第三章TOC分析方法的验证
一、分析方法验证的要求
分析方法学验证包括线性、检测限( MD )、定量限(COG)、准确度、精确度以及擦拭回收率。
Refrence:USP<1226>and ICHQ2(R1)
➜只有在分析方法是可靠的和可重复的时，验证才可通过。
➜USP<1226>与ICH Q2(R1)阐述了分析方法的验证程序。
二、TOC分析方法验证的前提：TOC分析仪的性能确认
➤分析仪器确认是一个过程，确保对特定测试使用分析方法是能符合目标用途的。
➤根据cGMP规定，“企业所使用的检测方法的准确度、灵敏度(检测限)、专属性和重现性(精确度)必须确立并有文件证明。”在这种情况下用TOC法进行清洁过程验证的测试之前，对分析仪器进行严格的确认就尤为重要。此方法包括由USP<1058>所建议的安装确认、运行确认和性能确认(IQ/OQ/PQ)。
《中国药典》(2015版)四部0682 制药用水中总有机碳测定法
三、系统适用性试验
要求：响应效率应为85%～115%。
试剂：
➜蔗糖标准溶液(含碳量0.500mg/L)
➜1，4-对苯醌标准溶液(含碳量0.500mg/L)
四、分析方法验证的要点
➤专属性(%碳)
➤线性度：5点
➤范围：最高和最低之间的浓度覆盖域
➤准确度：(总有机碳)
➤精确度：%RSD百分标准偏差
➤最低检测限(LOD)、最低定量限(LOQ)
➤可靠性：在不同的使用条件
五、TOC方法验证的具体内容
➤专属性
专属性：专属性是能能非常准确地确定所存被测物质。ICH Q2(R1)如能对目标物质进行准确的定量检测，有机碳，就显示出这分析方法对有机碳具有专属性。这可通过检测具有代表性的一些有机——可选一些含有除碳、氢、氧以外元素的有机物，比如含有氯、硫、氮或磷的有机物。
Example：FDA缺陷例子
“Your firm failed to establish and follow writtenprocedures to assure the cleaning and maintenance of equipment ud in themanufacturing of drug products. Forexample, cleaning validation for the CIP process vesl, which is utilized inthe aptic formulation of the CIP process vesl, which is utilized in theaptic formulation of trivalent bulk influenza vaccine… The study did notinclude swab sampling of the product transfer lines.”
贵司未能建立和遵循已写的操作规程，在药品制造中确保清洁和维护设备。例如，流感疫苗的CIP过程罐清洁验证未包括对生产线的棉签取样实验。
➤线性和范围
线性：是指测定结果与试样中被测物浓度呈正比关系的程度。
范围：是指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。
➜定量检查应至少测试5个浓度范围并且包含清洁的最低限和最高限度。
➜线性的相关系数应不低于0.98%。
➜浓度范围应达到残留物限度的50%-150%。
➜淋洗法和棉签法用于限度检查时不需做线性/范围验证。
Example：TOC测量值和目标物浓度的相关性
参考文献：《药物分析杂志》2013.33.(3)
➤精密度和准确度
要显示TOC法的精密度和准确度，以含10-6碳的标准品溶液连续检测10次。这里选用此碳浓度来评估精密度和准确度是因为通常残留物的TOC限度一般为此水平左右。在此TOC水平，精密度为1%，准确度为±5%。
➤回收率试验
确定合适取样方法(冲洗方法、擦拭方法、取样人员的操作培训及检测方法)可使污染物/残留被有效收回，最终为验证方法提供证据。
通过回收率试验验证取样过程的回收率和重现性。
通常取样回收率和检验方法回收率结合进行。
Ø取样方法
Ø擦拭法回收率
可接受标准回收率：≥50%
重现性：≤20%
步骤举例：
1、准备1块500 mm ×500 mm的平整光洁的不锈钢板。
2、在钢板上用钢锥划出400 mm ×400 mm的区域每隔100 mm划线形成16块100 mm ×100mm的方块。
3、配制浓度为160 mg/L的妥布霉素水溶液定量装入喷雾器。
4、将约10 mL溶液尽量均匀地喷在400 mm ×400 mm的区域内。
5、根据实际喷出的溶液量计算单位面积上的妥布霉素量约1μg/100mm2。
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6、自然干燥或用电吹风温和地吹干不锈钢板。
7、用注射用水润湿棉签按擦拭取样操作规程擦拭钢板每擦一个方块，100 cm2换一根棉签。在钢板上取均布的8个方块。
8、将棉签分别放入试管中定量加入注射用水10 mL，加塞轻摇试管并放置10 min，使物质溶出。然后将溶液稀释10倍。
9、使用TOC分析仪测定此清洁验证水样的TOC值。
