巢蛋白对维持足细胞形态作用的探讨

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中国病理生理杂志Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２００９，２５（１）：１５６—１５９

［文章编号］１０００—４７ｌ８（２００９）０１－０１５６—０４

巢蛋白对维持足细胞形态作用的探讨术

苏蔚 ，房成 ，杨海春 ， 陈靖 ，顾勇 ， 郝传明

（ 复旦大学附属华ｔｈＮ院肾脏科，上海２０００４０；

新乡医学院病理教研室，河南新乡４５３００３）

［摘要］ 目的：观察细胞骨架蛋白巢蛋白（ｎｅｓｔｉｎ）在体外培养的小鼠足细胞中的表达及在维持足细胞形态

方面的作用。方法：应用免疫荧光技术检测ｎｅｓｔｉｎ在条件性永生的足细胞中的表达；应用ＲＮＡ干扰技术抑制巢蛋

白ｎｅｓｔｉｎ在足细胞中的表达，观察足细胞形态的变化并计算ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ组和无关序列ｓｉＲＮＡ组中有足突的足细

胞数量。结果：体外培养的足细胞中巢蛋白呈丝状分布于胞浆；转染ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ质粒的足细胞，足突变短或消

失，而转染无关对照序列ｓｉＲＮＡ质粒的足细胞形态未见改变；无关对照组有足突的足细胞数为７７．Ｏ％±６．３％，转

染ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ序列质粒组有足突的细胞数为１６．Ｏ％±４．６％，两组差异显著（ｎ＝３，Ｐ＜０．０１）。结论：巢蛋白ｎｅｓ・

ｔｉｎ对于维持足细胞正常形态具有重要作用。

［关键词］足细胞；巢蛋白；ＲＮＡ干扰；免疫荧光

［中图分类号］Ｒ３ ［文献标识码］Ａ

Ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ

ＳＵ Ｗｅｉ ，ＦＡＮＧ Ｃｈｅｎｇ ，ＹＡＮＧ Ｈａｉ—ｃｈｕｎ ，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｇ ，ＧＵ Ｙｏｎｇ ，ＨＡＯ Ｃｈｕａｎ一

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１

ｍｌｎｇ

（‘Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｈｕａｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００４０，Ｃｈｉｎａ； Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，

Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００３，Ｃｈｉｎａ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｎｓｗｅｉ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｅｎ）

［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］ ＡＩＭ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ，ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｌａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｍｕｒｉｎｅ

ｏｐｄｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｄｏｃｙｔｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｔｈｅ ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ ｍｕｒｉｎｅ ｐｏｄｏ－

ｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ．ｔｈｅ ｅｘ－

ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｓｆｉｎ ｗａｓ ｋｎｏｃｋ—ｄｏｗｎ ｂｙ ＲＮＡｉ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎｅｓｔｉｎ ｋｎｏｃｋ—ｄｏｗｎ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎｄ ｉｍ・

ｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｔｈｅ ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ ｌｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ ｍａｘｉｍａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｂｏｄｙ ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｃｅｎｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｉＲＮＡ

ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｅｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｎｏｎｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｏｌｉｇｏ ｗｅｒｅ ｃｏｕｎｔｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｒｅ—

ｄｕｃｅｄ ｏｒ ａｂｏｌｉｓｈｅｄ ｎｅｓｔｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｉｎ ｃｅｉｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｓｔｉｎ ｓｉＲＮＡ，ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｗａｓ ｓｉｇ－

ｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ｖｅｃｔｏｒ（７７．０％±６．３％ＶＳ １６．０％±４．６％，ｎ：３，Ｐ＜０．Ｏ１）．

ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｎｅｓｔｉｎ ｍａｙ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ｎｏｒｍａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｄｏｅｙｔｅｓ．

［ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ］Ｐｏｄｏｃｙｔｅｓ；Ｎｅｓｔｉｎ；ＲＮＡ ｉｎｔｅｌｆｅｒｅｎｃｅ；Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ

Ｎｅｓｔｉｎ（巢蛋白）是迄今为止发现的第Ⅵ类中间

本实验应用ＲＮＡ干扰技术沉默巢蛋白ｎｅｓｔｉｎ在足细

丝蛋白，被称为中枢神经系统多能干细胞的标志性

胞中的表达，以观察ｎｅｓｔｉｎ对于维持足细胞形态方面

蛋白。Ｎｅｓｔｉｎ在啮齿类动物肾脏发育过程中，可表达

的作用。

于来源于后肾间充质的肾小管上皮细胞及小球内皮

细胞，而在肾脏发育成熟后，ｎｅｓｔｉｎ只表达于分化成

材料和方法

熟的足细胞中 Ｊ。足细胞是肾小球滤过膜的重要组

１材料

成成分，是一种巨大胞体的上皮细胞，依靠其指状足 条件性永生的小鼠足细胞由Ｐｅｔｅｒ Ｍｕｎｄｅｌ教授

突附着在毛细血管基底膜表面，足突之间形成曲折 （Ｍｏｕｎｔ Ｓｉｎａｉ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）馈赠。该细胞含有１

的滤过裂隙，足细胞的功能是血液选择性滤过的保

个温度敏感的ＳＶ４０一Ｔ抗原基因，该基因可由

障，足细胞功能障碍将导致蛋白尿形成及慢性肾脏 ＩＦＮ一＾ｙ诱导的Ｈ一２Ｋｂ启动子控制，因此，当细胞培

病变的小球硬化性损伤。作为细胞骨架蛋白，ｎｅｓｔｉｎ 养在３３℃，有ＩＦＮ一 存在，细胞将处于未分化状态，

在维持足细胞形态和功能方面是否具有特殊作用，

以保持其永生性。当细胞置于３７℃，并去除ＩＦＮ一

［收稿日期］２００７—１０—１８ ［修回日期］２００８—０４—１５

［基金项目］国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．３０５７０８６１）

△通讯作者Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｎｓｗｅｉ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ