牛肉膏蛋白胨培养基配方

2024年3月6日发(作者：坚持不懈直到成功)

时间：二O二一年七月二十九日

牛肉膏蛋白胨培养基配方：之邯郸勺丸创作

时间：二O二一年七月二十九日

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基.它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl.其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐.在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂.琼脂在经常使用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在滚水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦.琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分化利用.固体培养基中琼脂的含量按照琼脂的质量和气温的不合而有所不合.

由于这种培养基多用于培养细菌（荤食）,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁衍.

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、NaCl 5g、琼脂 15—20g、水

1000ml、pH 7．4—7．6（7.0—8.0）

三、器材

牛肉膏,蛋白胨, NaCl,琼脂；1mol/L NaOH, 1mol/L HCl；

试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸（ pH 5．5—9．0）,棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等.

四、操纵步调

1．称量

时间：二O二一年七月二十九日

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按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中.牛肉膏经常使用玻棒挑取,放在小烧杯或概略皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯.也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸别离,然后立即取出纸片.蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速.另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错.

2．溶化

在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解.待药品完全溶解后,弥补水分到所需的总体积.如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不竭搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂.最后补足所失的水分.

3．调pH

在未调pH前,先用精密pH试纸丈量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7．6.反之,则用1mol/L HCl进行调节.注意pH值不要调过头,以避免回调,不然,将会影响培养基内各离子的浓度.

对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行（使用办法,可参考有关说明书）.

4．过滤

时间：二O二一年七月二十九日

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趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的不雅察.一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去（本实验无需过滤）.

5．分装

按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内.分装装置见图Ⅴ-1.

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染.

(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜.

(2)固体分装分装试管,其装量不超出管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图Ⅴ-2.分装三角烧瓶的量以不超出三角烧瓶容积的一半为宜.

(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.

6．加塞

培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并包管有良好的通气性能（棉塞制作办法附本实验后面）.

7．包扎

加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以避免灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称、组别、日期.三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期.

8．灭菌

时间：二O二一年七月二十九日

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将上述培养基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2）,121．3℃, 20分钟高压蒸汽灭菌.如因特殊情况不克不及及时灭菌,则应放入冰箱内暂存.

9．放置斜面

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,放置的斜面长度以不超出试管总长的一半为宜.

10．无菌检查

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否完全.

PDA培养基配方：

特点及用途

PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato

Dextro Agar （Medium）,依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文.

一种经常使用的培养基,宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌（素食）.酵母菌PH（3.8~6.0）,霉菌（4.0~5.8）等.

按物理性状划分：固体培养基,按培养基成分划分：半合成培养基

配方

马铃薯 200克 葡萄糖 20克 琼脂 15~20克 自来水 1000毫升

自然PH

配制步调

其做法是称取200g马铃薯,洗净去皮切成小块,加水煮烂（煮沸时间：二O二一年七月二十九日

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20~30分钟,能被玻璃棒戳破即 可）,用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至1000毫升,分装试管,加塞、包扎,（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用.

其他事项

1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用.

培养基一般不需要调pH.对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH.如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol／LNaOH或lmol／LHCL溶液进行调节.调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,避免局部过酸或过碱破坏培养基成分.

3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养.

4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.1g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少搅扰性

高氏1号培养及配方：

培养放线菌用 ,改进的高氏

可溶性淀粉 2g ,KNO3 0.1g ,K2HPO4 0.05g ,MgSO4• 7H2O

0.05g ,NaCl 0.05g ,FeSO4• 7H2O 0.001g （母液）,琼脂 2g ,自来水 100mL ,pH 7.2～7.4 ,灭菌 1.05kg/cm2,20min

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配制时,先用少量冷水,将淀粉调成糊状,倒入少于所需水量的滚水中,在火上加热,边搅拌边依次逐一溶化其他成分,溶化后,补足水分到100ml,调pH,121℃灭菌20min.

低温灭菌后,倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培养基中混匀,将培养基倒入平皿内约15ml/皿.

高氏1号：

可溶性淀粉（20g）,KNO3（1g）,K2HPO4（0.5g）,MgSO4• 7H2O（0.5g）,NaCl（0.05g）,FeSO4• 7H2O（0.01g）,琼脂

20g,pH=7.4-7.6

和改进的不同就在于有没有FeSO4• 7H2O 高氏经常配完后酿成褐色也是由于Fe2+氧化为Fe3+的关系,所以经常有人用螯合的FeSO4,避免氧化.

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