藻类生物学实验海科

实验一 大型海藻种类形态观察

<4学时第八周）

一、实验目的

了解海洋藻类----大型海藻与微藻的形态与分类。

二、实验材料及用具

1、

实验材料：

1）大型海藻标本<学院标本室）；

2）海带孢子体<可用干海带泡发），江篱<海洋学院附近打

捞）；<取一部分冻存于-20冰箱，作为叶绿素提取实验的材

料）b5E2RGbCAP

2、实验器材：显微镜、胶头滴管<每瓶藻一支）、盖玻片、载

玻片、刀片<做海藻切片）。

4、试剂：70%乙醇<每组一瓶）

三、实验步骤

1、大型海藻标本观察；将标本馆的拉丁文名抄录下来，网上检索图

片和分类。

2、海带的外部形态观察：藻体明显分为固着器、柄部和叶片，在叶

片中央有两条平行纵走的浅沟，孢子体幼龄期叶面平滑，小海带期

叶片出现凹凸现象，大海带期叶面则平直宽厚。p1EanqFDPw

3、海带的内部构造：

①用徒手切片的方法，取一小块孢子体进行横切片，在显微镜

下观察：孢子体的柄和叶均分为表层、皮层和髓部。

②同样取一小块孢子体进行纵切片，在显微镜下观察：表皮层

由1-2层排列紧密的小细胞组成，外皮层细胞间分布1-2层粘液

腔，其腔内有分泌细胞，髓丝细胞一端膨大为喇叭花，分生细胞位

于叶片与柄之间。DXDiTa9E3d

4、江蓠的内部构造观察：

①江蓠的纵切面。

②江蓠的横切面。

③江蓠囊果横切面。

5、紫菜的形态与构造：

干紫菜先用水浸泡散开，再进行观察。

固着器：由根丝集合而成。

叶状体：由一层或两层细胞构成。

柄：叶状体基部与固着器之间的部分。

四、作业：

1、绘制大型海藻图：选5个标本，注明拉丁文名，简要说明其生物

学特性<利用拉丁文名进行网上检索）。

2、绘出海带和江篱的内部构造，紫菜的外形。

附1：江篱与海带的内部构造

图1. 江篱藻体的内部构造

A.藻体横切面观；B.藻体纵切面观；1表皮；2髓部细

胞 3表皮细胞

图2. 海带构造

A.海带孢子体横切面；B.髓部，C.示喇叭丝；皮层部分横切

面，示粘液腔道形成的时期；D.成体横切面，示粘液腔道；co皮

层；e分泌细胞；hg藻丝；me髓部；m表面分生细胞；s分泌腔；

v.b.f结合的喇叭丝RTCrpUDGiT

实验二 微型海藻形态观察和培养

<4学时，第九周）

一、实验目的

观察几种重要经济微藻的形态特征，几种掌握单细胞微藻的实

验室培养方法，细胞生长曲线观察。

二、实验材料及用具

1、实验材料：

小球藻、扁藻、等鞭金藻、角毛藻、骨条藻、茧形藻、池塘水

样等微藻。

2、实验仪器：电炉、恒温干燥箱、灭菌锅、pH计、可见分光光

度计、血球计数板

3、实验器材：500ml 试剂瓶<每组5个）；0.45m的滤膜<一



个）；抽滤装置(或针管>；玻棒、500ml烧杯、50ml容量瓶<每组一

个）；250ml锥形瓶<每组2个）、牛皮纸、细绵绳5PCzVD7HxA

4、试剂：蒸馏水、消毒海水、各种试剂<见培养基配方），微

藻培养母液

三、实验步骤

1、微藻形态观察：分别取各种微藻水样置于载玻片上，盖上盖

玻片，于显微镜下观察。先用10倍镜观察，然后转换物镜转换

器用40倍观察。jLBHrnAILg

2、培养基母液配制<配方见附2）：<提前配好，有兴趣的同学

可与实验老师王老师联系好时间，学习配制）1000倍培养基母

液<强调维生素母液的配制方法）。配方见附1。xHAQX74J0X

3、培养微藻的容器、工具及用水的消毒<提前准备）：

<1）培养微藻所用的容器、工具应用洗刷干净后晾干，放置恒温

干燥箱中加热，120℃恒温1小时以上，自然冷却备用。

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<2）加热煮沸消毒海水冷却至室温后备用。

4、配制微藻培养液。按照母液配制比例把母液加入消毒海水，

配制培养液<例如，1000倍母液，则每升消毒海水中加入1毫

升母液，摇晃均匀，就成了培养液）。Zzz6ZB2Ltk

5、接种：取两种微藻，各按1/3～1/5接种<即把1份藻种加入

3～5份培养液中）。

6、培养、管理。将接种好的微藻置于适宜的条件下培养，每天

摇晃1-2次，。

7、藻细胞密度计数<方法见附3）。分光光度计测定吸光值或血

球计数板计数藻细胞密度。不同种类的微藻所选用的波长不一

样，一般绿藻门波长为720-750，金藻门、硅藻门波长为420。

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8、本实验采用分光光度计每2天测定一次，培养时间为横坐标，

藻细胞的OD值为纵坐标，绘制生长曲线。培养两周。rqyn14ZNXI

四、作业：

1、绘制观察到的微藻的形态图。

2、通过哪些具体措施使培养基无菌？

3、为何配制母液？配制培养基时，为何要等消毒海水冷却后再加母

液？

4、EDTA的作用？

5.以培养时间为横坐标，相对应藻液的OD值为纵坐标，作图。

6、计算每瓶藻的培养6天的生长速率，公式如下：

K =– lnN1）/< t2 - t1） <1）

T = 0.6931/K <2）

其中：K为相对生长速率；t1、t2为对应的培养时间；N1和N2分

别为t1、t2时的细胞密度(微藻用OD值，江篱用重量>；T为细胞

的平均倍增时间。t1就是刚放入培养箱的那天，计算培养6天后<

即t2-t1=6,lnN1、lnN2分别为培养第一天和第六天的OD值的自然

对数）的K值，再计算一个从培养第1天到最后1天的K值，分别

以表格的形式表示。EmxvxOtOco

附1：单细胞微藻的培养基配方

<一）宁波3号培养基配方

试剂名称重量 试剂名称重量）

NaNO3 100 mgKH2PO410 mg

FeSO42.5 mgMnSO40.25 mg

Na2-EDTA10 mg维生素B16μg

维生素

B120.05μg

自然海水1000ml

<二）F/2 (+ Si>培养基母液的配制

1.A液 500 ml 1000倍

NaNO3 37.5 g。 NaH2PO4 2.5 g

2.B液 500 ml 1000倍

Fe-EDTA 2.5 g (FeCl3 1.6 g + EDTA 0.9 g>

3.C液 500 ml 1000倍

Na2SiO3.9H2O 10 g

4.D液 500 ml 1000倍

盐酸硫铵素(VB1> 5 mg (试剂 50 mg/ml取100 μl>

Biotin VH 0.025 mg (试剂 0.1 mg/ml取250 μl>

VB12 0.025 mg (试剂 0.25 mg/ml取100 μl>

先用维生素分别用纯水溶解混合，稀HCl将pH调到4.5~5.0，最后

用纯水稀释至1升。膜过滤后冰冻保存。SixE2yXPq5

5.E液 500 ml 1000倍

CuSO4.5H2O 0.0098 mg

ZnSO4.7H2O 0.022 mg

CaCl2.6H2O 0.01 mg

MgCl2.4H2O 0.180 mg

Na2MoO4.2H2O 0.0063 mg

1000 ml (1升> F/2 (+ Si>培养基 = 1000 ml (1升>过滤灭菌

海水 + 1ml A液 + 1ml B液+ 1ml D液+ 1ml E液 (+ 1ml C

液>6ewMyirQFL

附3：

单细胞藻类的定量方法

（一）

重量测定法：湿重法；干重法

（二）

个体计数法：水滴计数法；血球计数板计数法；

血球计数板计数方法：

放大

图3. 血球计数板

1 搅拌：由于藻类细胞在培养液中分布不均匀，所以在取产前必须

进行搅拌，搅拌后立即取样。

2固定、稀释：运动细胞需加碘液杀死才能计数。如细胞浓度过

大，计数困难，需把水样稀释到适宜的程度。

3 计数板与盖玻片洗净擦干――盖好盖玻片――摇荡藻液――吸取

藻液<干的平口微吸管）――迅速把吸管放在计数板上的盖玻片边缘

处，轻压橡皮头，使藻液流入计数板内――1分钟后低倍镜下计数

－计数任何对角两大格<加盖玻片后每一大格即形成一个体积为0.1

立方毫M的空间），然后取其平均值。每个样品须重复计数两次。

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1毫升水体藻细胞＝计算平均值×10,000×藻稀释倍数

鲁哥氏液）又称碘液，常用的配方是：将6克的

碘化钾溶于

20毫升水中，待完全溶解后加入4克碘，摇荡，待碘完全溶解后，

加入80毫升蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内。y6v3ALoS89

（三）

分光光度计定量法

微藻的细胞密度在某一范围内与分光光度计在特定波长下的OD

值的大小成正比关系，因此，可用分光光度计直接定量。

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测定步骤：

1. 预热分光光度计约20min，选择波长<绿藻门720-750，硅藻

门、金藻门420），用培养液作为參比，调零。0YujCfmUCw

2．分别测定待测藻液的OD值。

3.以培养时间为横坐标，相对应藻液的OD值为纵坐标，作图。

实验三 藻类细胞叶绿素的提取和细胞色素的观察

<4学时，第十一周）

注：第十周继续培养微藻

一、实验目的

掌握大型和微型海藻叶绿素测定方法。观察比较不同门藻类的

叶绿素的吸收光谱。叶绿素含量是衡量大型海藻生长状态的指标之

一。浮游植物叶绿素含量，可用来初步估量浮游植物的光合作用能

力，并进行估量水域初级生产力。同样也适用于实验室单种培养实

验的定量方面。eUts8ZQVRd

二、实验材料及用具

1、实验材料：

海带、江篱

2、实验器材：研钵<每组一套）、15ml刻度试管<每组2支，

尽量使用玻璃试管）、剪刀、分光光度计、天平、叶绿素荧光观察

箱<一端带光源的纸箱）、台式离心机<不用控温）、胶头滴管<每组

2支）、10ml左右玻璃试管<每组2支）sQsAEJkW5T

4、试剂：90%丙酮<分析纯）、MgCO3

三、实验步骤

1、

取样：清洗海带和江篱，剪取藻体0.05g左右(记录准确的重

量>。

2

研磨和提取：加入2－3ml的90％丙酮和1小匙MgCO3，研

磨，在弱光下研磨1到2min，再用5ml的90％丙酮把杵上和

研磨管内的东西洗入15ml的有螺旋盖的离心管内，静置于暗

处10min，使色素充分被提取。GMsIasNXkA

3、

离心<2000g，5min）或静置，使固液分离。

4

测定：小心移取将上清液放入玻璃试管内，在分光光度计

上，用1cm的比色皿分别读取750nm、663nm、645nm、630nm

波长的吸光度，并以90％的丙酮作校正吸光度测定。

TIrRGchYzg

6、计算：分别从663、645、630nm时的光密度值，减去750nm

时的光密度值，再除以液槽光程<厘M），即为D663、D645、D630

的值。下式计算叶绿素在90％丙酮中的含量。7EqZcWLZNX

Chla<g/ml）=11.64*D663-2.16*D645+0.1D630



Chlb<g/ml）=3.94*D663+20.97*D645-3.66D630



Chlc<g/ml）=5.53*D663-14.81*D645+54.22D630



7、叶绿素吸收光谱的测定：将提取的叶绿素放于(石英>比色皿

中，用紫外分光光度计测定400nm-750nm波段的吸收光谱。

lzq7IGf02E

三、作业：

1、

2、

3、

计算几种藻类的叶绿素含量

思考：叶绿素提取过程中为何要避光？为何加MgCO3？

4、 申明：

5、 所有资料为本人收集整理，仅限个人学习使

用，勿做商业用途。

6、