实验二 牛乳中酪蛋白的分离

2023年12月18日发(作者：妇孺皆知的意思是什么)

实验二 牛乳中酪蛋白的分离

一、实验目的

掌握从牛乳中分离酪蛋白的原理，学会操作方法。

二、实验原理

牛乳中含有多种蛋白质，它们有着不同的性质，在脱脂牛乳的蛋白质中酪蛋白约占80%，酪蛋白是一类含磷蛋白质的复杂混合物。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调到4.7（酪蛋白的等电点）时，酪蛋白就沉淀析出。再用乙醇和乙醚洗涤沉淀，除去脂类杂质，便可制得纯酪蛋白。

三、实验器材

1、实验仪器

恒温水浴、普通离心机、精密pH试纸或酸度计、布氏漏斗、抽滤瓶、表面皿、离心管（80 mL）、量筒、烧杯（100 mL）、玻棒、电子天平。

2、实验材料

新鲜牛乳

3、试剂

1）95%乙醇

2）乙醚

3）0.2 mol/L醋酸溶液

先分别配制A 液和B 液：

A 液（0.2 mol / L 醋酸钠溶液） 称取分析纯醋酸钠（NaAc·3H2O）27.22 g溶于蒸馏水中，定容至1 000 mL。

B 液（0.2 mol / L 醋酸溶液） 称取分析纯冰醋酸（含量大于99.8%）12.0 g溶于蒸馏水中，定容至1000 mL。

取A液885 mL和B液615 mL混合，即得pH 4.7 的醋酸－醋酸钠缓冲液1 500 mL。

四、实验步骤

1、取10 mL鲜牛乳，置100 mL烧杯中，加热至40 ℃。在搅拌下慢慢加入预热至40 ℃、pH 4.7的醋酸–醋酸钠缓冲溶液10 mL。

2、转移至离心管中，在4000 r / min下离心10 min，弃上清，所得沉淀为酪蛋白的粗制品。

3、用20 mL蒸馏水洗涤沉淀，将沉淀搅起，再次离心后弃上清。

4、向沉淀中加入10 mL 95%乙醇，把沉淀充分搅起至成悬浊液，将其转移到布氏漏斗中抽滤，先用10 mL 95%乙醇洗涤，再用10 mL乙醚洗涤，最后抽干制得酪蛋白。

5、将酪蛋白白色粉末摊在表面皿上风干，于电子天平称重，

五、实验结果

计算得率（牛乳中酪蛋白理论含量为3.5 g/100 mL）。

六、注意事项

1、向牛乳中加入缓冲液时要缓慢，并充分搅拌。

2、在布氏漏斗中用95%乙醇和乙醚洗涤沉淀时要关闭抽滤漏斗。

3、在使用滤纸以前要先称重，并做记录。

七、问题与思考

1、为什么在牛乳中加入缓冲液后，还要再加几滴0.2 mol / L的醋酸溶液？

2、用乙醇洗涤沉淀时，为什么要充分将沉淀搅起成悬浊液？