硫酸铵分级纯化蛋白质原理操作(仅供参照)

2024年3月15日发(作者：怎么卖二手车)

硫酸铵分级纯化蛋白质原理操作

硫酸铵分级沉淀蛋白质原理与操作

一， 基本原理

硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的

免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可

与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀

出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这

种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不

易使蛋白质变性而应用最广。

二， 试剂及仪器

1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等

2. 硫酸铵（ NH 4 ） SO 4

3. 饱和硫酸铵溶液（ SAS ）

资料参考

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4. 蒸馏水

5. PBS( 含 0.2g /L 叠氮钠 )

6. 透析袋

7. 超速离心机

8. pH 计

9. 磁力搅拌器

三， 操作步骤

以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析

所需硫酸 铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% —

50% 。

（一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ）

1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升 蒸馏水中。用氨水或硫酸

调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）.

2.其它不同饱和度铵溶液的配制

资料参考

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