川芎嗪减少实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经元的凋亡与NF-κB信号

2024年3月6日发(作者：得意洋洋的意思)

第23期 巩丽华，等:川苇嗪减少实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经元的凋亡与NF-kB信号通路相关性研究・23・川背嗪减少实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经元的

凋亡与NF-kB信号通路相关性研究巩丽华，周砚秋，王思远，马辰旭，侯云$(滨州医学院基础医学院，山东烟台264003)摘要：探讨川莒嗪(Tetramethylpyrazinc,

TMP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental

autoimmune

encephalomyelitis,

EAE)小鼠神经元

凋亡的调节作用及其机制°

40只C57BL/6小鼠注射MOG-35-55制剂建立EAE模型,随机分为PBS组和TMP组,PBS及TMP每日腹

腔注射连续给药28

d,取腰椎段脊髓，行免疫荧光染色检测神经元数目’将PC12细胞按照处理不同，分为空白对照组、mteOeoG-y(IFN

-！)处理组、IFN-y+TMP组'各组均行流式细胞术检测神经元凋亡情况,Weyeo

blotting检测NF-kB、p-NF-kB表达水平'动物实验结

果显示与PBS组相比,TMP能明显增加神经元的数量(P<0.05)'而细胞实验结果显示TMP可有效抑制神经元细胞的凋亡(P<0.05),

且明显减少了

p-NF-kB的表达(P<0.05)

°

TMP对EAE小鼠有神经保护作用，其机制可能与抑制神经元的凋亡、抑制NF-kB信号通路

有关’关键词：川莒嗪;多发性硬化;神经元;凋亡;NF-kB中图分类号：R965

文献标识码：A

文章编号：1008-021X(

2020)

23-0023-04TetrametUylpyrazize

Decreas

tUe

Nenron

Apoptosis

of

tUe

Experimental

Autoimmune

Encenhalomyelitis

Micc

Through

NF-kB

Signaling

PatUwayGng

Lfua,

Zhou

Yanqia,

Wang

Sfuan,

Ma

Cheexu,

Hou

Yun

*(Colleae

L

Basic

Medicine,

Binzhou

Medical

University,

Yantai 264003,

China)Abstract:

To

explore

the

effects

and

mechanism of

tetramethylpyrazine

(

TMP)

on

neuronal

apoptosis

in

experimental

autoimmune

enceph—omyeli—s

(EAE)

mice.

A total

of

40

C57BL/6

mice

were

injected

with

MOG-35-55

and

pertussis

to

establish

EAE

model.

They

were

randomly

divided

into

PBS

group

and

TMP

group.

PBS

and TMP

were

injected

intraperitoneally

for

28

days,and

lumbar

spinal

cords

of mice

were

obtained

for

immunoLuorescence

staining.

The

PC12

cells

were

divided

into

blank

conOel

group,IFN-y

group

and

IFN-y+TMP

group.

Flow

cytometo was

ud

to

detect

neuron

apoptosis,and

western

blotting

was

ud

to

detect

the

expression

of

NF-kB

and

p-NF-kB.

In

vivo

experiment showed

that

compared

with

the

PBS

group, TMP

can

significantly

reduce

the

neuronal

apoptosis

(

P

< 0.05

).

In

vi—e

experiment

osu/s

showed that

TMP

can

effectively

inhib—

neuronal apoptosis

(

P<0.05)

,and

reduce

the

expression of

p-NF-i

(

P<0.05)

.

Therefore,TMP

has a

neuroprotectivo

effect on

EAE

mice,and

its

mechanism

may

be

related

to

the

inhibition

of

neuronal

apoptosis

and

the

reaula—on

of

NF-kB

signaling

words:tetramethylpyrazine；multipic

sclerosis;

neuron；apoptosis；NF-kB多发性硬化症(MS)是一种中枢神经系统(CNS)破坏性疾

病,常有炎性脱髓鞘的表现,是一种进行性的自身免疫性疾病。

MS病程反复，病况多呈缓慢进行性加重。该病病变部位弥散,

NF-kB表达和抑制促炎性细胞因子的产生来保护脑缺血-再灌

注损伤，并减轻由此产生的神经损伤症状(11-2)。我们前期研究

其症状和体征也相对复杂，病因及发病机制未完全明确。MS

的病理生理特征包括炎性反应、血脑脊髓屏障破坏、神经胶质

细胞活化，神经髓鞘脱失及神经元的凋亡等。在脑和脊髓的损

伤过程中,有研究证明首先出现少突胶质细胞的凋亡，随后，星

形胶质细胞、小胶质细胞陆续被激活，凋亡区最终演变成脱髓

鞘(1勺。同时，研究发现由于缺血、缺氧、感染等因素都会对神

发现,TMP

(

30

mg/kg)能够通过调节炎症反应、减少胶质细胞

的活化并保护血-脊髓屏障而显著地降低EAE小鼠的神经行

为学评分，其缓解神经损伤症状(13-4)。而TMP对EAE小鼠神

经元的影响尚未见报道。NF-kB作为一种具备多向性转录激活性能的核转录因子,

遍布于各种神经细胞中,并参与调节氧化应激及细胞凋亡等病

理生理过程(15)。活化的NF-kB能加剧神经元的凋亡,引发中

经细胞造成损害，其中，神经元对各损伤因素的敏感性更高。

神经元坏死性凋亡会直接影响到中枢神经系统的功能结构，引

发缺血性脑血管疾病［3］、神经退行性疾病⑷等。最新研究表

明，MS病变区的神经元细胞密度明显减低，神经元细胞的变性

凋亡是引起MS中枢神经症状的主要原因灼。因此，减少神经

枢神经系统功能损伤，造成认知能力和记忆减退等,促进神经

退行性病变［16］。在MS患者及动物模型中，脑和脊髓病变处发

现了激活的NF-kB"-8」，多项研究提示NF-kB信号通路在

MS/EAE病程进展中起重要作用。因此，本研究主要是探讨并

明确TMP对EAE小鼠神经元的影响及调节机制。我们检测了

TMP对EAE小鼠神经元凋亡情况的影响，以及TMP对神经元

细胞的凋亡情况和p-NF-kB表达水平的影响。以EAE小鼠和

IFN-y处理后PC

12细胞为实验基础,探讨了神经元凋亡、NF-

kB

信号通路与MS之间的关系，进一步证明了

TMP是多发性

硬化症的潜在治疗药剂，旨在为多发性硬化症的治疗寻求新的

靶点。元凋亡成为缓解MS的重要策略。川苇嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)是从中药川夸'嗪中提取

的生物碱［6］,几百年来，它一直被用于治疗肾脏、心脏和脑部疾

病，几乎没有不良反应*9)。有学者在大鼠脑出血模型发现，丹

参川苇嗪注射液能够抑制脑出血大鼠的神经元凋亡［10］。在中

枢神经系统中,TMP治疗还可以通过减少神经细胞凋亡、降低

收稿日期：2020-08-26基金项目：山东省自然科学基金(基金号为ZR2016HP05)作者简介:巩丽华！

1986"),女，山东蓬莱人，硕士研究生在读，研究方向:神经炎性疾病的治疗急机制研究;通信作者:侯云

山东化工-24

-1材料与方法1-1实验动物、细胞与试剂SHANDONG

CHEMICAL

INDUSTRY2020年第49卷10

mO后用

仪

波长450

nm

的

度值,计算细

胞存活率，选取后续TMP的使用浓度。依据实验结果，选TMP

(50

pmol/L)作为后续实验浓度。1.2.5

SPF级C57BL6

(性，12周龄)，购自

南

实验

动物中心，PC12

细胞株购买自

Ameocan

Type

Culture

Collection

(ATCC)。MOG35-55

自

HookeLabs,

TMP

来自

Sigma-AldOch

,

清(FBS)、DMEM

(

)培养基和0.25%

化液

自

Gibes公司°抗NeuN兔克隆抗体(

Abeam),

抗兔Alexa-488

抗(Jackson

ImmunoRearch)

,NF-kB、p-NF-)B

抗体(美国

CeC

Signaling)

,ICN--)/(美国

Peprotech)。MTT

自

Sigma-Aldrich

，超敏ECL发

自Thermo公司。由碧云天

技术

(PMSF)、BCA

蛋白浓度

流式细胞术检测细胞凋亡情况胞分组处理如下：空白对照组,ICN-/

(

100

ng/mL)

组，ICN-/

(100

ng/mL)

+

TMP

(50

pmol/L)组。收集细胞并

用冰冷的PBS洗

次，于200

!L结合缓冲液

培养。B

胞重悬后，每个

品中先加入5

p,L

AnnexinV-FICC混匀，再加

入2

^LPH作液，

混匀，然后在室温下在黑暗中孵育30

-O,在

胞仪上进行

分析。1.2.6

Western

blotting

检测蛋白表达：RIPA裂解液、蛋白

抑制剂、SDS-PAGE

-

。1.2方法1.2.1

EAE小鼠模型的建立的细胞

,在冰

用RIPA裂解液裂解胞30

min,然后4

t

13000

r/min离心30

min,取

清。使用

BCA法

白浓度后，加sample

buffer煮沸10 min。 用

白分

50曲在10%

SDS-PAGE

分离目的蛋白，转膜实验方案

滨州医学院实验 管

会实验

会

。EAE模型的建立和临床评分的评估细节参考 问。 随

分为

:PBS组(n

=

20)、TMP组(30mg/kg,n

=

20)。

后,5%脱

粉

室温1

h,滴加一抗：NF-kB、p-NF-kB,4t孵

，室温复温1h后,TBST液洗膜后，滴加相关二抗，洗涤、使用ECL显色。注射自免疫后第13

始进1.3统计学分析数据采用

分析软件SPSS19.0进行

分

。计资料数据以平

士SEM表示。

数据比较采用

素分析(ANOVA)检验，经

Bonferroni

0

,p

<0.05

被认为学意义。行，

腹腔注射15

d后死。1.2.2免疫荧光染色检测神经元的数量后，取腰椎段脊髓。首先经4%的多

4t后

6h后，换30%的蔗糖4

t放置

EAE.

3

d后，经OCT包埋剂-80

t

保存，用

冰冻切片。切片后

4%多

灌

免疫荧光染

神

的数量。具体操作如下：

切片于2结果2.1

TMP能改善EAE小鼠的临床评分EAE模型构建成功后,PBS组及TMP

(

30

mg/kg

)组24孔培养

用含抗兔来源抗NeuN的单抗的PBS

4

t孵，第

天室温复温1h后,PBS清洗三遍，加入稀释的 抗Alexa-488的

抗室温避光孵育2

h,后PBS清洗三遍，加入

稀释的DAPC染核室温孵育15

min后,PBS清洗后用抗荧光淬

的封片剂封片后

显微镜下 片。1.2.3

PC12现

度发病，表现为反应、食

及体重下降等，逐现尾部无力,严重者

。

现死亡。与PBS组对比,TMP(

30

mg/kg

)组显著降低了平均神经行为学评

分

神经行为学评分(p<0.05)[14]o

结果表明，TMP清、5%

清，100U/mL青霉素*100

mg/mL链霉素的DMEM培养基中，置

37

t*

PC

12

细胞接

10%

治疗能够改善EAE

2。的神

状，恢复

的神经功2.4

TMP对EAE小鼠的神经细胞数量的影响TMP(30

mg/kg

)治疗EAE小鼠后，神经行为学评分改善

5%

CO2细胞培养箱中培养。细胞呈

长至细胞80%~90%

代。长，天换液，待合时，用0.25%胰蛋白

化后，按1：3表明中枢神

神

损程度

。进行免疫荧光染色1.2.4

CCK8法检测细胞的存活率细胞传代过夜后，使用ICN-/

(

100

ng/mL)干预处理细胞

2

h后，加入不同浓度的TMP

(0,25,50,100,200

pnol/L)继续

培养24

h。每孔加入CCK8溶液10

p,L,37

t孵育4

h,低速振脊髓神经元数

化，与PBS

比,TMP(

30

mg/kg

)组阳性表达NeuN的神

胞数量显

力卩(P<0.05)

(

1)。

表明,TMP治疗

少中枢神

神经元细胞的凋亡，从

EAE的临床严重程度。A：

NeuN在各组的表达;B：

NeuN阳性表达细胞数量统计；*

*

P<0.01

/

P<0.05

图1

NeuN在各组的表达情况的干预作用。且TMP

(50

pmol/L)能够最大程度地减少ICN-

2.3

TMP对ICN-/干预后PC

12细胞存活率及凋亡

的抑制作用！P<0.05)

(

2)。

，我

了

TMP对的影响ICN-/干预后PC

12凋亡的 。与空白对照组比较,ICN-!ICN-/是EAE发病过程中分泌的主要Th1型炎性细胞因

'ICN-/+TMP：

胞凋亡

明显升高；与

纯ICN-/比子。

，体

实验

用ICN-/刺激神

。结果发现，与较,TMP处理后细胞凋亡数量显著下降。综结果说明，TMP

空白对照组比较,ICN-!

(100

ng/mL)显

降低了神

的活

。

TMP

作用后，

呈浓度

性降低了

CFN-!抑制ICN-/刺激所引起的神

凋亡(图2)。

第23期

巩丽华，等:川苇嗪减少实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经元的凋亡与NF-xB信号通路相关性研究A100806040A20l

=_qe>=a。・25・c**%>s£dode

a一一oWild IFN-y

200 TMP(uM)IFN-y +TMPBWildIFN-yIFN-y

+

TMP21:.g111

imi|

i

ii

iiui|FITC-AFITC-AA：

TMP对IFN-!干预后PC

12细胞存活率的影响；B：

TMP对IFN-干预后PC

12细胞凋亡的影响;

C：

TMP对IFN-干预后PC

12细胞凋亡数目统计；**

P<0.01,

*

P<0.05图2

TMP对DN-!干预后PC

12细胞存活率及凋亡的影响2.4

TMP对DN-

干预后PC

12细胞中p-NF-KB的

表达影响与空白对照组比较，【测-增加了

p-NF-kB/NF-kB的表

达(P<0.05)；与

DN-组比较,p-NF-kB/NF-kB

的表达在

DN

—+TMP组显著降低！P<0.05)(图3)。

，TMP治疗

少P-NF-kB/NF-kB的表达，表明NF-kB信号通

和脑部疾病，应用范围

TMP在中枢神经损伤

少

反应。近年来

发现,进增殖，

模型中，能够保护神

胞存活、促善后肢运动[23]。

题

期

发现,TMP少

胞治疗可显著降低EAE小鼠的临床评分,其作用

在TMP、抑制神

胞的活化和保护血脑屏障，证明TMP是极

的MS治疗药物[13-4]。 实验用TMP来处理对神

的保护作用，以期对TMP的神经保护作用

加完善的实验依据。胞凋亡

胞主动死亡的机体调节

，能够维持胞内环境的稳

神

胞代谢平衡。多

明细胞凋亡与神经退行性疾病的发病

关，

脑

、帕金病、 默

MS[24]

o

，神

凋亡在MS的发展关

，是MS常见特征之一[25]。

,我利用

DN-干预的PC

12

胞，

保护神经元减少凋亡的作用中起到关键作用。----------------------------I*胞术、免疫荧光染

DN-干预的PC

12

胞进行

法，对

EAE.

以及，证明TMP治疗能显著降低(言

炎性环境中神

的凋亡情况。实验结果表明，TMP可以改善EAE模型

现的神经退行性病变,保护EAE小鼠的神

|胞，神

的凋亡。B：

p-NF-kB/NF-kB

的表达比值统计；*

*

P<0.01,

*

P<0.05

图3

TMP对IFN-干预后PC

12细胞中p-NF-xB的表达的影响

suapreoKo)Wild IFN-y

IFN-y

+

TMP激活NF-kB可以通

节下

子促进细胞凋亡和应激反应的发展。NF-kB被激活后，能够引起神

的凋亡，引发枢神

功能损伤,促进神经退行性病变[16]。在MS患者及

模型中，脑

脊髓病

发现了激活的NF-kB[17-8]，多NF-kB信号通路在MS/EAE病

进展中起重要作

:B、NF-kB在各组的表达；用。

3讨论多发性硬化

免疫

介导的中枢神

统的退行性疾病，多年来，抗

反应、抑制脱髓鞘

胞凋亡一直是MS治疗的关

[20]o

尚 明确多发性硬化的发我对p-NF-Kb/NF-xB的蛋白表达水平进行,明TMP治疗能显著降低神

p-NF-kB/NF-kB的表达，说明TMP调控神

凋亡的途径

与NF-kB信号通关。综

，本实验中用TMP干预EAE小鼠模型及DN—干预的PC

12

胞，能够降低EAE小鼠的临床评分，对

神

损伤症状

缓解作用，抑制了神

的凋亡

降低了NF-xB的表达。

见，TMP'

的治疗MS的药物，但其在MS患者中的进

应用

病机制，其病

状和体征

对复杂，

仍然缺乏切实有探索。的治疗药物。近年来，多

治疗MS的新型药物的面世，在获

得治疗作用的

面临着

的安全性

。

，MS的主要治疗方法包括使用

的*-干扰素[21]、

，然而它们的缺点明显：

常用药

重心脏负担。

、与枢神

的结合能力差。引起肠道副反应，

德会加参考文献[1

]

CAMPBELL

G

R,

MAHAD

D

J.

Mitochond/ai

changes

associated with

demyelination:

Conquence-

for

axonal

Oteg—y]

J]

.M—ochond/on,2012,12(2)

:

173-179.[2

]

ANDREYEV

A Y,

KUSHNAREVA

Y

E,

STARKOV

A A

问题对MS患者的个人医治

至关重要，当务之急

寻找

安全、的MS治疗药物。川苇嗪源自中药川苇，多年来一直用于治疗肾脏[22]、心脏Mitochond/ai

metabolism

of

reactive

oxygen

specie-

[

J

].

Boochemoiay

(

Mo3c)

，2005，70(2)

：200-214.[

3]

ZHOU

L，

ZHANG

J，

WANG

C，

3honone

onhoboi

山东化工・26・SHANDONGCHEMICALINDUSTRY2020年第49卷neuronal

cell

apoptosis

and

infammatoo

respon

in

cerebral

encephalomyelitis

micc[

J]

.Cell

Mel

Neurobiol,：

10.

1007/C0571—020—00878

—3.[15]

infarction

rat

model

(

J

]

Tnt

J

Immunopathel

Pharmacol,

2017,

30(

2)：HMUT

B,KALTSCHMIDT

CCF-kB

in

the

Nervous

System

[

J

].

Colp

Spring

Harb

Perspect

Biel,

2009,

1

(

3

):

[4]

刘雅林，谢兰兰,王丽云，等.丁苯臥通过SIRT1/NF-kB信号

通路抑制阿尔茨海默病大鼠海马神经元凋亡的机制研究a001271.[16

]

BAEK

比

SHIN

H

J,

KIM

J

J,

et

aL

POm—y

cilia

modulate

[J].中国病理生理杂志,2019,35(9)

：1635-1641.[5]

MACCHI

B,MARINO-MERLO

F,NOCENTIAI

U,et

L

iidlammation

and

apoptosis

in

multiple

sclerosis:

Comparative

TLR4

-medoaied

oneeammaioay

aespons

on

hoppocampae

neurons[

J]

.J

Neuoii—lammation,2017,14(

1)

:

189.[17]

BONETTI

B,

STEGAGNO

C,

CANNELLA

B,

et

a-Active—on

analysis

betoeen

the

periphery

and

the

central

nervous

system

(J]

.J

Neuroimmunol,2015,287：-kappaB

and

c-eun

iaanscaopioon

eacioason

mueiopee

sclerosis

lesions.

Imp/cations

for

oligodendrocyte

pathology

[J]高mJ

Pathol,

1999,155(

5)：

1433-1438.[18]

PAHAN

K,SCHMID

M高c-v—On

L

nuclear

facter-kB

in

the

[6]

LIU

Y

H,LIN

Y

F,GUO

X

t

studies

on

anti-endotoxin

chemical

component

of

traditional

Chine

medicine

in

China

[J]

.Ncta

Pharmacol

Sin,

2001,22(

12)：

1071-1077.[7]

KAO

T

K,

OU

Y

C,

KUO

J

S,

et

al.

Neuroprotection

by

tetomethylpyozine

against

ischemic

brain

injuo

—

rats

[

J

].

spinal

cord

of

experimental

a—ergic

encephalomyelitis

[

J

].

NeuaoscoLe

i,2000,287(1)

：17-20.[19]

HOU

Y,RYU

C

H,PARK

K

Y,et

ive

combination

L

Neuaochem

Ini,2006,48(3)

：166-176.[8]

FENG

L,

KE

N,

CHENG

F,

et

protective

mechanism

L

ligustozine

against

renal

ischemia/repeOusion injuo[

J]

■J

Sury

human

bone

marrow

menchymal

stem

cells

and

minocycline

in

experimental

autoimmune

encephalomyelitis

mice

[

J

].

Stem

Cell

Res

Theo,2013,4(4)

：77.[20]

BJARTMAR

C,

WUJEK

J

R,TRAPP

B

D葡tnal

ixs

in

the

Res,2011,166(2)

：298-305.[9]

LV

L,

JIANG

S

S,

XU

J,

et

aLPotective

effect

L

ligustrazine

agaonsimyocaadoaeoschaemoaaepeaeusoon

on

aais：

Theaoeeoe

endothelial

ni—io

oxide

syntha

[

J

].

C/n

Exp

Pharmacol

Physooe,2012,39(1)：20-27.[10]

张

波，伍海军,钟志军，等•丹参川苇嗪注射液对脑出血

大鼠神经功能、脑水肿及神经元凋亡的影响研究[J].实用

心脑肺血管病杂志,2018,26(

11) ：62-66.[11]

FAN

L

比

WANG

K

Z,

CHENG

B,

et

a-Anti-apoptoLc

and

neuroprotectivo

effects

of

Tetramethylpyrazine

following

spinal

cord

ischemia

in

rabbits[

J]

.BMC Neurosci,2006,7(

1)

：ogy

oe

MS：

conquences

eoa

undeasiandong

ihe

progressive

pha

of

the

dia

[

J

].

J

Neurol

Sci,

2003,206(2)：165-171.[21]

CALABRESI

P

A,

KIASEIAR

B

C,

ARNOLD

D

L,

et

ai.

Pegylated

interferon

"

-

1a

for

relapsing

-

remiding

multiple

sceeIosos

(

ADVANCE)

：

aIandomod,

pha3,

doubee-

blind

study[

J]

.Lancet

Neurology,2014,13(7)

：657-665.[22]

程闰夏，梁

静，刘

冈0,等葡I苇嗪对膜性肾病模型大鼠

肾脏的保护作用[J]

•中国组织工程研究，2019,23

(

11

)：

1730-1737.[23]

HU

J,

LANG

Y,

CAO

Y,

et

neuroprotectivo

effect

L

[12]

FAN

L,

WANG

K,

SHI

Z,

et thylpyozine

protects

spinal

cord

and

reduces

iidlammation

in

a

rat

model

of

spinal

cord

ischemia-opeOusion

injuo

[

J

]

-

J

Va

Sury,

2011,54tetramethylpyrazine

against

contusive

spinal

cord

inju—

by

activating

pgc-1a

in

rats

[

J

].Neuochem

Res,

2015,40(

7

):

1393%1401.[24]

WU

J

R,

WANG

J,

ZHOU

S

K,et

al葡ecostatin-1

protection

(1)：

192-200.[13]

BAI

X

Y,WANG

X

F,ZHANG

L

S,et

thylpyozine

ameliorates

experimental

autoimmune encephalomyelitis

by

modulating

the

infammatoo

respon

[

J

].

Biochem

Biophys

ResCommun,2018,503(

3)

：

dopaminergic

neurons

[

J

]. Neural

Regeneration

Rearch,

2015,10(7)：1120-1124.[14]

ZHANG

L,LU

X,

GONG

L,

et

thylpyozine

protects

blood

-

spinal

cord

b—Oer

inteaOty

by

modulating

microglia

poeaaoiaioon

ihaough

acioeaioon

oeSTAT3

LSOCS3

and

onhoboioon

of NF

-

kB

signaling

pathways

in

experimental

autoimmune(本文文献格式:巩丽华，周砚秋,王思远，等原I茸嗪减少实验性

自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经元的凋亡与NF-kB信号通路相

关性研究[J].山东化工,2020,49(23)

:23-26.)热钢金相组织的浸蚀剂及其使用方法:CN107063816A

[

P],

2017-03-10.(上接第22页)(2)

显示T/P91、92钢中(-铁素体、鉴别回火与未回火及

两相区组织推荐采用电解浸蚀法，电解浸蚀剂推荐采用10%硫

酸或过硫酸钱水溶液。(3)

显示

S30432、TP347HFG、TP310HCbN

三种耐热不锈钢

固溶态组织时，应首选电解浸蚀进行晶界与组织形貌的显示。

其中，固溶态S30432与TP347HFG应采用浓硝酸电解浸蚀显示

晶界，用10%草酸电解浸蚀显示组织形貌;对TP310HCbN应首

[3]

王俊海，朱

荣,姚占山，等.不锈钢金相腐蚀剂的选择[J].

四川冶金,2016,38(2)

：60-63.[4]

任怀亮.金相实验技术[M].北京:冶金工业出版社,1986.[5]

吕德林，李砚珠.焊接金相分析[M].北京:机械工业出版社,

1987.[6]

B.C.科瓦连科.金相显示剂手册[M].李云盛，郑运荣，译桥匕

选浓硝酸或10%硫酸电解浸蚀显示晶界与组织形貌。(4)

显示

S30432、TP347HFG、TP310HCbN

三种耐热不锈钢

时效态组织时，应采用化学浸蚀法，推荐采用盐酸苦味酸水溶

液。参考文献[1]

ASME锅炉及压力容器材料委员会.ASME

BPVC

.

,

.

A-

2017铁基材料[S].北京冲国石化出版社,2017.[2]

江

平，曾

辉，李

健，等.一种显示T/P91、92铁素体耐

京：国防工业出版社,1983.[7]

韩德伟，张建新.金相试样制备与显示技术[M].长沙：中南学

版社,

2005.[8]

中国钢铁工业协会.GB/P

6394—2017金属平均晶粒度测定

方法[S].北京:中国标准出版社,2017.(本文文献格式：曾辉,赖仙红，汪洋.高等级锅炉耐热钢组

织显示[J].山东化工,2020,49(23)

：

18-22+26.)