南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及学性质研究

2023年12月4日发(作者：生产成本控制)

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南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及学性质研究

孙金鹏;钱圣一;敬科举;卢英华

【期刊名称】《厦门大学学报（自然科学版）》

【年(卷),期】2011(050)004

【摘 要】为提高南极假丝酵母脂肪酶B( Candida antarctica lipa B,CALB)的表达量,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子偏好性设计合成CALB基因,插入表达载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-CALB.重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过G418抗性筛选得到多拷贝转化子.摇瓶发酵120 h后上清液酶活力达到46 U/mL,通过金属螯合层析纯化发酵液将CALB纯化了5.23倍,比活力达到856.7 U/rg,去糖基化实验显示重组CALB比野生型CALB大5 ku.实验考察了不同反应温度、pH值和金属离子对重组CALB活性和稳定性的影响,发现重组CALB最适反应温度和pH分别为30℃和6.5,在pH 5.0～8.0之间以及40℃以下有较好稳定性,金属离子(10 mmol/L)Ca2+,Zn2+,Mn2+有助于CALB酶活力的提高,而Cu2+,Ag+,Fe3+强烈抑制酶催化反应.%To improve expression efficiency of recombinant

Candida antarctica lipa B (CALB) in methylotrophic yeast Pichia pastoris

GS115,the DNA quence encoding CALB was designed and synthesized

bad on the codon bias of P. Pastoris. The new CALB gene was cloned

into pPIC9K,yielding pPIC9K-CALB,and transformed into P. Pastoris GS115.

In shake-flask cultivation, the enzyme activity was 46 U/mL after induction

by methanol for 120 h. The CALB was purified by metal chelate

chromatography by 5. 23 folds. Deglycosylation showed the recombinant

CALB was 5 ku bigger than wild type CALB. The optimal pH and temperature of this recombinant enzyme were pH 6. 5 and 30°C,

respectively. CALB was relatively stable at temperatures below 40 ℃ within

a pH range from 5. 0 to 8. 0. Ca2+ ,Zn2+ ,Mnz+ conduced to enzyme

activity, while Cu2+ , Ag+ ,Fe3+ inhibited it.

【总页数】7页(P765-771)

【作 者】孙金鹏;钱圣一;敬科举;卢英华

【作者单位】厦门大学化学化工学院,福建厦门361005;厦门大学化学化工学院,福建厦门361005;厦门大学化学化工学院,福建厦门361005;厦门大学化学化工学院,福建厦门361005

【正文语种】中 文

【中图分类】Q781

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