蛋白酶的分类及酶切位点

2023年12月12日发(作者：江东子弟)

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蛋白酶的分类及酶切位点

蛋白酶

氨基肽酶

分类

金属蛋白酶

酶切位点 已知抑制物

带有自由氨基的L-氨基酸氨2，2，双吡啶，1．1()-菲咯啉

基末端；不能分解由X-Pro、D或Q组成的肽键

菠萝蛋白酶

羧肽酶A

巯基蛋白酶 无特异性 α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化

锌金属蛋白酶 带有自由氨基酸的L-氨基酸EDTA，EGTA

羧基端；不能分解R、P或羟脯氨酸

羧肽酶B

羧肽酶Y

锌金属蛋白酶 K，R羧基端

丝氨酸羧肽酶 氨基酸羧基端

EDTA，EGTA，碱性氨基酸

PMSF

组织蛋白酶C 琉基蛋白酶 氨基端双肽，可通过K，R或醋酸碘， 甲醛

P氨基端作为第二或第三个氨基酸封闭

胰凝乳蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 在F，T或Y之后

胶原酶

dispa

金属蛋白酶

金属蛋白酶

在P-X-G-P肽链中X之后

无特异性

抑肽酶，PMSF，TPCK，α-巨球蛋白

EDTA，EGTA，还原剂，但无血清存在

EDTA，EGTA，Hg2+，重金属

α巨球蛋白，TLCK

EDTA，α菲咯啉

α巨球蛋白，TLCK

TLCK，抑肽酶，抑蛋白酶醛肽

内肽酶Arg-C 丝氨酸蛋白酶 在R之后

内肽酶Asp-N 金属蛋白酶 在D和半胱氨酸之前

内肽酶Glu-C 丝氨酸蛋白酶 在E或D之后

内肽酶Lys-C 丝氨酸蛋白酶 在K之后

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肠激酶 丝氨酸蛋白酶 在D-D-D-D-K-肽链中K之

后

Xa因子 丝氨酸蛋白酶 在R之后

无特异性

PMSF，APMSF，大豆胰蛋白酶抑制物

TPCK，TLCK，α-巨球蛋白

抑肽酶，抑蛋白酶醛肽

无花果蛋白酶 琉基蛋白酶

激肽释放酶

木瓜蛋白酶

丝氨酸蛋白酶 在一些R之后

巯基蛋白酶 长期孵育时具有广泛特异性 TPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽α-巨球蛋白，烷化剂

胃蛋白酶

纤溶酶

链霉蛋白酶

蛋白酶K

酸蛋白酶 广泛特异性 胃蛋白酶抑制素

PMSF，TLCK，抑肽酶，α-巨球蛋白

B．M．完整药片

PMSF，PefablocSc

PMSF，α巨球蛋白，苯甲脒

EDTA

TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽抑肽酶，α巨球蛋白，苯甲脒

丝氨酸蛋白酶 在K或R之后

混合型 无特异性

丝氨酸蛋白酶 广泛特异性

枯草杆菌蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 无特异性

热溶素

凝血酶

锌金属蛋白酶 在非极性残基之前

丝氨酸蛋白酶 在K之后

胰蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 在K或R之后 TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽抑肽酶，α巨球蛋白

氨基酸

氨基酸的名称与符号

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alanine 丙氨酸 Ala A

R

N

D

arginine 精氨酸 Arg

asparagine 天冬酰氨

aspartic acid 天冬氨酸

cysteine 半胱氨酸

Asn Asx

Asp Asx

C Cys

glutamine 谷氨酰胺

glutamic acid

glycine

histidine

Gln Glx Q

E 谷氨酸 Glu Glx

G

H

I

L

K

M

F

甘氨酸

组氨酸

Gly

His

Ile

Leu

Lys

Met

isoleucine 异亮氨酸

leucine

lysine

亮氨酸

赖氨酸

methionine 甲硫氨酸

phenylalanine

proline

rine

threonine

苯丙氨酸 Phe

P

S

T

W

Y

V

脯氨酸

丝氨酸

苏氨酸

Pro

Ser

Thr

Trp

Tyr

Val

tryptophan 色氨酸

tyrosine 酪氨酸

valine

血清终止胰酶消化的原理

缬氨酸

血清终止的原理其实是竞争抑制。就是用过量的牛血清中含有的蛋白来和胰酶结合。不给胰可编辑 -------------精选文档-----------------

酶消化细胞蛋白的机会。

细胞传代时，血清为什么能终止胰酶消化？

胰蛋白酶的酶切位点是肽链的Lys和Arg两个残疾的羧基端肽键，血清的加入可使酶饱和，严格上说不是竞争性抑制，因为血清蛋白不是抑制剂，还是底物！

什么样的细胞不能用胰酶-EDTA消化

植物细胞不能用胰酶-EDTA消化，要用纤维素酶消化。

应该是肿瘤细胞吧。正常的细胞，貌似都需要用胰酶或者胶原酶消化。

EDTA-胰酶，只不过是在胰酶里加入了EDTA而已。

EDTA是乙二胺四乙酸，一种金属螯合剂。一般和胰蛋白酶配合使用。原因在于，钙，镁等金属离子会降低胰酶活力，故在使用胰酶消化液时要配合加入EDTA。它可以螯合这些离子，消除对胰酶的抑制。

干细胞饲养层制作中，胰酶—EDTA消化成纤维细胞（MEF）时，EDTA的作用是什么？

应该是胰酶分散细胞，EDTA鳌合金属离子使金属酶失活

《军医进修学院学报》 1992年02期

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正常人血浆蛋白酶解产物对胃癌细胞肺转移抑制作用的研究

焦顺昌 赵东海 黄昌霞 王洪海

【摘要】：本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶联合消化方法得到正常人血浆(NHP)有限蛋白酶解产物(NHP-EP)。体外研究发现,NHP的细胞粘附性可达90％;而NHP-EP的细胞粘附可编辑 -------------精选文档-----------------

抑制性亦可达90％以上,具有可逆性、竞争性、非细胞毒性等特点。动物实验发现,NHP-EP可抑制小鼠胃癌细胞实验性肺转移的形式,抑制率达83.3％;并可延长带瘤小鼠的中位生存期,实验组生存期35天,而对照组为19天。我们认为,NHP-EP对胃癌血行转移防治可能有较大实用价值。

【作者单位】：

【关键词】： 正常人血浆蛋白酶解产物 胃肿瘤 肺肿瘤 癌症 肿瘤转移 细胞粘连

【正文快照】：

肿瘤转移的各个环节均有赖于癌细胞活跃的游走、与基质的粘附和去粘附等生物学功能田。体内有多种介导细胞—基质粘附的蛋白质,常见的有纤维连接素(fi bronectin,FN)、层粘素(laminin,LN)、胶原、Vitro-neetin等,它们与肿瘤转移有关(2,’〕。其中FN与细胞结合位点的氨基酸序

《癌症》 1993年02期

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纤维连接素酶解产物的生物学特性及其对胃癌细胞血行转移抑制作用的初步研究

焦顺昌 赵东海 黄昌霞 王洪海

【摘要】：本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶联合降解方法得到正常人血浆纤维连接素有限蛋白酶解产物(FN—EP)。体外研究发现,纤维连接素的细胞粘附率可达60％以上;而FN—EP的细胞粘附抑制率可达90％,具有可逆性、竞争性、非细胞毒性等特征。动物实验初步显示,FN—EP可抑制小鼠胃癌细胞实验性肺转移的形成,抑制率达78.6％。本研究提示,FN—EP在恶性肿瘤血行转移防治中具有应用价值。

【作者单位】： 解放军总医院 解放军总医院 解放军总医院 解放军总医院

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【关键词】： 血浆 纤维连接素酶解产物 细胞粘附 肿瘤转移

【正文快照】：

纤维连接素(Fibroneetin,FN)通过介导癌细月包一胞外基质粘附,在肿瘤转移中发挥重要作用〔’,”〕。FN与细胞结合位点的氨基酸序列为RGD(即精氨酸一甘氨酸一天门冬氨酸)。Hum分hr ies〔3,‘〕等用人工合成的含RGD序列的GRGDS多肚成功地抑制了黑色素瘤细胞实验性小鼠肺转移,抑

台研究发现Pif1解旋酶蛋白质 杀死癌细胞有转机

2013年09月13日 15:32 来源：中国新闻网 参与互动(0)

中新网9月13日电 据台湾东森电视台网站报道，修复受损癌细胞的谜题逐渐解开。台湾大学生化所发现细胞内一种“Pif1解旋酶”蛋白质，能在癌细胞基因受损时，促进DNA间的重组，进而修复细胞。医师指出，无论是正常细胞或是癌细胞都拥有Pif1，未来有机会借由抑制癌细胞中的Pif1，开发抗癌新药物。

台大生化所助理教授冀宏源带领的研究团队3年前开始与美国贝勒医学院、耶鲁大学等知名学校合作，成功从酵母菌中找到细胞里的Pif1解旋酶。冀宏源表示，DNA受损的形态中，最严重的就是双股DNA断裂，团队利用酵母菌、蛋白质纯化技术，发现Pif1可解开双股DNA结构，帮助它的重组，完成细胞修复。

这项发现成为治疗癌症的重大突破，也登上国际知名期刊《自然》(Nature)。2年前海外实验更证实，若在乳癌细胞株上注射Pif1抑制剂，降低癌细胞存活率的效果高达10倍。台大校长杨泮池表示，下一阶段研究重点是透过临床试验，尽快找到对Pif1活性敏感的癌症种类。

标签：癌细胞 酵母菌 冀宏源 解旋酶 细胞

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阻断细胞内“通讯线路” 抑制肾癌细胞增殖

2013年08月19日 08:26 来源：扬子晚报 参与互动(0)

肾癌又称肾细胞癌，肾腺癌，多起源于肾小管上皮细胞。早期症状不明显，等到出现“无痛性的血尿、腰部肿块、腰痛”三联症时，肿瘤多已进展到中晚期。江苏省肿瘤医院冯继锋教授告诉记者，靶向药物是治疗肾癌的最重要手段之一，但实际上肿瘤细胞非常“聪明”，会自我“进化”，用药一段时间后就有耐药的可能，所以不断寻找新的有效的治疗方法，就成了临床及科研人员的研究热点。

冯继锋教授表示，和其他癌症有所不同的是，肾癌对放疗、化疗、免疫或是激素治疗相对不敏感。而对晚期患者来讲，靶向药物一直是主要的治疗手段。现代的医学研究表明，基因的变异会左右肿瘤的发展，而这一因果关系的发生需要依靠肿瘤细胞内的信号的传导，有了信号的传递，肿瘤相关的生长因子才会被“激活”。

“哪些基因变异起主要作用？哪些通路是肿瘤的发生、发展、转移的关键因素？科学的研究还有很长的一段路要走，但目前也寻找到了若干可以作用的靶点，由此也诞生了一些靶向药物。”冯继锋教授告诉记者，用特殊的药物将这个关键的靶点“封掉”，肿瘤细胞内的“通讯线路”就被阻断了，细胞核接收不到信息无法分裂增殖，自然达到了抑制肿瘤的目的。

“不过，肿瘤细胞比我们想的要‘聪明’得多。”冯继锋教授说，肿瘤内传递信号的通路非常复杂，像网络一样。而且肿瘤细胞会随着给药时间的延长，肿瘤发生发展的机制也有所改变，比如信号在一条“通讯线路”上走不通，渐渐地就走上了别的“岔道”，继续将信号传递下去。表现在病人身上就是出现了耐药性，原先有效的药物不再起作用了，病情会进一步进展。“但是肾癌患者也不必过分灰心。”即使是产生了耐药性的患者，也可以陆续受益于新的治疗方法。比如以往接受过舒尼替尼或索拉非尼治疗失败的晚期肾细胞癌的患者，可编辑 -------------精选文档-----------------

现在就可以使用靶向药物mTOR抑制剂依维莫司片进行治疗。肿瘤基础研究和治疗新技术、新药物研发应用的进步，让很多以往失去治疗机会的患者多了选择。杨彦 整理

标签：通讯线路 肾癌 细胞内 肾细胞癌 mTOR

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