重组肠激酶的溶解方法和酶切条件

2023年12月12日发(作者：二十四孝图鲁迅)

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重组肠激酶的溶解方法和酶切条件

1.使用pH和缓冲液体系是什么？

 pH=8，缓冲液体系为25mM Tris-HCl 。

2.融合蛋白的使用量？

 融合蛋白浓度0.1-1mg/ml（蛋白总量50-100µg），使用量为0.1-0.2U。每1U可酶切500µg融合蛋白。

3.酶切温度和酶切时间？

 酶切温度为25℃，过夜酶切，或完全酶切需12h-16h。

4.咪唑存在是否影响酶切？

 咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切500µg蛋白）。

5.影响酶切的条件有哪些？如何解决？

若在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：

 为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，再进行酶切。

 若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切500µg蛋白）。

 如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。

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