应物后，每管中加入PEG4滴，37℃孵育15min；

5.4.2 以下同步骤5.2.3和5.2.4。

5.5 Liss添加法

5.5.1 按下表在试管中加入各反应物后，每管中加入Liss液2滴，37℃孵育15min；

5.5.2 以下同步骤5.2.3和5.2.4。

表 间接抗球蛋白试验操作步骤

反应物

血清（已知或受检）

受检管

2滴

阳性对照 阴性对照/自身对照

－

－

2滴

－

1滴

2滴（自身对照）

1滴（自身对照）

－

2滴（阴性对照）

1滴（阴性对照）

3％红细胞悬液（受检或已知） 1滴

IgG抗D血清

AB型血清

3％阳性红细胞悬液

－

－

－

6 结果判定 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，受检管不出

现凝集为阴性。凝集强度可参见SXYJ-GZ-0202: 5.2.1.6对结果进行判读。

7 注意事项

7.1 红细胞洗涤应迅速，一开始洗涤就不应中途停止。洗涤用盐水要足量并用力冲入管底，

使压积于管底的红细胞松离。切勿用手指堵住管口，颠倒混匀，以防污染来自皮肤的蛋

白。

7.2 离心速度和时间十分重要，应按规定进行，防止细胞丢失。

7.3 如果检查的抗体为补体依赖抗体，则必需加入新鲜AB型血清，抗球蛋白血清中也应含

有抗C

3d

。

8 依据《全国临床检验操作规程》（第3版）中华人民共和国卫生部医政司