2024年3月2日发(作者:二元性)
浙江中医药大学学报2oO9年3月第33巷第2期 绵毛鹿茸草的次生代谢产物含量与抑菌活性分析 杨蓓芬 一 崔敏燕! 1.浙江工业大学生环学院 杭州 3100l2 2.台州学院生命科学学院 摘要:『目的:绵毛鹿茸草的次生代谢产物含量与抑菌活性分析。[方法]对绵毛鹿茸草不同提取液的总黄酮、总绿原酸、总生物 碱、总皂甙、游离蒽醌等次生代谢产物含量和抑菌活性进行测定。[结果]显示:7o 乙醇提取液、6o 丙酮提取液对肺炎双球 菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌有中等抑制作用,水提取液有弱抑制作用;7O 乙醇提取液是肺炎双球菌、金黄色 葡萄球菌的良好抑制剂.6o 丙酮提取液是大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的良好抑制剂。[结论]绵毛鹿茸草提取掖对大肠杆菌的抑 茵活性与绿原酸的含量具有显著的正性关,对枯草芽抱杆菌的抑菌活性与蒽醌之间存在极显著的相关性。 关键词:绵毛鹿茸草:次生代谢;抑茵活性 中图分类号:R284.1 文献标识码:A文章编号:1OO 55O9(2OO9)O2 O265一O3 AnaIysis of the SecOndary Metabolisms Contents and Ant.bacterial ActiV.ty In the Different 0rgans 0f Monochasma SaVatierj Franch.ex Maxim Yang Beifen。。!.Cui Minyan! .C(J gP o/’B 0 0g f“ “ E,2 rI,订Ⅲ ≠“z E g P r ng,Z^ , d”g U行 rs打 ,n厂丁 (^ 0 0一 gy,Hnngzh(’t{t 31oo14、;2.Ecu zf g lnsfitu£ oj Tuizhou Uni ersity Abstract:[()bjective]To analyse the c。ntent Of secondary metabolisms and antIbacteria1 activity of Monochasma savatieri Franch.ex Maxim.[Meth。djThe confen cs of 5 secondary metaboIites such as flav。noid,chiorogenic acid,tannin.phen0l and anthraquinones in the different extracts of MonochasIna savatieri Franch.ex Maxim were determined.[Results]It showed that the antibacterial act_、ri— ty of the liquids extracted with 7O ethanol,6O acetone on Streptoc。ccus pneuoncae,Staphyl0coccus aureus。Escherichia c。li and Bacil1 L1s subt|lis were moderate,wl1ile that of the 1iquids extracted with water was wea k.The liquids extracted with 7O ethanol were the better inhlbitor of Strcptococcus pneuoncae and Staphyl0coccus aureus,while the liquids extracted with 6O acet。ne were the bet— ter inhibitor of Escherichia col iand Baci1lus subtilis.:c0nclusion There was positive corre1ation between the antibactcria1 activity of the¨quids of Monochasma savatieri Franch.ex Maxim on Escherichia coli and the content of the ch0logenic acid.There was also marked correlati。n between that of Bail1us subtilis and anthra quinones. Key w0rds:monochasma Savatieri Franch.ex Maxim;secondary metabolism;ant|bacterial activity 绵毛鹿茸草(Mon。chasma savatieri Franch.ex Maxim)为唇形科鹿茸草属植物,别名白头翁、千重 采自浙江千岛湖姥山林场的山坡上。采集时将棉毛 鹿茸草全草用湿布包裹,塑料袋封装.立即带回实验 塔、白头毛。分布于浙江、福建、江西,常生于山坡向 阳处杂草中或马尾松林下 。主要功能为清热解 室。将材料洗净,防入1O5 C恒温干燥箱中固定 25min,再在8O_C条件下干燥24h.研磨后经过 毒,祛风行气,凉血止血.祛痰。用于感冒,慢性气管 炎,肺炎,咳血,吐血。便血,牙龈炎,牙髓炎.乳痈,痈 肿,小儿口疮,风湿关节痛等。本文对绵毛鹿茸草的 0.25mm金属网筛,将烘干样品放入磨口广口瓶,置 于干燥器中保存,备用口]。标准品芦丁、绿原酸、小 蘖碱、人参皂甙Rb,l,8一二羟基蒽醌购自中国药品生 不同提取液中总黄酮、总绿原酸、总生物碱、总皂甙 及其对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯 草芽孢杆菌抑菌活性进行研究,并探讨这五类次生 代谢产物与抑菌活性之间的相互关系。 1实验与方法 物制品检定所,所用试剂均为分析纯。四种菌种均 由浙江台州医院无偿赠送。培养基为牛肉膏培养 基。吸光度的测定在T6新世纪紫外一可见分光光 度计上完成。 1.2绵毛鹿茸草提取液的制备 称取绵毛鹿茸草 1.1实验材料和仪器 绵毛鹿茸草于2O07年6月 基金项目:台州学院资助项目(No:O5ND】9) 粉末3份,每份1g,其中2份分别用7O 乙醇、60% Fund pr0ject:Item supported by Taizhou C0nege(N0:O5NDl9) 265
{喜斟 嘏~ 箍 离#僻墨 降t芑 浙江中医药大学学摄2O09年3目第33卷第2期 §跨峨打善鞋豫醉 丙酮在80 C水浴中回流6h,进行提取,离心取上清 酸.于70。C水浴加热、20min,取出,冷却,加5ml冰醋 液,并清洗残渣2次,离心取上清液,将3次上清液合 酸,以试剂空白作对照,于560nm波长处测其吸光 并;另1份用沸水进行提取0.5h,离心取上清液,反 度。以人参皂甙Rb为标准品,其回归方程为y一 复多次,直至提取液色淡,并将几次沸水提取液混 27.763x+O.09O1,R。一O.97l6。 合。将乙醇、丙酮、沸水提取液的浓缩,并调节pH至 1.3.5游离葸醌的提取与测定 取上述绵毛鹿 7.O,然后用蒸馏水定容至1ml,放入4C的冰箱中待 茸草提取液样品O.2ml,放人1oml离心管中,水浴蒸 用。 干溶剂,加人5 醋酸镁乙醇溶液5ml,以试剂空白 1.3次生代谢产物含量的测定 为对照,在498nm处测定吸光度。以1,8二羟基蒽 1.3.1总黄酮的提取与测定【 取上述绵毛鹿茸 醌为标准品,其回归方程为y==:47.464x+0.O0l2,R。 草提取液样品0.2ml,挥去溶剂后用甲醇定容至 一O.9996。 25ml,取其中1ml,置1Oml离心管中,加入4ml 1.4抑菌活性的研究 以滤纸琼脂扩散法测定绵 O.1mol/L三氯化铝一甲醇溶液,摇匀,在420nm处 毛鹿茸草三种溶剂提取物对肺炎双球菌、金黄色葡 测定吸光度。以芦丁为标准品,其回归方程为y一 萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果。将经 9.61O1x+0.O147,R 一0.9991。 过记数的菌液稀释后,控制1O0 I 含1O4cfu,涂平 1.3.2总绿原酸的提取与测定 取上述绵毛鹿 板。将灭菌后滤纸片(直径为6mm)浸泡在棉毛鹿茸 茸草提取液样品O.2ml,挥去溶剂后用95 乙醇定 草提取液中。在已涂菌的平板上放置上述滤纸片, 容至25ml,取1ml,置25ml容量瓶中,加入0.2mol/ 并以蒸馏水为阴性,链霉素为阳性对照,每一样品重 LHCl定容至刻度,摇匀,以试剂空白为对照,在 复3次。处理后的平板放在3OC培养24h,观察并记 324nm处测定吸光度。以绿原酸为标准品,其回归 录抑菌圈的直径大小 。 方程为y一66.O64x+0.O134, 一O.9995。 1.5数据的处理 试验处理及数据测定均重复3 1.3.3 总生物碱的抽提与测定 j一 取上述绵毛鹿 次,将所得数据输入SPSS11.5for wind0ws数据分 茸草提取液样品0.2ml,挥去溶剂后用9O 乙醇定 析系统进行统计,并对次生代谢产物的含量与抑菌 容至25ml。取提取液1.4m1置于精密加入4ml氯仿 圈的大小进行相关分析。 的分液漏斗中,加入7.2×1O mol/I 溴甲酚绿pH 2结果与分析 一4.42缓冲溶液O.6m1,振摇1min,静置1h,取澄清 绵毛鹿茸草不同提取液次生代谢产物含量以及 的氯仿液,以试剂空白作对照,于417nm处测定吸收 它们对四种细菌的抑菌圈大小如表l所示。其中次 度。以小檗碱为标准品,其回归方程为y一6.6x一 生代谢产物的含量为百分含量,抑菌活性以抑菌圈 0.0102,R 一O.9999。 的大小(mm)表示,阴性对照抑菌圈直径6mm,阳性 1.3.4 总皂甙的提取与测定 取上述绵毛鹿茸 对照(链霉素)抑菌圈26mm;抑菌圈直径在6~8mm 草提取液样品O.2m1,挥去溶剂后用甲醇定容至 为微弱抑菌,8~12mm为弱抑菌,12~2Omm为中等 25ml,取lml置25ml容量瓶中,挥去溶剂后,加入 抑菌,20~24mm为强抑菌。绵毛鹿茸草的的次生代 O.2m1 5 香草醛冰醋酸溶液,再加入0.8ml高氯 谢产物和抑菌圈直径的相关性如表2所示。 表l 绵毛鹿茸草提取液次生代谢产物的含量(g/k窖)及其抑菌圈直径(mm) 2.1绵毛鹿茸草提取液次生代谢产物含量和抑菌 对进肺炎双球菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用 活性分析 从表1中可以看出:总黄酮、总绿原酸、 均是60 丙酮提取液>70乙醇提取液>水提取液, 游离蒽醌三种次生代谢产物的含量均为7O 乙醇提 最大抑菌圈直径为15.47mm和17.4Omm,为中等抑 取液>6O 丙酮提取液>水提取液,最高含量分别 菌作用;对大肠杆菌和枯草杆菌的抑制作用是7O乙 为1.403g/kg、72.752g/kg、0.O43g/kg;生物碱和皂 醇提取液>60 丙酮提取液>水提取液,最大抑菌 甙的含量为6O 丙酮提取液>70 乙醇提取液>水 圈直径为19.O3mm和14.83mm,为中等抑菌作用。 提取液,最高含量为1.677g/kg和5.418g/kg。 水提取液对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆 266
浙江中医药大学学报2O()9年3月第3 巷第2期 菌、枯草芽孢杆菌的抑菌罔直径均在9~l2mm之 用可能是提取液中的绿原酸起的作用;蒽醌与枯草 芽孢杆菌之间存在极显著的相关性,说明绵毛鹿茸 草对枯草芽孢杆菌的抑制作用主要是蒽醌作用的结 果;肺炎双球菌和金黄色葡萄球菌之间具有显著的 间,具有弱抑菌作用。可以看出绵毛鹿茸革的7O 乙醇提取液和60 丙酮提取液是良好的抑菌剂。 2.2不同提取液的次生代谢产物含量与抑菌活性 的相关性分析 从表2可以看出:黄酮与葸醌之问 存在 著的正相关,推测绵毛鹿茸草中这两种次生 代i身十产物可能具有相同的合成底物或具有相同代谢 相关性,而与所测的5种次生代谢产物之间都没有 显著相关性,因此推测绵毛鹿茸草中其它某些物质 对肺炎双球菌和金黄色葡萄球菌均有一定抑制作 途径;大肠杆菌的抑菌活性与绿原酸的含量具有显 用。 著的正性关,推测绵毛鹿茸草对大肠杆菌的抑制作 表2 绵毛鹿茸草不同提取液的次生代谢产物含量与抑菌活性的相关性 总黄酮总绿原酸总皂甙 总生物碱 游离蒽醌肺炎双球菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌枯草芽孢杆菌 黄酮 l 绿原酸 O.98 l l 皂 O.989 O.918 1 生物碱 O.836 O.726 ().9O7 1 蒽醌 O.999 0.992 O.98l 0.8O9 1 肺炎双球菌 0.9 O.829 O.946 O.986 O.895 l 金黄色葡萄球菌 O.9O6 ().818 O.9j8 O.99O O.88j 1.OOO 1 大肠杆菌 0.976 O.999 O.933 O.695 O.985 O.8O3 O.781 枯草芽孢杆菌 0.998 0.993 O.979 O.802 1.ooO— O.89O O.88O 水半硅著茇 :*』 <().(1 ,** t二0.【】l 3讨论 参考文献: 次生代谢是植物的重要特征.其产物既具有重 [1] 中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴(第四册) 要的生态学意义又可决定各类植物在进化过程中的 [M].北京:科学出版社,1 987:97. 兴衰成败、生死存亡等问题。。 .植物中的次生代谢产 [2] 何维明,钟章成.绞股监种群次生代谢产物的动态及其 物还具有抗过敏、降血压、抗炎、抗菌、抗突变、抗肿 生态学意义_J].云南植物研究,l998,2o( 4):434 438. [3]李钧敏,金则新,杨蓓芬.云锦杜鹃总黄酮含量及成分分 瘤、抗病毒、抗氧化等多种活性。 析[J].西北林学院学报,2f)O4,19(1):11o一112. 绵毛鹿茸草对70 乙醇提取液、6O 丙酮提取 [4] 邢俊波,李萍,温德良.不同物候期金银花中总绿原酸的 液、水提取液对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、大肠 积累动态研究[J].中国中药杂志,2()(j1,26(7):456— 杆菌、枯草芽孢杆菌均有抑制作用,前两者为中等抑 459. 制作用.后者为弱抑制作用;7O 乙醇提取液是肺炎 [5] 王冲之,孙健,李萍.贝母类药材生物碱及生物碱苷含量 双球菌、金黄色葡萄球菌的良好抑制剂,6O%丙酮提 测定方法学研究[J].中国药学杂志,2f嚣 离霹蒋詈7欠晦 薄 薯 l)()3.38(6):41活藩 蚤 7— 取液是大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的良好抑制剂。推 4l8. 测对大肠杆菌和枯草杆菌的抑制作用主要由提取液 [6] 宋永良.复方乳鸽胶囊中绞股蓝总皂甙含量测定[J].浙 中的绿原酸和蒽醌引起的。 江中医学院学报,2。(]2,26(3):77. 文献查阅得知:金银花中绿原酸的平均含量为 [7] 陈红红,黄丽玫.德庆等地巴戟天中蒽醌及多糖的含量 测定[J].广东药学院学报,2。O2,l8(2):1o3一l05. 56.92g・kg .巴戟天样品的游离蒽醌含量为的 [8]王莘,苏玉春,董浩,杨会敏,王建华.李金风.9种中药 范围为0.013~O.O49g・kg L 。绵毛鹿茸草7O 提取物对乙型溶血性链球菌的抑菌作用比较[J].中草 乙醇提取液中总绿原酸、游离蒽醌的含量72.752g・ 药,2。O4.35(3):3o9—31O. kg_。、0.O43g・kg 。从中不难看出:70 乙醇提取 [9]杜近义,胡国赋,秦际威.植物次生代谢产物的生态学意 液是绵毛鹿茸草的良好提取剂。至于绵毛鹿茸草中 义[J].生物学杂志,1999,16(5):9一lO. 这些次生代谢产物的分子组成、分子结构等方面内 (收稿日期 2O08一O9—22) 容有待进一步的研究。 267 科 斟 ● 稿
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