香豆素6胶束的制备及在单层上皮细胞摄取和跨膜转运研究

2023年12月24日发(作者：美好的一天)

香豆素

6

胶束的制备及在单层上皮细胞摄取和跨膜转运研究

赵珊珊1a

，张强2

，李静1a

，周艳秋1b

，单文卫1c

，管洁1b

，张藜莉1a

，赵平1a

( 1.

煤炭总医院，a.

药学部，b.

中心实验室，c.

人事 处; 2.

北京大学药学院药剂系，北京

100191)

MDCK)

单层上皮细胞的摄取和跨膜转运机制。方法 采 摘要:

目的 探讨胶束在马丁达比犬肾( Madin Darby canine Kidney，用溶剂挥发法制备包载荧光探针香豆素

6

的聚乙二醇-聚乳酸( PEG3000

-PLA3000

)

胶束，建立高效液相色谱法测定香豆素

6

含量

Ca的方法，考察空白胶束对香豆素

6

胶束的竞争摄取，考察温度、抑制剂对胶束在单层马丁达比犬肾细胞跨膜转运的影响，2 +

浓度和乙二醇-双-( 2-氨基乙醚)

四乙酸( EGTA)

的加入对胶束跨膜转运的影响。结果 胶束可以很快被细胞摄取，胶束的细

胞摄取可被空白胶束竞争抑制。胶束在单层细胞上的跨膜转运受温度和抑制剂的影响，说明胶束的跨膜转运是主动的、能量

依赖性的过程; Ca2 +

浓度和乙二醇-双-( 2-氨基乙醚)

四乙酸可以影响胶束的跨膜转运，说明胶束可以经过细胞旁路途径跨膜

转运。从单层细胞顶侧经跨膜转运到达基底侧的胶束的量相对于加入到顶侧的胶束量非常少。结论 胶束在马丁达比犬肾

单层细胞上的跨膜转运是细胞旁路途径和经细胞途径的结合。

6;

上皮细胞;

摄取;

跨膜转运 关键词:

胶束;

香豆素

doi: 10. 11669 / cpj. 2014. 10. 014

中图分类号: Ｒ944

文献标志码: A 2494( 2014) 10 － 0858 － 06 文章编号: 1001 －

Preparation of Coumarin 6 Micelles and Uptake and Transport Study of Micelles Across Epithelial Cell

Monolayer

1a

ZHAO Shan-shan，ZHANG Qiang，LI Jing，ZHOU Yan-qiu，SHAN Wen-wei，GUAN Jie，ZHANG Li-

li，ZHAO Ping( 1a. Pharmacy Department，1b. Central Lab，1c. Personnel Section，China Meitan General Hospital，Beijing

100028，China; 2. Department of Pharmaceutics，School of Pharmacy，Peking University，Beijing 100191，China)

1a

1a 2 1a 1b 1c 1b

ABSTＲACT: OBJECTIVE To investigate the uptake and transport properties of micelles across Madin Darby canine kidney ( MD-

CK) cells. METHODS Coumarin 6 loaded PEG-PLA ( PEG3000

-PLA3000

) micelles were prepared by solvent evaporation method，and

the HPLC determination method of coumarin 6 was constructed. Competition uptake of blank micelles with coumarin 6 micelles was

studied. Temperature and inhibitors effect on transport of micelles across MDCK cell monolayer were studied，the concentration of Ca2 +

and EGTA were also studied. ＲESULTS Coumarin 6 micelles could be internalized into cells very quickly，and the uptake of mi-

celles could be inhibited by blank micelles. The transport of micelles was affected by temperature and inhibitors，which means that this

process is an active and energy-dependent process. The concentration of Ca2 +

and EGTA could affect the transport of the micelles，

which means micelles could transport across the cell monolayer via paracellular pathway. The amount of transported coumarin 6 micelles

was rather limited compared with coumarin 6 micelles added to the apical side. CONCLUSION

cell monolayer via both paracellular and transcellular pathway at the same time.

KEY WOＲDS: polymeric micelle; coumarin 6; epithelial cells; uptake; transport

Micelles transport across MDCK

聚合物胶束( polymeric micelles)

是近年来药剂

学研究中一类新型的纳米药物传递系统。胶束由具

有亲水性片段和疏水性片段的聚合物在水溶液中自

发形成，其粒径一般小于

100 nm，具有特别的“核-

［1-2］。由于聚合物胶束 壳”结构，属热力学稳定系统具有粒径小，能够包载难溶性药物以及提高药物的

对于纳米药物传递系统，上皮细胞所构成的单

层细胞一般是其能否顺利到达靶部位的第一道屏

障［4］，如血脑屏障、胎盘屏障、皮肤屏障等。因此研

究纳米药物传递系统与极性单层上皮细胞的作用机

制具有重要意义。现有关于胶束的摄取和跨膜转运

机制的研究较少。由于胶束本身是非电子密度物

质，因此无法用电子显微镜等直接观察其与细胞作

用的机制。近年来发展起来的荧光探针技术在药

稳定性，使药物控释释放，提高药物的生物利用度等

特点［3］，胶束成为药剂学研究的热点。

15)

资助项目 基金项目:

煤炭总医院院级科研课题( 2013-作者简介:

赵珊珊，女，博士，主管药师

研究方向:

药剂学与临床药学

Tel: ( 010) 64667755-2127 E-mail: dorvs@ 163. com

·858·

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10 2014

年

5

月第

49

卷第

10

期 中国药学杂志

学、细胞生物学的机制研究方面等应用较多，本实验

利用荧光探针香豆素

6，通过不改变胶束本身性质

的物理包载方法标记胶束，利用香豆素

6

能够定量

测定和定性观察的特点，对胶束与马丁达比犬肾

( Madix Darby canine kidney，MDCK)

单层上皮细胞

的摄取和跨膜转运作用机制做系统的研究。

1

仪器和试剂

1. 1

仪器

激光 粒 度 分 布 仪

( Malvern Zetasizer Nano ZS，

英国马 尔 文 公 司) ;

高 效 液 相 色 谱 仪

( ＲF-10 AXL，

日本 岛 津 公 司

) ;

跨 膜 电 阻 测 定 仪

( Millicell-EＲS，

美国

Millipore

公司) ; Biorad 680

酶标仪(

美国

Bio-

rad

公 司

) 。

激光共聚焦扫描显微镜

( Leica TCS

SP5 ，德国海德堡公司

) ; JEM200 CX

型 透 射 电 镜

(

日本

JEOL

公司) 。

1. 2

试剂

聚 乙 二 醇-聚 乳 酸

( PEG3000

-PLA3000

，Mw

/ Mn

=

1. 19，Advanced Polymeric Materials

公 司，加 拿 大) 。

香豆素

6 ( Coumarin 6，Sigma-Aldrich

公 司，美 国

) ，

DMEM( Dulbecco's modified Eagle’s medium)

高糖培

养基、胎牛血清( fetal bovine rum，FBS) ( Invitrogen

公 司，美 国

) 。 Hoechst 33258、罗 丹 明-鬼 笔 环 肽

( rhodamine-phalloidin ) ( Molecular Probes

公 司，美

国) 。氯丙嗪和甲基-贝塔-环糊精( MβCD，Sigma

公

司，美国) 。Transwell ( 12

孔，孔径

3

μm，聚碳酸酯

膜，Corning Costar

公司，美国) 。BCA

蛋白定量试剂

盒(

普利莱公司) 。其余试剂均为分析纯。

1. 3

细胞

MDCK

细胞(

中国医学科学院细胞中心，实验中

所用的细胞传代数为

29 ～ 34

代) 。

2

方 法

2. 1

包载香豆素

6PEG-PLA

胶束的制备和表征

香豆素

6

胶束由溶剂挥发法制备。0. 1 mg

香

豆素和

PEG3000

-PLA3000

10 mg

溶于乙腈中，在

60 ℃

减压旋转蒸发

30 min。在

60 ℃

时加入

pH 7. 4

的

Hepes

缓冲液( Hepes buffered saline，HBS)

后超声

2

min

则形成胶束溶液［5］。然后将胶束溶液通过

0. 22

μm

的微孔滤膜即得澄清的胶束溶液。用激光粒度

分布测定仪测定胶束的粒径分布。同法制备未包载

香豆素

6

的空白胶束。

2. 2 MDCK

细胞的培养

MDCK

细胞的培养基为 添 加

10% FBS

的

DMEM

高糖培养基。MDCK

细 胞 以 每 孔

1 × 106

的

细胞密度接种到

Transwell

供给池的膜上，分化生长

7 d。用跨膜电阻仪测定单层细胞跨膜电阻，当单层

细胞的电阻值

＞ 250

Ω

· cm2

时就形成了致密的单

层细胞［6-7］。

2. 3

香豆素

6

的高效液相色谱法含量测定

香豆素

6

的含量测定采用高效液相色谱法［8］，

流动相为甲醇-水( 95 ∶ 5 ) 。激发波长

467 nm，发射

波长

502 nm。柱温:

室温。流速: 1. 0 mL · min

－ 1

。

进样量: 20

μL。

2. 4

胶束的细胞摄取实验

2. 4. 1

激光共聚焦显微镜实时观察胶束的细胞摄

取 在

MDCK

细胞中加入胶束后

37 ℃

孵 育 并 计

时，在激光共聚焦显微镜下观察细胞中的绿色荧光

强度。

2. 4. 2

空白胶束的竞争摄取实验

MDCK

细胞在

与

0. 25 mg·mL

－ 1

包载香豆素

6

的胶束孵育的同时

加入

2

到

8

倍浓度的空白胶束，37 ℃

孵育

1 h

之后，

用高效液相色谱法测定细胞中香豆素

6

的含量，细

胞蛋白定量采用

BCA

试剂盒测定。香豆素

6

的细

胞摄取量以香豆素

6

量( ng) /

蛋白质量(

μg)

表示。

2. 4. 3

透射电镜观察细胞 细胞用等渗的

PBS

洗

涤

2

次，用戊二醛固定后，再依次进入

1%

四氧化锇

和

1%

醋酸双氧铀溶 液，脱水处理后用环氧树脂

Epon

包埋，薄层切片后用

1%

醋酸双氧铀染色，在透

射电镜下观察

MDCK

细胞。

2. 5

香豆素

6

胶束的跨膜转运实验

实验前首先用

37 ℃

预热的

pH 7. 4

的

Hank' s

平衡盐溶液( Hank's Balanced Salt Solution，HBSS)

洗

涤细胞单层

3

次，再加入预热的

HBSS

溶液，于

37

℃

摇床中孵育

30 min，吸弃

HBSS

溶液。将胶束溶

液

500

μL

加到顶侧作为供给池，同 时 基 底 侧 加

入空 白 的

pH 7. 4 HBSS

溶 液

1. 5 mL

作 为 接 收

池。把加好 胶 束 溶 液 和 空 白

HBSS

溶 液 的

Tran-

swell

培养板 置 于 转 速 为

50 r · min

－ 1

的

37 ℃

恒

温摇 床 中，分 别 在

0. 5 、1 、1. 5 、2 h

时 吸 取 供 给

池、接收池溶 液 各

200

μL，同 时 补 足 相 应 体 积 和

温度的

HBSS

溶液。

香豆素

6

在

MDCK

单层细胞上的累积渗透量

Q = (

ρ

× V + Σ

i = n － 1

ρ

V ) / A。其中，ρ 为样点测得的药物浓n n = 1

第

n

个取

度(

i in

g·mL

－ 1

) ，ρ 为n

第

i

个取样

点测的药物浓度( ng·mL

－ 1

) ，V

为接收池液体i

体积

1. 5 mL，Vi

为取样体积

200

μL; A

为渗透面积，本实

验所用十二孔

Transwell

每孔供给池聚碳酯膜面积

为

1. 13 cm2

。

表观渗透系数( apparent permeability coefficient，

［9］

Papp

)

值按公式

Papp

= dQ / dt × 1 / A × 1 /

ρ0

。Papp

单

位为

cm·s

－ 1

。ρ

0

是香豆素

6

在顶侧的初始浓度，单

位为 μg·mL

－ 1

。

2. 5. 1

温度和抑制剂对胶束跨膜转运的影响 为

了研究温度对胶束跨膜转运的影响，同浓度的香豆

素

6

胶束分别在

37

和

4 ℃

下进行

2 h

的跨膜转运

实验。2 h

之后计算比较

2

种条件下香豆素

6

累积

渗透 量。同 法 进 行

37 ℃

下相同浓度的香 豆 素

6

HBSS

混悬液的跨膜转运实验。

氯丙嗪［10］可以抑制网格蛋白介导的胞吞作用，

甲基-贝塔-环糊精［11］可以抑制细胞质膜微囊介导的

胞吞作用。相同浓度的香豆素

6

胶束分别在这

2

种

抑制剂存在的情况下进行

2 h

的跨膜转运实验，根

据香豆素

6

的累计渗透量以探讨胶束进入细胞的

途径。

2. 5. 2

乙二醇-双-( 2-氨基乙醚)

四乙酸［glycol-bis-

( 2-aminoethylether ) -N，N，N'，N'-tetraacetic acid，EGTA］对胶束跨膜转运的影响

EGTA

为钙镁离子

螯合剂，在

Transwell

供给池和接收池分别加入含有

1，5，10 mmol · L

－ 1

Ca2 +

的含钙镁离子

HBSS

溶液

(

简称为

HBSS1，HBSS5，HBSS10) ，在

37 ℃

孵育

30

min

后，保持

EGTA

浓度不变，在供给池加入相同浓

度的香豆素

6

胶束，经过

2 h

的

Transwell

跨膜转运

［12-13］

实验后比较其与对照组的

Papp

值

。对照组的胶

束浓度与

3

个实验组一致，唯一区别是溶剂为含有

2. 5 mmol·L

－ 1

的

EGTA

无钙镁离子

HBSS

溶液。

2. 5. 3

激光共聚焦显微镜观察香豆素

6

胶束跨膜

转运后的单层细胞 跨膜转运实验结束后，细胞用

3. 7%

的多聚甲醛固定后，分别用

Hoechst 33258

和

罗丹明-鬼笔环肽与细胞孵育以标记细胞核(

蓝色荧

光)

和微丝(

红色荧光) ，在激光共聚焦显微镜下观

察细胞的染色情况。

3

结 果

3. 1

香豆素

6

胶束的性质

本实验制得的香豆素

6

胶束从外观上看为有绿

色荧光的澄清液体，测得胶束的粒径为

45. 93 nm，

多分散系数为

0. 196。香豆素

6

在胶束中的含量百

分比为

0. 2% 。2 h

内香豆素

6

从胶束中的泄漏低

于

2. 0% 。空白胶束的粒径为

45. 55 nm，多分散系

数为

0. 191，见图

1。

3. 2

香豆素

6

的高效液相色谱法含量测定

·860·

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10

香豆素

6

的保留时间为

5. 8 min，色谱峰尖锐而

对称

(

图

2 ) 。

胶束的聚合物载体材料

PEG3000

-

PLA3000

本身无荧光，对香豆素

6

的高效液相色谱测

定干扰较小。香豆素

6

在

0. 5 ～ 10 ng ·mL

－ 1

内峰

面积与浓度的线性关系良 好，标 准 曲 线 为

A =

6. 212 8ρ

－ 0. 163 3 ( r2

= 0. 999 8 ) 。香豆素

6

的精

密度和回收率均符合要求。

3. 3

胶束的细胞摄取实验

3. 3. 1

激光共聚焦显微镜实时观察胶束的细胞摄

取 香豆素

6

胶束一旦加入到细胞上层，就立刻被

活细胞摄取(

图

3) 。细胞内很快充满了绿色荧光。

70 s

时细胞内的绿色荧光强度几乎达到饱和。但胶

束不能进入细胞核。

图

1

香豆素

6

胶束( A)

和空白胶束( B)

的粒径分布图

Fig. 1 Size distribution of coumarin 6 micelles ( A) and blank

micelles ( B)

图

2

香豆素

6

的高效液相色谱图

A －

香豆素

6; B －

香豆素

6

胶束; C －

香豆素

6

胶束在细胞样品中

Fig. 2 HPLC Images of coumarin 6

A － coumarin 6; B － coumarin 6 micelles; C － coumarin 6 micelles in cell samples

中国药学杂志

2014

年

5

月第

49

卷第

10

期

3. 3. 2

空白胶束的竞争摄取实验 在香豆素

6

胶

束浓度相同的情况下，包载香豆素

6

胶束的细胞摄

取可被粒径相似的未包载香豆素

6

的空白胶束竞争

抑制，说明香豆素

6

没有影响胶束本身的性质

(

图

1

4) 。随着空白胶束浓度的增加(

从

0. 5、1 mg·mL

－

－ 1

增加到

2 mg·mL

) ，香豆素

6

胶束的细胞摄取逐

0. 022、0. 017 ng

降 渐减少，从每

1

μg

蛋白质

0. 053、37 ℃ 2 h

内

1 mg ·mL

的胶 转运量都非常少，下，1. 49% 。香豆素

6

束的跨膜转运量仅有胶束总量的

相比不 加 抑制剂的香豆素

6

胶 束

2 h

时 的

－ 1

2 h

时仅有

0. 088% 。

混悬液的跨膜转运量非常少，1. 16%

的跨膜转运量，氯丙嗪作用下胶束的跨膜转

运量仅有

0. 16% ，甲基-β-环糊精的跨膜转运 量 有

7。 丙嗪和甲基-β-环糊精的影响，见图

3. 4. 2 EGTA

对香豆素

6

胶束跨膜转运的影响

0. 61% ，说明香豆素

6

胶束的跨膜转运可以受到氯

至

0. 013 ng

香豆素

6。香豆素

6

胶束细胞摄取的降

低程度与空白胶束浓度增加的倍数不成线性趋势。

3. 3. 3

透 射电镜观察细胞 细胞膜边缘的囊泡

(

箭头所指) ，可能是香豆素

6

胶束通过胞吞作用进

入细胞的

2

种途径即网格蛋白或细胞质膜微囊介导

Ca2 +

的浓度可以对

MDCK

单层细胞的紧密连接造

(

图

8 ) 。

从 成影 响 图

8

可 以 看 出，随 着

HBSS

中

1 － 1

Ca2 +

浓度从

1、5 mg·mL

－

增加到

10 mmol·L

，香

的胞吞作用的囊泡(

图

5) 。

3. 4

香豆素

6

胶束的跨膜转运实验研究

3. 4. 1

温度对香豆素

6

胶束跨膜转运的影响 在

37 ℃ ，随着胶束浓度的增加，胶束的透过速率也随

之增加，而在

4 ℃ ，胶束的透过速率相比

37 ℃

非常

低(

图

6) 。但不论是在

37 ℃

还是

4 ℃ ，胶束的跨膜

图

3

激光共聚焦显微镜实时观察香豆素

6

胶束的细胞摄

取( × 350，标尺

= 20

μm)

Fig. 3 Ｒeal-time CLSM images of cellular uptake of coumarin 6

micelles ( × 350，bar = 20

μm)

图

4

空白胶束对香豆素

6

胶 束 的 竞 争 细 胞 摄 取．

n = 4，x珋± s

Fig. 4 Competition cellular internalization of blank micelles

with coumarin 6 micelles． n = 4，x珋± s

中国药学杂志

2014

年

5

月第

49

卷第

10

期

豆素

6

胶束的表观渗透系数逐渐降低，从

1. 5、0. 8

cm·s

－ 1

降至

0. 5 cm·s

－ 1

。而

EGTA

对打开单层细

胞紧密连接的作用非常 明 显，在不含钙镁离子的

HBSS

中加入

EGTA，胶束的渗透速率(

即

Papp

值)

为

含

1 mmol·L

－ 1

Ca2 +

HBSS

的

3. 6

倍(

含

1 mmol ·

L

－ 1

Ca2 +

的

HBSS

的

P

app

值为

1. 46 cm·s

－ 1

，不含钙

镁 离 子 的

HBSS

中 加 入

EGTA

的

Papp

值 为

6. 58 cm·s

－ 1

) 。

图

5

细胞表面质膜囊泡( × 90 000，标尺

= 0. 1

μm)

Fig. 5 Plasma membrane vesicle ( × 90 000，Bar = 0. 1

μm)

图

6

温度对香豆素

6

胶束跨膜转运的影响． n = 4，x珋± s

Fig.

6 Temperature effect on the transport of coumarin 6 mi-

celles． n = 4，x珋± s

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10

·861·

Fig. 7 Inhibitors effect on the transport of coumarin 6 micelles．

n = 4，x珋± s

图

8 Ca2 +

浓度和

EGTA

对香豆素

6

胶束跨膜转运的影响．

n = 4，x珋± s

Fig. 8 Concentration of Ca2 +

and EGTA effect on the transport

of coumarin 6 micelles． n = 4，x珋± s

3. 4. 3

激光共聚焦显微镜观察香豆素

6

胶束的跨

膜转运 生长在

Transwell

插入池聚碳酸酯膜上的

单层

MDCK

细胞是致密的均匀细胞层，见图

9。胶

束在单层细胞上跨膜转运

2 h

之后，单层细胞内滞

留了大量绿色的香豆素

6

胶束。

4

讨 论

本实验选定了激光染料香豆素

6

为荧光探针。

香豆素

6

的荧光量子效率高，被广泛的用于纳米粒

的细胞摄取机制研究中。在香豆素

6

的发射光谱范

围内，与它同时进行研究的大多数细胞都没有背景

荧光;

另外有文献［14］报道，游离的香豆素

6

不能

被某些细胞直接摄取，本实验图

5

的结果也说明香

豆素

6

的跨膜转运量非常少。所有这些优点使得香

豆素

6

可以作为本实验使用的荧光探针。本实验采

用物理包载的方式用香豆素

6

标记胶束，相对于通

过化学合成，使荧光探针连接到聚合物上的标记方

法而言，香豆素

6

的加入并不影响胶束本身的性质，

如相对分子质量、表面性质等［15］，而且香豆素

6

代

·862·

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10

图

9

胶束在

MDCK

单层细胞上跨膜转运后的激光共聚焦

显微镜照片( × 200，标尺

= 40

μm)

Fig. 9 Confocal lar scanning microscope images of micelles

transport across MDCK cell monolayer ( × 200，bar = 40

μm)

表的是胶束本身，而不是胶束的高分子载体材料。

MDCK

细胞系为马丁达比犬肾上皮细胞发展的

一种有非常紧密细胞间连接的细胞系。MDCK

细胞

具有极性，其基底侧贴于瓶底，面向液层有微绒毛形

［16］

成，并形成圆顶

。MDCK

细胞有许多特性和血脑

屏障( blood brain barrier，BBB)

相似，常用于体外药

物透过

BBB

的筛选模型。在研究主动吸收药物的

渗透性方面，Caco-2

细胞和

MDCK

细胞之间有很好

的相关性，而且相对于

Caco-2

细胞不同实验室培养

之间电阻值差异过大的缺点，MDCK

细胞的电阻值

比较稳定。因此

MDCK

细胞也被用于代替

Caco-2

细胞作为肠上皮细胞模型，另外

MDCK

细胞具有相

对较薄的黏液层［17］，有利于直接研究纳米给药系统

与细胞之间的相互作用，而不受细胞表面黏液层的

干扰。

37 ℃

是正常的生理条件，而在

4 ℃

时，主动转

运的过程会因为缺乏能量而受到抑制。温度对胶束

跨膜转运速率的影响说明胶束在单层上皮细胞上的

跨膜转运是一个主动转运的过程，是能量依赖性的。空白胶束竞争香豆素

6

胶束的细胞摄取也说明了这

一点。说明胶束是先经过胞吞作用从顶侧进入细

胞，经过细胞内一系列的过程，从基底侧转运出细胞

的。粒径

100 nm

以下的颗粒性物质进入细胞的途

径有网格蛋白介导的胞吞作用、细胞质膜微囊介导

的胞吞作用等。氯丙嗪和甲基-贝塔-环糊精对胶束

跨膜转运的抑制作用说明胶束进入细胞的途径可能

是网格蛋白介导的胞吞作用和细胞质膜微囊介导的

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胞吞作用，图

5

的透射电镜照片中出现的细胞表面

质膜囊泡可能就是这

2

种途径转运的囊泡。由于这

2

种抑制剂抑制了胶束的细胞摄取，从而导致跨膜

转运的胶束减少。

上皮细胞紧密连接位于两相邻细胞间的顶端，

两个相邻细胞的质膜紧靠在一起，外侧电子密度高

的部分互相融合，成一单层。一般认为钙离子浓度

对于维持细胞的紧密连接起着重要作用，如在消化

细胞时，钙离子的缺失会导致细胞紧密连接的打开。

用

EGTA

螯合钙镁离子而打开单层细胞的紧密连接

后，胶束的跨膜转运速率大大增加，说明胶束是可以

通过细胞间的紧密连接，即细胞旁路途径跨膜转

运的。

因此，胶束可能是通过细胞内和细胞间

2

个途

径［18］实现在紧密连接单层细胞上的跨膜转运。但

细胞间的紧密连接仅占单层细胞表面积的

1%［19］，

在正常生理条件下，即非打开紧密连接的情况下，通

过紧密连接途径穿越单层细胞的胶束较少。从图

3

的结果看，胶束可以很快被细胞摄取，然而从图

6

的

结果来看，能够从单层细胞顶侧穿越单层细胞，到达

单层细胞基底侧的胶束的量相对于加入到顶侧的胶

束的量非常少，从图

9

激光共聚焦显微镜的结果看，

大量的胶束滞留在细胞内。胶束在细胞内的穿行转

运过程有待进一步研究。

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(

收稿日期: 2013-07-26)

Chin Pharm J，2014 May，Vol. 49 No. 10

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