花色苷的测定

2024年1月4日发(作者：更上一层楼的上一句)

4.1.4 材料处理

4.1.4.1 草莓果实中花色苷的提取

按照Orak（2007）的方法，并略作修改，选取多个具有代表性的草莓果实，在液氮保护下迅速研成粉状，从中准确称取1.00g转入10mL离心管，加入5mL甲醇-HCl（95:5）提取剂，超声30min (功率为100w，温度为30℃)，静置30min，12000g离心10min，倾上清液留存，同上再加入5mL提取液，超声30min，静置，离心，倾上清液留存，最后用提取剂再洗涤残渣2次，离心，最后将提取液合并定容至25mL。提取液于-20℃冰箱中保存待液相分析用，液相测定前提取液样品经0.45μm微孔滤膜过滤。

4.1.5 HPLC色谱条件

LiChrospher 100RP-18e 色谱柱（250×4.0 mm I.D.，5 μm，Merck），保护柱为RP-18（10

mm×4mm，Merck），紫外检测波长为520 nm，柱温40℃，进样量为20 μl。根据保留时间（RT）及吸收光谱与标准品对照定性，以峰面积外标法定量。

流动相A：水—甲酸，体积比100:1.5；

流动相B：水—甲醇体积比25:75，然后用甲酸调整pH值到2.35

把流动相按照比例配好，配好之后过流动相滤膜，然后超声20分钟。

洗脱程序：

0min:90%A，10%B；

0min-10min：90%A，10%B；

10-50min：90%A-40%A；10%B-60%B；

50-55min：40%A-10%A；60%B-90%B；

55-60min：10%A-90%A；90%B-10%B

天竺葵素-3-葡萄糖苷标准曲线