微生物实验室真菌检查质量控制流程

微生物实验室真菌检查质量控制流程

一、 目的

规范微生物实验室管理程序，确保临床报告的质量。

二、 适用范围

微生物实验室的各类真菌检测。

三、 职责

实验室检验人员均必须熟知并遵守本程序。

四、 程序

(一) 临床样本的采集与处理

1. 皮屑 边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑

或活动边缘皮屑，取材前75%酒精消毒，作KOH涂

片。

2. 甲屑 用细挫或牙科磨钻取病甲与正常甲交界处

并且贴近甲床部的甲屑，作KOH涂片。

3. 毛发 取病发（变色，无光泽，弯曲，脆易折断，

松动易拔除）15根，75%酒精消毒，3～5根作直接

镜检。

4. 脓液 无菌采集，注意颗粒，用无菌蒸馏水稀释

后寻找。可作革兰染色，常规的KOH涂片。

5. CSF 采集于无菌试管3～5ml，立即送检。置冰

1 / 5

箱不宜超过1h。离心后以无菌吸管吸取离心沉淀物

1ml，作墨汁涂片镜检。

6. 血液 无菌抽血3～5ml立即于无菌抗凝管中，

BHIB:血标本量为培养基量的1/10，37℃5～7d出现

浑浊或菌团，挑取镜检同时移种SDA（注：每天检查

完毕后需摇动培养基，37℃震荡培养可加速真菌的生

长，提高检出率。不作直接检查，因其直接检查阳性

率低。

7. 体液、痰液、尿液、粪便 ①体液标本量10ml

离心沉淀取2ml沉淀液做直接镜检培养。②晨痰3～

5ml集于无菌瓶中(无菌生理盐水漱口数次后)，挑取

黏液或脓性部分：KOH涂片培养。③早晨中段尿或清

洁尿10ml，离心取沉淀液1ml做KOH涂片培养

（SDA每管种0.5ml）。④拭子：一般尽量不用，缺

点：A.不能得到足量的标本；B.采集的标本也不易从

棉花纤维上分离下来;C.容易干竭。采集标本后应迅速

放入内装1~2ml无菌蒸馏水的试管送检KOH涂片培

养。⑤纸盒送检，挑取黏液、脓血、乳酪样部分KOH

涂片培养（加抗生素）注：单纯培养阳性，不一定有

临床意义，KOH涂片发现菌丝，有诊断意义。

8. 组织：标本置无菌平皿中立即送检，置无菌匀浆器

加2ml蒸馏水，研磨成浆或1～2mm的小块，KOH

2 / 5

涂片培养。

(二) 涂片染色和直接镜检的质控

1. 氢氧化钾/复方氢氧化钾法：标本置于载玻片上，加

一滴浮载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热，即在

火焰上快速通过2～3次，不应使其沸腾，以免结晶，

然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用棉拭或

吸水纸吸去周围溢液，置于显微镜下检查。检查时应

遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后

用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小

和排列等。

2. 胶纸粘贴法：用1cm×1.5cm的透明双面胶带贴于

取材部位数分钟后自取材部位揭下，撕去复带在上面

的底板纸贴在载玻片上，使原贴在取材部位的一面暴

露在上面，再进行革兰染色或过碘酸锡夫染色，在操

作过程中应注意双向胶带粘贴在载玻片上时不可贴

反，而且要充分展平，否则影响观察。

革兰染色检查法：在载玻片上滴1滴生理盐水，将所采集的

标本均匀涂在载玻片上，自然干燥后，火焰固定或甲醇固定。

再选择革兰染色方法，染色后，以油镜观察。

3. 染液的质量控制

（1） 革兰染液每次新配置和使用中每周一次进行

质控，并进行记录。

3 / 5

（2） 氢氧化钾/复方氢氧化钾每周进行一次质控。

(三) 真菌鉴定质量保证

1. 对酵母样真菌如念珠菌或隐球菌在常规临床细菌室

已有较成熟的方法学，可用显色培养基。

2. 常规鉴定丝状真菌主要依赖于其生长过程中形态变

化和特点，所以要求从事丝状真菌检测的检验人员应

作专业短期培训；任何实验室都应建立规范的涂片鉴

定方法，要正确区分酵母样真菌或丝状真菌、毛霉菌

和曲霉（有顶囊），对不常见的真菌不要轻易作为污

染菌报告。

(四) 结果报告

1. 药敏岗位检验人员综合真菌鉴定和药敏结果形成检

验报告并签名，微生物实验室负责人或指定人按照相

关抗菌药物试验标准操作规程核对药敏结果，尤其注

意异常和少见结果。

2. 告病人结果之前，应确定质控在可接受范围。

3. 经双人双核后的报告单交报告发放员分发到各病房

或门诊病人，注意签收并记录。缺乏审核者得报告结

果，应由微生物实验室负责人或指定人在 24 小时内

进行评估。

4. 血培养阳性涂片为真菌和脑脊液墨汁染色发现隐球

菌的初步报告经核实后，按《三级报告程序》报告。

4 / 5

5. 完成分析后的微生物标本，检验人员应按照《检验

后标本保存程序》安全保管标本和平板，要求有明确

标识以备复查。3-5 日后，由废弃物处理岗位人员按

照《废弃物处理程序》处理。

遇到来自临床或病人对检验结果的抱怨，应按照《投诉与抱

怨处理程序》处理。

5 / 5