实验四 葡萄果实中花色苷提取与测定

2024年1月4日发(作者：贻笑大方)

实验四 葡萄果实中花色苷提取与测定

一、实验目的

1、了解并掌握葡萄果皮中花色苷提取的原理和操作；

2、掌握葡萄果皮重花色苷含量的测定方法和步骤。

二、实验原理

花色苷是红色葡萄果实中一类非常重要的呈色物质，并且多数情况下主要存在于果皮当中，只有极少数染色品种的果肉中存在花色苷。花色苷主要有花色素（包括花翠素、花青素、甲基花青素、甲基花翠素及二甲花翠素）经过羟基化后以单体糖苷的形式存在。

三、实验材料

红色葡萄果实、吸水纸、研钵、研杵、液氮、分光光度计等

四、主要项目和方法

1、果皮花色苷提取

把每个样本（20粒）的葡萄果皮取下，然后用蒸馏水冲洗果皮，除去果皮粘连的部分果肉与糖分等并用吸水纸吸干，进行称重（M），然后再液氮中将果皮研

磨成粉末，准确称取3.0000g粉末放入50ml离心管中，加入30ml酸化甲醇溶液（1mol/L HCl/MOH/水，1/80/19，v/v/v），在100%功率条件下超声辅助提取30min，温度控制在25摄氏度，然后将其只置于低温离心机中离心（8000r/min）15min，收集上清液。向残渣中继续加入30ml酸化甲醇溶液，在此按照上述步骤进行提取，重复4次，合并所有上清液（120ml）于细口瓶中，-20摄氏度避光保存。

2、花色苷含量测定和计算

采用pH示差法，提取液分别用pH值为1.0盐酸-氯化钠缓冲液稀释20倍。然后分别在510nm与700nm下测定两种稀释液的吸光度。吸光度A为：

A=(𝐴510𝑛𝑚-𝐴700𝑛𝑚)pH1.0 - (𝐴510𝑛𝑚-𝐴700𝑛𝑚)pH4.5

花色苷含量用矢车菊素-3葡萄糖苷（𝑅𝐶𝐺𝐸 , mg/g）表示，即

𝑅𝐶𝐺𝐸=（A × MW × DF × Ve × 1000）/（ε × 1 × M）

式中 MW-矢车菊素-3葡萄糖苷相对分子量，取449

DF-稀释倍数

Ve-提取液总体积

M-葡萄皮质量

ε – 摩尔吸光系数，取29600

五、实验结果

吸光值

pH

1.0

4.5

0.9007

0.0813

0.0087

0.0065

𝐴510𝑛𝑚 𝐴700𝑛𝑚

A=0.9007-0.0087-(0.0813-0.0065)=0.8172nm

𝑅𝐶𝐺𝐸=

因此该葡萄果实中，花色苷含量为 mg/g。

六、实验总结

花色苷是花色素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物，是类黄酮——以黄酮核为基础的一类物质中能呈现红色的一族化合物。它是葡萄果实中重要的呈色物质，主要存在与果皮中。通过了解花色苷的相关特性以及掌握花色苷的提取原理和技术，可以更好地完成葡萄果实中花色苷的提取，为后续研究奠定基础。