鼠源单抗IgM的纯化
做单抗大家都比较“歧视”IgM亚型，上文我们也讨论了如何尽量避开IgM亚型，如果我们躲之不及怎么办呢？
其实，IgM类单抗也没有你们想的那么糟糕，纯化也没有你们想象的那么困难；小福就来给大家简单说说。
IgM属于优球蛋白，什么是优球蛋白呢？百度百科是这么讲的：低离子强度下或在蒸馏水中不溶解的血浆球蛋白称为优球蛋白；一般情况下，血清蛋白质在蒸馏水或低盐离子白蛋白为可溶，球蛋白一般不溶，而偏偏那部分“不听话的”，能溶解的球蛋白我们称其为伪球蛋白，大部分不溶解的那部分称其为优球蛋白。
我们从以上的描述中可以知道，IgM有不溶于水或者低离子溶液的特性，所以，对付IgM纯化第一招：去离子水透析法。把腹水装到透析袋里面放在去离子水里面透析。当然，透析之前，需要把腹水里面的降植烷/液体石蜡等这些油脂类去除，去除的办法是二氧化硅粉末，同时要去除不溶物。我们透析完成之后，IgM在沉淀里面，需要用PBS等溶液复溶，并结合其他的手段进一步处理；在蛋白纯化领域，一步法亲和层析不是万能钥匙。
IgM纯化第二招：抗IgM特异性亲和层析法。
此法成本偏高，需要购买高品质的抗IgM亚型的抗体几毫克，将这些抗体通过共价偶联结合到活性琼脂糖凝胶上，制备成亲和柱;亲和柱制备好以后，其纯化IgM的方法，与Protein A，Protein G纯化抗体方法相同，此处不赘述；至于抗体共价偶联到活性琼脂糖凝胶上的步骤与方法，在福因德官网都可以找到，如果还有疑问，可以与我们技术支持联系。
做蛋白和抗体纯化比较少的实验者，往往只了解亲和层析纯化法，因为写方法简单，对于大部分的蛋白和抗体来说，纯化步骤比较稳定，纯化工艺不需要详细摸索（其实，这是一个误区，如果项目一个抗体或者蛋白纯化好，纯化方案摸索和优化少不了）。
IgM纯化第三招：羟基磷灰石（HAP）层析法
羟基磷灰石是什么东西？ 它的英文：Hydroxyapatite；分子式Ca10(PO4)6(OH)2，是磷酸钙的晶体；晶体表面有大量带正电荷的Ca2+离子和带负电的PO43-离子，还有OH集团；这些离子一般不与小分子结合，只与生物大分子结合，并且结合力最强，磷酸盐浓度梯度洗脱，可以把不同的抗体组分分别洗脱；对于抗体纯化而言，用pH6.8的磷酸钠缓冲液浓度从10mM到350mM,最后洗脱峰是IgM，纯度可达93%以上。
羟基磷灰石（HAP）层析法具体实施步骤，我们在之后分享
IgM纯化其他招：粗沉淀加上分子筛（颗粒排阻法）
沉淀法有硫酸铵沉淀和PEG沉淀，等等。
硫酸铵沉淀没什么好说的，50%饱和硫酸铵沉淀。但是这个饱和硫酸铵的配制和滴加还是很有技巧的，保持4℃。
PEG沉淀法这个大家只听说，很少使用；我们简单介绍下，分子量选择5000-7000的，配成30%的溶液，逐滴加入经过粗处理的腹水溶液(等体积PBS与腹水混合)中至终浓度4%，滴加过程在磁力搅拌器上进行。
最后再说分子筛（颗粒排阻法）
分子筛原理是：凝胶颗粒直径大小不同，颗粒内部有很多孔径，分子量小于颗粒孔径的就会“钻”入颗粒内部，多走一程，分子量较大的，”钻不进去“，会从颗粒之间的间隙通过，由于走的路程不一样，所以每个分子从柱子底部流出来的时间也不一样，接收不同的峰值，不同的蛋白分子处于相应峰值内。
以上的方法，似乎都很折腾，一步到位似乎不行，这个时候你不妨试试基因工程抗体，将细胞株的抗体基因都调取出来，构建抗体表达载体，利用哺乳动物细胞表达系统无血清表达抗体，抗体非常容易纯化，最高每升可以达到几百号毫克到克级。
在不断解决合作伙伴的技术难题的时候，针对鱼类IgM的纯化，我们研发出了好用的试剂：鱼IgM纯化试剂盒（Cat No.:IGP0021K）,小伙伴们不妨试试。
