抗菌实验步骤方法

更新时间:2024-03-06 21:46:40 阅读: 评论:0

2024年3月6日发(作者:校友会章程)

抗菌实验步骤方法

抑菌实验:待测菌金色葡萄球菌;枯草芽孢杆菌;大肠杆菌;绿脓杆菌

菌种活化:菌种,进行活化,可以划线,也可以涂布,

划线:直接用接种环在酒精灯上烧过之后,等之冷却,蘸取进行划线!

涂布:用枪头吸取100ul的菌液涂布既可!本实验采用涂布法

1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h)

2. 枯草芽孢杆菌培养条件(过夜培养)

3.绿脓杆菌最佳培养条件(14-17h)

培养基

MH(A)培养基( Mueller-Hinton Agar)成分:牛肉浸粉(牛肉膏) 5g;酪蛋白水解物 17.5g;淀粉 1.5g;琼脂 12.5g

MH液体培养基配制方法:称取本品36.5克,加入1000ml蒸馏水中,加热煮沸溶解,分装,121℃高压灭菌15分钟备用。

牛肉膏蛋白胨固体培养基(LB培养基):牛肉膏10 g,蛋白胨10 g,琼脂15g,NaCl 5 g,双蒸水1000mL,pH 7.2-7.5,121℃灭菌20min。

牛肉膏蛋白胨液体培养基:不加琼脂,其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。

菌悬液的配制

将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上,置于37℃恒温培养箱中培养24 h,用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中,震荡均匀,制成菌悬液。具体为用接种环挑取一环(本实验是吸取100uL菌悬液)于5 mL的无菌生理盐水中,每10倍稀释一次地逐级稀释,取(10-8、10-9、10-10 、10-11)的浓度100μL做涂布实验,每个梯度平行三组,加100μL药品溶剂(二甲基亚砜)的空白对照3个平板,完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板,调整菌悬液浓度,用平板菌落法测定其菌液浓度,使其含菌体数为103 cfu/mL,即为供试菌悬液。

抑菌作用初步筛选

将灭菌固体培养基加热至熔化,待冷却至50℃时,每20ml培养基倒入无菌培养皿中。待平板自然晾干后,分别移取0.1ml待测药品,0.1 mL供试菌悬液,均匀涂布于加药平板上,每个处理3次重复。(涂布30min后再倒置)另设置对照组,涂菌,以等量无菌水(溶解药品物质)代替药液。上述操作在超净工作台内进行。将做好的细菌平板在37℃恒温培养24 h,统计菌落个数,按照下式计算抑菌率。

抑菌率对照菌落数处理菌落数100%

对照菌落数实验结果表示为:平均数±标准误差(Mean±SDE)。

菌种活化:37℃培养;约24H

挑取两环于50ml 液体培养基上活化:先恒温150r/min震荡12h,再静置培养8-12h。达到稳定期后,4度保藏,备用。

生理盐水:8.5gNaCl加入到1000ml 蒸馏水中,121度高压蒸汽灭菌15-20min即可。

抗菌实验步骤方法

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