乳酸菌素Gasricin T基因的合成及其在大肠杆菌中的融合表达

2024年3月16日发(作者：满足澳大利亚)

维普资讯

４１６　

技　术　通　讯ｖ　０１．１８一，．３　Ｍ　２００７

生

ＬＥ　几Ｅ　ＲＳ　ＩＮ　ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　ＶｏＩ．　Ｎｏ　・ｊ【ｖｌａｙ，　　

Ｅ１广１　

Ｌ

文章编号：１００９—０００２（２００７）０３－０４１６—０３　研究报告　

乳酸菌素Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ基因的合成及其在大肠杆菌中的融合表达　

刘丽凡　，赵建增　，雷连成　，韩文瑜　

１．吉林大学农学部，吉林长春１３００６２；２．北京寰宇天康生物科技有限公司，北京１０００６１　

［摘要］　目的：在大肠杆菌系统中表达有抗菌活性的乳酸菌素Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ。方法：根据乳酸菌素Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ的基因序列，　

把Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ的结构基因ｇａｔＡ编码的氨基酸的密码子转换成大肠杆菌偏爱的形式；用人工合成的寡核苷酸片段，通过重　

叠ＰＣＲ法扩增得到ｇａｔＡ片段（倒基因）；将合成的　基因插入ｐＧＥＸ一４Ｔ一１，构建ｐＧＥＸ一４Ｔ一１一ｇａｔ融合表达载体，转化大　

肠杆菌ＤＨ５ａ株，ＩＰＴＧ诱导表达，经超声裂解后获得包涵体蛋白，经溶解、变性、复性处理后获得ＧＳＴ－Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ融合蛋　

白；用琼脂扩散法测定其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、李斯特菌、枯草杆菌等的抗菌活性。结果与结论：采用ｐＧＥｘ一４Ｔ一１　

融合表达系统在大肠杆菌中表达了有活性的Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ，融合蛋白以包涵体形式存在。复性的融合蛋白对金黄色葡萄球菌　

和大肠杆菌有明显的抑制作用，对李斯特菌的抑制作用不明显。　

［关键词］　乳杆菌素；Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ　基因合成；融合表达；抗菌活性　

［中图分类号］Ｑ７８　［文献标识码］Ａ　

Ｆｕｓｉｏｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ　Ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　

ＬＩＵ　Ｌｉ－ｆａｎｌ，ＺＨＡ０　Ｊｉａｎ－ｚｅｎ　，ＬＥＩ　Ｌｉａｎ－ｃｈｅｎ　，ＨＡＮ　Ｗｅｎ－ｙｕｌ　

１．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００６２；２．Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｃｏｓｍｏ－Ｄａｙ－Ｈｅａｈｈｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｌｉｍｉｔｅｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ，　

Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００６１；Ｃｈｉｎａ　

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｘｐｒｅｓｓ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ　Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｉｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＤＮＡ　ｆｒａｇ—　

ｍｅｎｔ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍａｔｕｒｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｆ　Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｔｈｒｅｅ　ｒｏｕｎｄｓ　ｏｆ　ＰＣＲ　ｆｒｏｍ　ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　ｓｉｘ　５９　ｎｔ　ｏｌｉｇｏｅｓ　

ａｆｔｅｒ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｒｉｇｉｎａｌ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｏｎａｌ　ｃｏｄｏｎ　ｕｓａｇｅ　ｏｆ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎｔｏ　ｐＧＥＸ　Ｔ一１．Ｃｌｏｎｅｓ　

ｃａｒｒｙｉｎｇ　ｐＧＥＸ一４Ｔ一１一ｇａｔ　ｗａｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＩＰＴＧ．Ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗｅｒｅ　ｂｍｋｅｎ　ｄｏｗｎ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｂｏｄｉｅｓ　

ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ　ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ，ｒｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ＧＳＴ－ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ　ｆｕｓｉｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　

ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｓｉｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ａｓｓａｙｅｄ　ｂｙ　ａｇａｒ　ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：　Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ　ｗａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａｓ　ＧＳＴ—ｆｕｓｉｏｎ　

ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｐＧＥＸ一４Ｔ一１　ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ　ｆｕｓｉｏｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｙｓａｔｅ　ａｓ　ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｂｏｄｉｅｓ．　

Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｇｒａｍ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ．ｓ．　ｒｅ　ａｎｄ　ａｇａｉｎｓｔ　ｇｒａｍ—ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｅ．ｃｏｌｉ．　Ｃｏｎ－　

ｃｌｕｓｉｏｎ：Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｗａｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｉｎ　ｐＧＥＸ一４Ｔ一１　ｆｕｓｉｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ．　

【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ；ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ；ｇｅｎｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ｆｕｓｉｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　

细菌素是细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一　

类具有抑菌活性的多肽或蛋白质组分，产生菌对其细菌素有自　

身免疫性【ｌ，２１。乳酸菌素是由乳酸菌产生的细菌素，其抑菌范围主　

要是与产生菌种属相近的其他细菌【３－５］，但也有一些革兰阳性菌　

Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ为疏水性肽，只有Ｃ端为亲水性，二硫键的形成可　

能与其活性有关，但对其作用机理及遗传机制都不是很明确。为　

了研究Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ作用的分子机制，我｛ｆｌＡｒｅ合成了ｇａｔＡ片　

段，　并在大肠杆菌中高效表达了ＧｓＴ—Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ融合蛋白。　

融合表达产物经复性后获得了有抗菌活性的蛋白。　

产生的细菌素对革兰阴性菌起抑制作用。乳酸菌已被公认为安　

全无毒的细菌。在过去的几年里，人们对乳酸菌细菌素进行了广　

泛的基础和应用性研究，主要是因为它们能有效地抑制食品及　

１材料和方法　

１．１材料　

其产品中的病原菌，是潜在的生物防腐剂和饲料添加剂，在食品　

和饲料的发酵和储藏过程中起着重要的作用。近年来，随着乳酸　

菌素的不断发现，相关的研究也越来越多。乳酸菌素Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　

Ｔ是一种由加氏乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂ　ｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５５分泌的广　

表达质粒ｐＧＥｘ一４Ｔ＿１、大肠杆菌ＤＨ５ａ株、金黄色葡萄球菌　

ＡＴＣＣ６５３８株、链球菌、沙门氏菌等标准菌株均由本实验室保存。　

谱抗菌的细菌素阎，其相对分子质量为５　４００，含有６个ＯＲＦ。其　

中第４个ＯＲＦ　ｇａｔＡ基因（简称ｇａｔ基因）编码活性蛋白。ｇａｔＡ编　

码的蛋白由７５个氨基酸残基组成，分子内含２个Ｃｙｓ残基，可　

形成分子内的二硫键，在第１７和第１８位有１个ＧＧ基序的切割　

限制性内切酶、　ＤＮＡ聚合酶为ＴａＫａＲａ公司产品；丙烯酰　

胺、Ｎ，Ｎ２一亚甲双丙烯酰胺、过硫酸胺、ＳＤＳ、ＤＴＴ、溴酚蓝、考马斯　

［收稿日期］２０ｏ６一ｌＯ—ｌ３　

［作者简介］刘丽凡（１９８ｌ一），女，硕士研究生　

［通讯作者］韩文瑜，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｈａｎｗｙ＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　

位点，前体蛋白通过切割产生含５７个氨基酸残基的成熟蛋白。　

维普资讯

维普资讯

维普资讯

ｐ　

生

４２２　

ＬＥ　ｒＩ１Ｅ　　・　１８Ｎｏ　一－．・３一一ｊ　Ｍａｙ，２００／　　２００７

ｒＩ１　

ＲＳ　ＩＮ　ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　Ｖｏｌ

．

技　术　通　讯…

ｌｅｎｇｅ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９４，１２（１５）：１４６７　

【５】Ｅｐｓｔｅｉｎ　ＳＬ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ｖｉｒｕｓ　ｉｆｅｃｔｎｉｏｎ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｉ・　

ｔｙ　ｔｏ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｖｉｒａｌ　ｆｅａｔｕｒｅｓ【Ｊ】．　Ｅｘｐｅａ　Ｒｅｖ　Ａｎｔｉｉｆｅｃｔｎ　

Ｔｈｅｒ，２００３，１（４）：８９　

【６】　Ｂｉｓｗａｓ　ＳＫ，Ｐａｕｌ　Ｌ．Ｉｌｕｅｎｚａ　ｖｉｆｎｕｓｒ　ｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｔｅｒａｃｔｓ　

ｗｉｔｈ　ｉｌｕｅｎｚａ　ｖｉｆｎｕｓｒ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ】．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９８，　

８：５４９３　

ｉｆｌｉｎｇ　ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｈｏｓｔ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏ　ｂａｃｔｅｒｉｌ　ｉａｆｅｃ・　ｎ

ｔｉｏｎ［］．ＣｕｒＪｒ　Ｏｐｉｎ　Ｍｉｃｏｂｉｒｏｌ，２００４，７：３３　

【１０］Ｎａｋａｇａｗａ　Ｙ，Ｋｉｍｕｒａ　Ｎ，Ｔｏｙｏｄａ　Ｔ，ｅｔ　．Ｔｈｅ　ＲＮＡ　ｐｏｌｙ・　

ｍｅｒａｓｅ　ＰＢ２　ｓｕｂｕｎｉｔ　ｉｓ　ｎｏｔ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎ—　

ｌｆｕｅｎｚａ　ｖｉｕｓ　ｇｅｎｏｍｅ　ｂｕｔｒ　ｉｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｃａｐｐｅｄ　ｍＲＮＡ　

ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｖｉｏｌｒ，１　９９５，６９（２）：７２８　

【１１】Ｓｔｅｌｚｌ　Ｕ，Ｗｏｒｍ　Ｕ，Ｌａｌｏｗｓｋｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｒｅｉｎ－　

ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｔｅｒ　ａｃｔｉｏｎ　ｎｅｔｗｏｒｋ：　Ａ　ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ｆｏｒ　ａｎｎｏｔａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　

【７】Ｓｈｉｍｉｚｕ　Ｋ，Ｋｕｒｏｄａ　Ｋ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｏｓｔ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｉｌｕｅｎ—ｆｎ　

ｚａ　ｖｉｕｓｒ　ｉｆｅｃｔｎｅｄ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｕｉｕｓｒｕ，２００４，５４（２）：１　８９　

【８】Ｖｉｓｅｓｈａｋｕｌ　Ｎ，Ｔｈａｎａｗｏｎｇｎｕｗｅｃｈ　Ｒ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　

ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｈ５Ｎ１　ａｖｉａｎ　ｉｌｕｅｎｚａ　Ａ　ｖｉｆｎｕｓｒ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　

ｐｒｏｔｅｏｍｅ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００５，１２２（６）：９５７　

【１２１　Ｗｅｂｓｔｅｒ　ＲＧ，Ｋａｗａｏｋａ　Ｙ，Ｔａｙｌｏｒ　Ｊ，ｅｔ　．Ｅｆｉｃａｃｙ　ｏｆｆ　ｎｕ・　

ｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　

ｏｕｔｂｒｅａｋ　ａｍｏｎｇ　ｐｏｕｌｔｒｙ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｔｈａｉｌａｎｄ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，　

２００４，３２８（２）：１　６９　

【９】Ｗａｌｄｕｃｋ　Ａ，Ｒｕｄｅｌ　Ｔ，Ｍｅｙｅｒ　ＴＦ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ　ａｎｄ　ｇｅｎｅ　ｐｒｏ一　

ｏｗｌｆｐｏｘ　ｖｉｕｓｒ　ａｓ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｆｏｒ　ｉｌｕｅｎｚｆｎａ　ｉｎ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．Ｖａｃ—　

ｃｉｎｅ，１９９１，９（５）：３０３　

（上接第４１８页）　

Ｂｌａｃｋｉｅ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　ａｎｄ　Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａ１．１　９９４　

【５】Ｊａｃｋ　ＲＷ，Ｔａｇｇ　ＪＲ，Ｒａｙ　Ｂ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉ．　

参考文献　

Ｃｉｎｔａｓ　ＬＭ，Ｃａｓａｕｓ　ＭＰ，Ｈｅｒｒａｎｚ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ　ｏｆ　

ａ【Ｊ】．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｒｅｖ，１９９５，５９：１７１　

【７】　Ｍｕｒｉａｎａ　ＰＭ，　Ｋｌａｅｎｈａｍｍｅｒ　ＴＲ．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐａｒｔｉｌａ　

ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌａｃｔａｃｉｎ　Ｆ，　ａ　ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　

ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ　Ｔｅｃｈ　Ｉｎｔ，２００１，７（４）：２８１　

Ｇａｎｚｌｅ　ＭＧ，Ｈａｍｍｅｓ　ＷＰ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｎ　

Ｌａｃｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ　１　１０８８［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｏｎｒ　Ｍｃｒｏｂｉｏｌ，　

１９９１，５７：１１４—１２１　

ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ［Ｊ】．Ｉｎｔ　Ｊ　

Ｆｏｏｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９９，４６：２０７　

【８】Ｍｏｒｔｖｅｄｔ　ＣＩ，Ｎｉｓｓｅｎ—Ｍｅｙｅｒ　Ｊ，Ｓｌｅｔｔｅｎ　Ｋ，ｅｔ　．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　

ａｎｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｌａｃｔｏｃｉｎ　Ｓ，ａ　ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ　ｐｒｏ．　

Ｓｕｍａ　Ｋ，Ｍｉｓｒａ　ＭＣ，Ｖａｒａｄａｒａｊ　ＭＣ．Ｐｌｎｔａａｒｉｃｉｎ　ＬＰ８４。ａ　

ｂｒｏａｄ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｈｅａｔ—ｓｔａｂｌｅ　ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ　ｏｆ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　

ｐｌａｎｔａｒｕｍ　ＮＣＩＭ　２０８４　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｂｒｏｔｈ　

ｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｋｅ　Ｌ４５［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｏｎ　Ｍｃｒｒｏｂｉ—　

ｏｌ，１９９１，５７：１８２９　

【９】　Ｋａｌｃｈａｙａｎａｎｄ　Ｎ，Ｓｉｋｅｓ　Ａ，Ｄｕｎｎｅ　ＣＰ，ｅｔ　．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　

ｈｙｄｒｏｓｔａｔｉｃ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　ｐｒｅｓｓｕｒｉｚａｔｉｏｎ　

ｍｅｄｉｕｍ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｆｏｏｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９８，４６：１７　

Ｙａｓｕｓｈｉ　Ｋ．Ｐｒｉｍａｒｙ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　

Ｇａｓｓｅｒｉｃｉｎ　Ｔ，　ａ　ｌａｃｔａｃｉｎ　Ｆ—ｆａｍｉｌｙ　ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｖ　

ａｎｄ　ｐｅｄｉｏｃｉｎ　ＡｃＨ　ｏｎ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｄｂｏｒｎｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ】．　

Ｊ　Ｆｏｏｄ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，１９９８，６１：４２５　

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｇａｓｓｅｄ　ＳＢＴ２０５５［Ｊ】．　

Ｂｉｏｃｈｅｍ．２Ｏ００．６４（１０）：２２０１　

Ｂｉｏｓｃｉ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　

【１０】Ｓｔｅｖｅｖｓ　ＫＡ，Ｓｈｅｌｄｏｍ　ＢＷ，Ｋｌａｐｅｓ　ＮＡ，ｅｔ　．Ｎｉｓｉｎ　ｔｒｅａｔ．　

ｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　

ｄｅ　Ｖｕｙｓｔ　Ｌ，Ｖａｎｄｍｍｅ　ＥＪ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎｓ　ｏｆ　ｌａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｂａｃ．　

Ｇｒａｍ—ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ【Ｊ】．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｏｎ　Ｍｉｒｃｒｏｂｉｏｌ，１９９１，　

５７：３６１３　

ｔｅｒｉａ　ｍｉｃｏｂｉｒｏｌｏｇｙ，ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ【Ｍ】．Ｌｏｎｄｏｎ：