无溶剂体系中酶催化小桐籽油制备生物柴油

2023年12月27日发(作者：春节作文)

第２７卷第４期　化学反应＿Ｔ程与工艺　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｖｏｌ　２７．Ｎｏ　４　Ａｕｇ．２０１１　２０１１年８月　文章编号：１００１－－７６３１（２０１１）０４—０３２２—０５　无溶剂体系中酶催化小桐籽油制备生物柴油　伍世夏　，刘幽燕　，李青云　，石满　（１．广西大学化学化工学院，广西南宁５３０００４；２．广西生物炼制重点实验室，广西南宁５３０００３）　摘要ｔ考察了无溶剂体系中固定化脂肪酶Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５催化小桐籽油制得生物柴油的工艺条件。结果表明，加入　硅胶有利于提ｉ岛反应速率和转化率，且当硅胶存在时，甲醇可一一次性加入，简化Ｊ　实验的操作步骤。当无外加水　分存在时，甲醇与小桐籽油的物质的量之比为３．固定化酶用量为小桐籽油质量的７％，硅胶加入量与小桐籽油质　量比０．４，在４０＂Ｃ￣ｌｌ转速１５Ｏ　ｒ／ｍｉｎ的条什下，酶催化小桐籽油制嵛生物柴油反应性能较好，反应２４　ｈ后，其转化　率为８９％，连续反应ｌＯ个批次后，固定化酶活力基本不变。　关键词：生物柴油小桐籽油固定化酶无溶剂　中图分类号ｌ　ＴＱ６４５；ＴＱ４２６．９７　文献标识码：Ａ　目前，制备牛物柴油的原料大多是高品质的食用级植物油，如美国用大豆油、英国用菜籽油，然ｍ，　高价的食用级植物汕增加了生物柴汕的原料成本，从而限制其在经济欠发达地区的推广应用［１】。冈此，开　发和利用廉价的非食用油脂作为原料，可大大增加生物柴油的经济实用性。近年来，小桐籽油被认为是具　有巨大发展潜力的生物柴油原料。在我Ｉ玉ｌ，小桐树主要分布于Ｊ’。‘东、Ｊ　西和云南等省区，它对环境的适应　性较强，可在高热、干早少雨等各种贫瘠的－十地上生存ｌ　。小桐籽汕冈含有毒性的佛波酯而成为非食Ｊ｛｛性　油脂，其脂肪酸组成与理化性质与大豆油相似，含有４４．０％油酸、３４．０％亚油酸、ｌ２．８％棕榈酸　Ｉ　７．３％硬　脂酸Ｌ３Ｊ。无溶剂体系对环境污染小、节约成本、转化效率　寄，且产物的分离提纯简单，　而在产业化中具　有较强的竞争性［４】。贺芹　比较了　同商品化脂肪酶和自制的华根霉全细胞脂肪酶（Ｒｈｉｚｏ　ｐｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ＣＣＴＣＣＭ２０ｌＯ２ｌ，ＲＣＬ）催化油脂的转化效率，发现ＲＣＬ能有效应用于丸溶剂体系中催化合成牛物柴油，　甲醇分３次加入，在最佳条件下所得甲酯的收率可达９３％。Ｋｏｓｅ１６］在无溶剂体系中采用吲定化脂肪酶催化　棉籽油的醇解反应，发现当反应温度为５Ｏ℃，醇和油物质的量之比４，酶用量为３０％，反应７　ｈ时，甲酯　收率高达９１．５％。许多学者研究采用分步加入甲醇的方法来减轻其对脂肪酶的毒性，为了简化操作，奉工　作通过在体系巾添加硅胶，将甲醇一次性加入，考察以小桐籽油为原料在无溶剂体系巾脂肪酶催化制备生　物柴油的＿Ｔ艺条件。　１实验部分　１．Ｉ小桐籽油的转酯化反应　在５０　ｍＬ具塞三角瓶巾，依次加入１　ｇ小桐籽汕、１５０　甲醇和０．４　ｇ硅胶，置于４０℃和１５０　ｒ／ｍｉｎ　空气浴摇床中预热２０　ｍｉｎ，然后加入固定化脂肪酶Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５，开始反应并计时。每隔一定时　取出　收稿日期：２０１ｌ一０４．１３：修订日期：２０１１－０５．３１　作者简介：伍世夏（１９８６－），女，硕士研究生：刘幽燕【１９７１－），女，教授。Ｅ．ｍａｉｌ：ｌｉｕｙｏｕｙａｎｇｘ＠１６３　ｃｏｒｎ　基金项目；广ｉＪｌｉ自然科学基金（０９９１００１）；广两理工科学实验中心最点项目（ＬＧＺＸ２０１００８）　

第２７卷第４期　伍世夏等．无溶剂体系中酶催化小桐籽油制备生物柴油　３２３　２０　ｌａＬ样品，并用８０　ＩｘＬ石油醚溶解，然后加入十三酸甲酯内标物混合均匀，用气相色谱分析其中的脂肪　酸甲酯含量。　制备生物柴油的转酯化反应式如下：　Ｈ　２　——ｏＯｃ——Ｒ１　Ｒ１一ｃ０Ｏ——Ｒ‘　Ｈ：ＣＤＯＨ　Ｉ　Ｃａｔａｌｙｓｔ　Ｈｅ～。。ｃ—Ｒ　２　＋３Ｒ‘ＯＨ；＝　Ｒ２－－ＣＯＯ—Ｒ．　＋　ＨＣ——－—０Ｈ　Ｈ２　——００ｃ——Ｒ３　　ｌＲ３－－ＣＯ０－－－Ｒ’　Ｈ　２Ｃ—１　ＯＨ　ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｇｌｙｃｅｒｏｌ　１．２固定化酶稳定性　以２４　ｈ为一个批次，在每一批反应结束时，分离出产物、硅胶和固定化酶。用少量Ｌ内酮洗涤固定化　脂肪酶表面两次，静置，待丙酮挥发后，加入新物料进行下…批次的反应，以考察固定化酶的稳定性。　１．３分析方法　采用Ａｇｌｉｅｎｔ　６８９０ｓ型气相色谱仪分析产物的含量，检测器为火焰离子化检测器（ＦＩＤ），色谱柱为ＨＰ－１　非极性毛细管柱（３０　ｍｘ０．５３　ｍｍｘ０．８８岬）。汽化室温度为２８０℃，检测室温度为２９０℃。柱温采用程序　升温：初始温度ｌ５０℃，以２０￣Ｃ／ｍｉｎ升至２００℃，再以２￣Ｃ／ｍｉｎ升至２３０℃并保持１　ｍｉｎ，最后以１Ｏ℃／ａｒｉｎ　升温至２６０℃，保持８　ｍｉｎ。载气为高纯氮气，流速为３６　ｍＬ／ｍｉｎ。　２结果与讨论　２．１溶剂对转酯化反应的影响　有机溶剂可降低底物汕脂的粘度，增强传质效果，而＋日．可以增大与酶的接触面积，从而提高转酯化效率。　在疏水性较强的石油醚有机溶剂中进行反应，脂肪酶可以保持较ｉ岳的活性，但与无溶剂体系相比，有机溶　剂体系中的底物浓度低，会导致反应速率的减慢【７】。在醇和小桐籽油物质的量之比为３，酶用量为小桐籽　油质量的７％￣１１硅胶与小桐籽油的质量比为０．４的条件下，比较石油醚溶剂体系和无溶剂体系中酶催化小　桐籽油的转酯化反应，结果如图ｌ所示。由图可知，反应２４　ｈ　ｕ，ｌ‘无溶剂体系的转化率达８９％，而有溶剂　体系的转化率仅为６０％。表明无溶剂体系的反应速率高于石汕醚溶剂体系的反应速率。这与文献【８】的结　果不同，可能与原料油特性及反应操作方式不同有关。此外，由于无溶剂体系生产对环境污染小、可节约　生产成本，因此在后续实验ｒｆ１采用无溶剂体系制备生物柴油。　１００　１Ｏ０　８０　８０　６０　盖　６０　４０　５　４０　０　２０　２０　０　０　０　１０　２０　３０　４０　５０　０　１０　２０　３０　ｔ，ｈ　ｆ，ｈ　图１有机溶剂对转酯化反应的影响　图２硅胶对转酯化反应的影响　Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｏｒｇａｎｉｃ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｏｎ　ｔａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｏｎ　ｔａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　

３２４　化学反应：【程与：Ｉ　艺　２０１　１年８月　２．２硅胶对转酯化反应的影响　在甲醇和小桐籽汕物质的量之比为３，酶用量为小桐籽油质量７％的条＃Ｉ￣－Ｆ，考察硅胶对转酯化反应　的影响，结果见图２。山图可知，当体系中无硅胶存在时，转酯化反应的初速率较小，反应２４　ｈ转化率为　５０％，且延长反应时间对甲酯得率无明显影响。这是因为…‘次性加入过量的甲醇埘脂肪酶产生了毒害作用　。　当体系中存在硅胶时，反应的初速率较大，反应２４　ｈ所得的甲酯得率比米加硅胶的高３０％左　。这是由　于硅胶是一种极性较强的多孔物质，具有较大的比表面积，可通过吸附平衡来控制甲醇的浓度　，避免甲　醇对脂肪酶的毒害作用，使转化率大大提高【ｌｏ】。　２．３酶用量对转酯化反应的影响　在甲醇和小桐籽油物质的量之比为３，硅胶与小桐籽油的质量比为０．４的条件下，考察酶用量对转酯　化反应的影响，结果见图３。由图可知，当酶用量（基于小桐籽油的质量）由３％增　７％Ｒ，Ｊ‘，酶量的变化　对转酯化反应的影响较为显著，此时反应速率随着酶浓度的增加而增火，转化率也不断增人；当酶　｝＿｝ｊ量高　于７％时，反应速率变化不明显，而总的转化率有所下降。这是由于在一・定的范围内，酶用量越大，底物　与酶活性位点接触的机会越多，催化反应速率就越大，当酶用量达到一定量时，增加酶用量，底物　酶活　性位点接触的机会增加有限，反应速率变化不大，而进一步增加酶，　过量的酶会与硅胶团聚，导致反应过　ｒ．　程中的传质阻力增加。因此，综合考虑反应速率和固定化酶的成木，　选择酶的用量为７％较合适。　５；　＿＿∞　Ｌ；●　盖　５　Ｕ　暑　‘西　玺　５　０　２　４　６　ｔ，ｈ　Ｍｏｌａｒ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ｔｏ　ｏｉＩ　图３酶用量对转酯化反应的影响　Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｌｉｐａｓｅ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｃａｔｉｆｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　图４甲醇和小桐籽油物质的量之比对转酯化反应的影响　Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｍｏｌａｒ　ｒａｔｉｏ　ｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ　ｔｏ　ｏｉｌ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｃａｔｆｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　２．４醇油比对转酯化反应的影响　在酶用量为小桐籽汕质量的７％、硅胶与小桐籽汕的质量比为０．４的条件下，考察醇和小桐籽油物质　的量之比对转酯化反应的影响，结果见图４。由图可知，醇油比小于３时，转化率随着醇油比的增加而增　大；在醇汕比为３～４时，转化率几乎不受醇汕比的影响，均能保持在８７％左右：若继续增人醇油比，转　化率急剧下降，当醇油比为６时，转化率仅有１０％。这是山＿ｒＪ：甲醇浓度较低时，转酯化反应不完全，　甲　醇浓度较高时，会剥夺维持脂肪酶柔性结构的必需水，从而破坏维持蛋白功能构象的氢键体系，使酶的活　性降低或丧失…】。从原料的经济性考虑，选择醇油比为３较合适。　２．５外加水对转酯化反应的影响　一定量的水分是维持酶的构象以及发挥其催化作用所必需的，但过多的水分会使酶分子聚集成　，增　大传质　力，降低酶的催化效率，而且还会影响反应平衡，促使酯化反应逆向进行，降低甲酯得率【Ｉ引，凶　此，反应体系中的水分含量需严格控制。本实验所用小桐籽油中水的质量分数为０．１８％，在　醇￥１１ｄ￣桐籽　

第２７卷第４期　伍世夏等．无溶剂体系中酶催化小桐籽油制备生物柴油　３２５　油物质的量之比为３，酶用量为小桐籽油质量的７％，硅胶与小桐籽油的质量比为０．４的条件下，考察外加　水量对转酯化反应的影响，结果如图５所示。可见，当没外加水时，转化率高达８６．９％，随着水分逐渐增　高，转化率逐渐下降，当水的质量分数为１．５％时，转化率为６０％。说明小桐籽油本身所含残留的微量水　分已足够维持脂肪酶的催化活性，无需外加水到反应体系中。　１００　ｒ…　。。卜　～　；盖　５　０　６０　～ｌ一一一　－Ｊ　景　莹　４０　２０　莹　若　０　０　０　Ｏ　０．５　１．０　１　５　２０　Ｏ．０　０２　０　４　０．６　０　８　ＭａＳＳｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　怕ｔｅｒ．％　Ｍａｓｓ　ｒ酬ｏｏｆｓｉｌｉｃａ　ｇｅＩｔｏ　ｏＩ／幻．　’）　图５水的质量分数对转酯化反应的影响　Ｆｉｇ．５　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｗａｔｅｒ　ｍａｓｓ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　圈６硅胶用量对转酯化反应的影响　Ｆｉｇ．６　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｃａｔｉｔｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　∞　∞　∞　柏　∞　Ｏ　２．６硅胶用量对转酯化反应的影响　∞　∞　∞　∞　∞　在甲醇和小桐籽油物质的量之比为３，酶用量为小桐籽油质量的７％的条件下，考察硅胶用量对转酯　化反应的影响，结果如图６所示。可以看出，随着硅胶加入量的增加，转化率先增大后减小的，当硅胶与　小桐籽油的质量比为０．４时，转化率最大。当硅胶与小桐籽油的质量比小于Ｏ．４时，转化率随硅胶用量的　增加而增大。这是冈为硅胶加入＝亳＝少，吸附甲醇的最也相对较少，此时液相主体中存在的大量甲醇仍然会　对酶有一定的毒害作用。当硅胶与小桐籽汕的质量比大于０．４时，转化率反而有所降低。这可能是硅胶量　过大，对甲醇的Ｉ吸附量随之增人，　从而导致体系中甲醇的浓度低，反应速率减慢。　２．７固定化酶的稳定性　在甲醇和小桐籽油物质的量之比为３，酶用量为小　桐籽油质量的７％、硅胶与小桐籽汕的质量比为０．４的条　件下，进行连续批次反应，考察吲定化酶Ｎｏｖｅｚｙｍ　４３５　的稳定性，结果见图７。由图可知，同定化酶重复使用ｌ０　次后，转化率仍保持在８５％左右。说明该酶使用多次后，　Ｏ　１　２　３　４　５　６　７　８　９　１０　１１　酶活力基本没有损失，具有较好的稳定性。　Ｂａｔｃｈ　３结论　在反应体系中不加溶剂而添加硅胶，将甲醇一・次性　图７固定化酶的稳定性　Ｆｉｇ．７　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ　加入，与小桐籽汕在脂肪酶催化作用下制备生物柴汕，发现采用无溶剂体系中酶促小桐籽油转酯化的反应　效率高，脂肪酶催化性能稳定，且该工艺对环境污染小、可节约牛产成本，因此具有较好的应用前景。　参考文献：　【Ｉ】Ｃａｎａｋｃｉ　Ｍ，Ｓａｎｌｉ　Ｈ　Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｆｅｅｄ　ｓｔｏｃｋｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｆｕｅｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ｎｄ　Ｂｉａｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２００８，３５（５）：４３　１－４４　１．　，ｆ２】　Ｋａｒｍａｋａｒ　Ａ，Ｋａｒｍａｋａｒ　Ｓ，Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ　Ｓ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｐｌａｎｔｓ　ａｎｄ　ａｎｉｍａｌｓ　ｆｅｅｄｓｔｏｃｋｓ　ｆｏｒ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ【Ｊ】ｌ　Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ　

３２６　嗍　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，１０１（１９）：７２０１－７２ｌ０．　吲　＝。　化学反应工程与工艺　…　２０１　１年８月　Ｓｈａｈ　Ｓ，Ｇｕｐｔａ　Ｍ　Ｎ　Ｌｉｐａｓｅ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｏｉｌ　ｉｎ　ａ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｔｒｅｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，　４２（３）：４０９．４１４．　Ｄｏｎｇｎｉｎｇ　Ｄ，Ｍａｓａｙａｓｕ　Ｓ．Ｒｅｐｅａｔｅｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｗｉｔｈ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｂｌｅａｃｈｉｎｇ　ｅａｒｔｈ　ｉｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ－ｔｒｅｅ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｙ，２００６，４１（ｒ８）：１８４９－１８５３　贺芹，徐岩，滕云，等．华根霉全细胞脂肪酶催化合成生物柴油【Ｊ】催化学报，２００８，２９（１）：２３．２８．　Ｈｅ　Ｑｉｎ，Ｘｕ　Ｙａｎ，Ｔｅｎｇ　Ｙｕｎ，ｅｔ　ａ１．Ｂｉｄｉｏｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｗｈｏｌｅ—ｃｅｌｌ　ｌｉｐａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ［Ｊ］Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｔａｌｙｓｉｓ，　２００８，２９（１）：２３—２８　Ｋｏｓｅ　Ｏ，Ｔｕｔｅｒ　Ｍ，Ａｋｓｏｙ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ　Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｃａｎｄｉｄａ　ａｎｔａｒｃｔｉｃａ　ｌｉｐａｓｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｏｔｔｏｎ　ｓｅｅｄ　ｏｉｌ　ｉｎ　ａ　ｓｏｌｖｅｎｔ．ｆｒｅｅ　ｍｅｄｉｕｍ［Ｊ］　Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２，８３（２）：１２５—１２９．　高静，王芳，谭天伟，等．固定化脂肪酶催化废油合成生物柴油【Ｊ］．化１：学报，２００５，５６（９）：Ｉ７２７．１７３０．　Ｇａｏ　Ｊｉｎｇ，Ｗａｎｇ　Ｆａｎｇ，Ｔａｎ　Ｔｉａｎｗｅｉ，ｅｔ　ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　ｗａｓｔｅ　ｏｉｌ　ｂｙ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ［Ｊ］Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｙ　ａｎｄ　ｒＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００５，５６（９）：１７２７・１７３０　Ｔａｌｕｋｄｅｒ　Ｍ　Ｒ，Ｗｕ　Ｊ　Ｃ，Ｎｇｕｙｅｎ　Ｔ　Ｂ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５　ｆｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　ｕｎｒｅｆｉｎｅｄ　ｐａｌｍ　ｏｉｌ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃａｔａｌｙｓｉｓ　Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，２００９，６０（３．４）：１０６．１１２．　Ｓｚｃｚｅｓｎａ　Ａ　Ｍ，Ｋｕｂｉａｋ　Ａ，Ａｎｔｃｚａｋ　ｅｔ　ａ１　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ－ｋｅｙ　ｆａｃｔｏｒｓ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ１　Ｒｅｎｅｗａｂｌｅ　Ｅｎｅｒｇｙ，２００９，３４（５）：ｌ１　８５，１　Ｉ　９４．　陈敏，刘幽燕，庾乐，等．酶催化茶油转酯化反应制备生物柴油的研究【Ｊ】．现代化工，２００８，２８（２）：１５３．１５５．　Ｃｈｅｎ　Ｍｉｎ，Ｌｉｕ　Ｙｏｕｙａｎ，Ｙｕ　Ｌｅ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｅｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｍｅｌｌｉａ　ｏｉｌ　ｆｏｒ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］Ｍｏｄｅｒｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，２００８，２８（２）：１　５３—１　５５　Ｙｕｅ　Ｗ，Ｌｉｎｇｈｕａ　Ｚ－Ｅｃｔｏｉｎｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ［Ｊ１．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃａｔａｌｙｓｉｓ　Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　２０１０，６２（１）：９０－９５．　余旭亚，黄遵锡．生物酶法制备生物柴油的研究进展【Ｊ］．中国油脂，２００９，３４（６）：４８—５３　Ｙｕ　Ｘｕｙａ，Ｈｕａｎｇ　Ｚｕｎｘｉ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｎ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｂｉｏ—ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｃａｔａｌｙｓｉｓ［Ｊ］Ｃｈｉｎａ　Ｏｉｌｓ　ａｎｄ　Ｆａｔｓ，２００９，３４（６）：４８．５３．　Ｌｉｐａｓｅ—Ｃａｔａｌｙｚｅｄ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　Ｏｉｌ　ｉｎ　Ｓｏｌｖｅｎｔ—ｆｒｅｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｗｕ　Ｓｈｉｘｉａ’Ｌｉｕ　Ｙｏｕｙａｎ’　，，Ｌｉ　Ｑｉｎｇｙｕｎ’，Ｓｈｉ　Ｍａｎ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００４，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏｒｅｆｉｎｅｒｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００３，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ　ｆｒｏｍ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｏｉｌ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍ　４３５）ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｉｎ　ａ　ｓｏｌｖｅｎｔ－ｆｒｅｅ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃｏｕｌｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｏｉｌａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　，ａｄｄｅｄ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｔｅｐ，ｗｈｉｃｈ　ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｔｈｅ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｍｏｌａｒ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ｔｏ　ｏｉｌ　３，ｅｎｚｙｍｅ　ｍａｓｓ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　７％ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｏｉｌ　ｍａｓｓｍａｓｓ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｔｏ　ｏｉｌ　０．４，４０℃　，ａｎｄ　ｌ５０　ｒ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｏｆ　ｏｉｌ　ｗｉｔｈ　０．１　８％ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｒｅａｃｈｅｄ　８９％ａｆｔｅｒ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　２４　ｈ．Ｔｈｅ　ｃａｔａｌｙｔｉｃ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ　ｗａｓ　ｓｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｌｉｔｔｌｅ　ａｆｔｅｒ　ｂｅｉｎｇ　ｒｅｕｓｅｄ　１０　ｔｉｍｅｓ　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂｉｏｄｉｅｓｅｌ；Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｏｉｌ；ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ；ｔｒａｎｓｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ