病毒基因组RNA提取试剂盒使用说明书

北京厚生博泰科技有限公司

Beijing Hooen Biotech Co., Ltd.

病毒RNA提取试剂盒

Virus RNA Kit

(目录号：HS0408)

产品包装

试剂盒成分 50 preps

Buffer GB 15 ml

Buffer RD 30 ml

Buffer RW 60 ml

Buffer RE 10 ml

Proteina K 1 ml

Spin Columns CG 50个

Collection Tubes (2 ml) 50个

RNaFree Tubes (1.5 ml) 50个

自备试剂

无水乙醇

储存条件

蛋白酶K于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃）

产品简介

本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒RNA。无

需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，独特的缓冲液/蛋白酶K体系能迅速裂解病毒，使病毒

蛋白与RNA分离，在蛋白酶K的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将病毒RNA选择性吸附

于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，最后低盐的洗脱缓冲液将

高纯度的病毒RNA从吸附柱膜上洗脱下来。

本试剂盒操作简单、快速，所得病毒RNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于

RT-PCR、Real-Time PCR、印迹等分子生物学实验。

产品特点

1.简便快速，1小时内可获得高纯度的病毒RNA。

2.无需有机溶剂抽提，使用安全。

*

3.重复性好，产量高。

4.所得病毒RNA纯度高，无污染物和抑制剂，方便下游应用。

注意事项

1.血清或血浆避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的RNA片段小，提

取量下降。

2.如缓冲液Buffer GB、Buffer RD结晶或产生沉淀，可在56℃水浴溶解。

3.所有离心步骤均为室温下操作。

4.本试剂盒也可提取高质量的病毒DNA，操作步骤相同。

操作步骤

1. 取1.5 ml离心管（自备），加入20 ul的Proteina K溶液。

2. 向离心管中加入200 ul血清或血浆，然后再加入200 ul Buffer GB，涡旋震荡15 c。

（注意：1、样本体积不足200 ul可以加入0.9% NaCl（自备）补足。2、为确保样本有效裂解，加入Buffer

GB后，需将样本与Buffer GB充分混匀。）

3．56℃孵育15 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。

4. 加入250 ul无水乙醇，涡旋震荡15 c，室温放置5 min，使溶液温度降至室温，短暂离

心，将管壁上的溶液收集到管底。

(

注意：如果环境温度超过25℃，无水乙醇应在冰上预冷后使用。)

5．

将一个Spin Columns CG放入Collection Tubes(2 ml)中，将上一步所得溶液转移到离

*

心吸附柱中，10 000 rpm离心30 c，弃收集管中的废液。

6. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer RD，室温10 000 rpm离心30 c，弃收集管中废液。

（注意：Buffer RD中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

7. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer RW，室温10 000 rpm离心30 c，弃收集管中废液。

（注意：如需进一步提高RNA纯度，可重复步骤7一次。Buffer RW中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙

醇挥发）

8．向吸附柱中加入500 ul无水乙醇，10 000 rpm离心30 c，倒掉收集管中的废液，将吸

附柱重新放回收集管中。

9．室温12 000 rpm离心3 min，甩干残留液体。

（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）

10. 将离心吸附柱置于一个RNaFree Tube (1.5 ml)中，小心打开吸附柱的盖子，室温放

置3 min，使吸附膜完全变干。加入30 ~ 100 ul的洗脱液，室温放置2 ~ 5 min。12 000 rpm

离心1 min，离心管底溶液即病毒RNA。

（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在50 ~ 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值

在7.0 ~ 8.5之间，为了增加RNA回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离

心收集）