固液分离和硫酸铵分级沉淀纯化藻蓝蛋白

2024年3月15日发(作者：艾维维)

固液分离和硫酸铵分级沉淀纯化藻蓝蛋白

一、目的

1掌握提取液的固液分离方法。

2掌握硫酸铵分级沉淀藻蓝蛋白的原理和方法。

3熟练硫酸铵分级沉淀蛋白技术。

二、原理

硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以

将提取液中的藻蓝蛋白和杂蛋白分离。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中一方面可

与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，另外可以

中和蛋白质表面所带电荷，降低蛋白质之间的静电排斥，使之从溶液中沉淀出来。

各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。

这种方法称之为盐析。采用硫酸铵分级沉淀可以分别沉淀杂蛋白和藻蓝蛋白，实

现藻蓝蛋白的纯化。

三、实验器材及试剂

1实验仪器及工具：

机械搅拌器、冰箱、电子天平、酸度计、漏斗、离心机、三角瓶、烧杯、移

液枪等。

2实验原料及试剂

硫酸铵、稀酸、稀碱等。

四、实验方法及步骤

1、样品准备：打开低温离心机预冷30分钟，将藻蓝蛋白提取液分装至50毫升

离心管中，每管装液量约为30～40毫升，不能超过40毫升，每管都要用天平进

行称重平衡。

2、固液分离：将平衡好的离心管对称放置，装样品不能对称时，可以用离心管

装水对称，盖好盖子后开始离心，离心过程中必须有专人看管，离心结束后必须

等到转速降为0才能打开离心机。

3、藻蓝蛋白提取液体积量取：用量筒量取上清液体积并记录，然后将藻蓝蛋白

提取液分为设定份数，记录体积（留取1份放至冰箱冷藏）。

4、硫酸铵分级沉淀：根据藻蓝蛋白提取计算出10%、20%、30%、40%、50%、

60%、70%饱和度所需的硫酸铵，分别加入到上述藻蓝蛋白溶液中，机械搅拌均

匀后放在4℃静置过夜分级沉淀。

5、沉淀蛋白量测定：将沉淀蛋白固液分离后称取湿重，记录湿重。

五、实验结果记录

藻蓝蛋白提取液体积记

录

藻蓝蛋白溶液颜色观察、

记录

沉淀蛋白颜色记录

沉淀上清液颜色记录

六、实验结果分析