硫酸铵盐沉淀法和乙酸沉淀法沉淀乳清蛋白结果的影响因素

2024年3月15日发(作者：500字写景作文)

硫酸铵盐沉淀法和乙酸沉淀法沉淀乳清蛋白结果的影响因素

1、蛋白自身性质

如膜蛋白及一些疏水性高的蛋白就很容易发生疏水聚合而沉淀，做过膜蛋白提取以及

包涵体溶解时都有切身体会。在表达还有二硫键键的蛋白时特别容易形成包涵体蛋白，所

以蛋白的氨基酸序列中，含硫氨基酸较多时也容易形成沉淀。

2、pH值

蛋白质大多数都在高pH时溶解性高，低pH时易沉淀，这可能与氢键的形成有关。

但有时候更低pH时蛋白又溶解了，这一现象在我们用亲和层析纯化抗体时特别常见。盐

浓度就是盐析效应，高浓度的盐破坏蛋白的水化层，使得蛋白质聚集沉淀，常用的就是硫

酸铵沉淀。盐析沉淀通常对蛋白质的高级结构没有破坏，再溶时活性可以完全恢复。常见

的例子就是硫酸铵沉淀纯化IgG。同样，硫酸铵沉淀也常碰到不可逆的情况，例如大肠杆

菌(Escherichiacoli)表达的重组蛋白往往在硫酸铵沉淀后再溶困难。

3、有机溶剂

例如丙酮沉淀，但有机溶剂也不是全部对蛋白起沉淀作用，有时候也有助溶作用。例

如有些膜蛋白的有机溶剂抽提。

4、温度

高温或低温都有可能使得蛋白质沉淀。煮沸沉淀常见了，低温沉淀的例子有血液制品

的冷乙醇沉淀。

5、表面活性剂

对蛋白质有助溶作用。例如做电泳的SDS就是很强的表面活性剂，还有TWEEN，Triton

等等。

6、还原剂

还原剂往往对蛋白质有助溶作用。有些蛋白当加入的还原剂在空气中慢慢氧化后，就

会沉淀析出。变性剂如尿素、盐酸胍，包涵体蛋白在用变性剂溶解后，再去除变性剂经常

会沉淀析出。