药物残留检测

今H畜牧曹医

高效液相色谱法检测羊奶中阿维菌素类药物残留

李曼，李宏娟，马珊珊，杨赵伟*

（秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心066000）

摘要：为了建立高效液相色谱法测定羊奶中阿维菌素类药

物的残留，

试验采用乙腈和去离子水提取样品中目标化合物，

C18固相萃取小柱净化，通过高效液相荧光检测器测定，外标法

定量。

结果表明：该方法2耀200滋g/L线性良好，羊奶中阿维菌素

类药物的方法检出限为1.2滋g/kg~2.5滋g/kg,回收率范围为

66.7%~104%，

相对标准偏差为1.8%~5.4%,

该方法简单、快速，可

用于羊奶中阿维菌素类药物残留的检测遥

关键词：高效液相色谱法；羊奶；

阿维菌素；残留

阿维菌素类药物（Avermectins,AVMs）是由链霉菌的发酵产

物中分离的大环内酯类抗生素，是目前兽医临床上用量最大的

抗寄生虫药，被广泛应用于牛、羊等动物，在动物体内残留时间长

11-21遥其作用机理是干扰害虫神经生理活动

,致使害虫岀现麻痹而

中毒死亡叫阿维菌素类药物对哺乳动物的毒性很低，但是长期

食用含有此类药物的奶产品会对人类健康产生潜在威胁，应对奶

产品中阿维菌素类药物含量进行监测叫

GB/T29696-2013《牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定

高效液相色谱法》适用于牛奶中阿维菌素类药物残留检测的制

样和高效液相色谱测定方法，该方法检测灵敏度高且不需要昂

贵的仪器，普及性强|5-61遥本文通过对该方法中的前处理方法和仪

器检测条件进行改进

,使该方法适用于羊奶中阿维菌素类药物

的检测，对有效监控该药在羊的养殖中的应用、评价羊奶食用的

安全性具有重要意义。

1材料与仪器

1.1仪器

高效液相色谱仪

（型号为U3000）,购自赛默飞世尔科技（中

国）有限公司；荧光检测器（型号为FLD-3100）,购自赛默飞世尔

科技（中国）有限公司

；

漩涡振荡器（型号为MS3）,购自IKA公

司；

智能高速冷冻离心机

（型号为

3H20RI）,购自湖南赫西仪器

装备有限公司；固相萃取浓缩装置（型号为USE-24S）,购自北

京优晟联合科技有限公司；氮吹仪（型号为TTL-域）

,购自北京

斯珀特科技有限公司

；

电子天平（型号为XA205）,购自梅特勒-

托利多国际贸易（上海）

有限公司；电子天平

（型号为HZF-

A200），购自福州华志科学仪器有限公司遥

基金项目：河北省重点研发计划项目（19225502D）

作者简介：李曼（1980-）,

女，汉族，农艺师，本科，从事农畜产品

检测

通讯作者:杨赵伟（1984-），汉族，高级畜牧师，从事农畜产品检

测

1.2试剂

阿维菌素、多拉菌素

、伊维菌素标准品

（纯度均逸94%

）,购

自德国torferGmbH公司，埃玛菌素标准品（100滋g/mL）

购自天津阿尔塔科技有限公司；

甲醇（色谱纯）购自德国CNW

公

司；乙腈

（色谱纯）

购自德国CNW公司；冰乙酸（色谱纯）购自沈

阳市试剂五厂；三氟乙酸酐（化学纯）购自南京化学试剂股份有

限公司；三乙胺（分析纯）购自电脑基础 天津市科密欧化学试剂有限公司；

异辛烷（色谱纯）

购自德国CNW公司；

N-甲基咪唑（色谱纯）购自

西亚试剂；C18固相萃取柱（500mg/6mL）,购自沃特世科技（上

海）有限公司。

洗涤液：取乙月青

30mL、去离子水70mL和三乙胺

20滋L,

混

匀；

衍生化试剂A液:取N-甲基咪唑1mL、乙腈

1mL,混匀，现

用现配

；

衍生化试剂B液:

取三氟乙酸酐1mL、乙腈2mL,混匀，现用

现配。

2方法

2.1标准溶液的配制

阿维菌素类标准储备液：分别精密称取阿维菌素、多拉菌

素、伊维菌素标准品25mg,用乙腈溶解并定容至25mL,配制成

浓度为1mg/mL的阿维菌素类标准储备液，于2益耀8益保存。

埃玛菌素标准储备液:

取1mL

埃玛菌素标准品，用乙腈稀

释定容至10mL，配制成浓度为

10滋g/mL的标准储备液，于2

益-

8益保存。

混合标准工作液:分别精密吸取阿维菌素、多拉菌素、伊维

菌素标准储备液100^L（储备液由乙腈稀释至浓度为100滋g/mL）,

埃玛菌素标准储备液1mL,置于10mL容量瓶中，用乙腈稀释至

刻度

，摇匀，即得混合标准中间溶液，阿维菌素、商朝 多拉菌素、伊维

菌素、埃玛菌素浓度均为1滋

g/mL。

2.2样品的制备及处理

2.2.1样品的提取

称取羊奶试样2.00g0.05g

（

精确到0.01g）于50mL具塞离

心管中，

加乙月青

4mL,涡动1min,5000r/min离心10min,取上清

液；残渣中加乙腈4mL,重复提取一次，合并两次上清液,加去离

子水10mL,、三乙胺25滋L,混匀,备用。

2.2.2样品的净化

C18柱依次用乙腈5mL

和洗涤液5mL活化，取备用液过

柱，自然流干，

抽干5min,加异辛烷3mL洗涤，抽干

5min,乙腈

5mL洗脱,收集洗脱液于10mL试管中，于55益水浴吹干，备用遥

17

E实嫁砰忆I

xpenmentaTstudyononiine

2.2.3样品的衍生化

于备用试管中依次加入衍生化试剂A液100

滋L、衍生化试

剂B

液150滋L,

密闭

，

涡动

10s，依次加入冰乙酸50滋L和三乙胺

50

滋L,

涡动

10s，于猪柳 室温下密闭反应

30min，加甲醇650滋L混匀，过

0.22滋m滤膜，供高效液相色谱法测定。

2.3色谱条件确定

使用液相色画太阳 谱柱（型号为AccucoreC18,150x4.6mm；

2.6滋m）,进样量20滋L,

激发波长365nm，发射波长475nm，确定

最佳的流动相

（甲醇和去离子水）组成,流速和柱温。

2.4标准曲线的绘制

精密量取

1

滋g/mL阿维菌素类混合标准工作液适量，用乙

腈稀释，配制成浓度为5、10、20、50、100、200zg/L的系列标准溶

液

，各取1.0mL于

10mL试管中，于55益水浴吹干，依次加入衍

生化试剂A液100

滋L、衍生化试剂B液150滋L，密闭，涡动10s,

依次加入冰乙酸50滋L和三乙胺50滋L,

涡动10s，

于室温下密闭

反应30min，加甲醇650滋L混匀,供高效液相色谱测定，以测得峰

面积为纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。

2.5方法检升旗简笔画 出限

按照上述2.2方法进行样品处理，根据样品进行标准物质

添加回收率实验，以3倍信噪比可测得的最低质量浓度确定方

法的检岀限叫

2.6准确度和精确度

采用标准添加法，在空白组织中添加3个不同浓度（25滋g/

kg

、50

滋g/kg和100滋g

/kg

）的阿维菌素类标准溶液进行回收率测

定,每个浓度设定6个平行样品，同时进行空白试验，重复3次，

计算该方法的准确度和精确度。

3结果与讨论

3.1确定色谱条件

在选定液相色谱和色谱柱的条件下，阿维菌素、多拉菌素、

伊维菌素

、

埃玛菌素均得到很好的分离，标准品依次在&321min

（阿维菌素）、11.113min（多拉菌素）、14.011min（

伊维菌素）、

16.164min（埃玛菌素）岀峰时

,此时流动相组成为甲醇+

去离子

水

=92+8，流速1.0mL/min，柱温25益遥准确吸取50滋g/L标准品溶

液20滋L,重复进样10次，

在相同色谱条件下对峰面积进行分

析，结果表明，

峰面积的相对标准偏差渊

RSD）为0.33%,表明该色

谱条件性能稳定。

3.2标准曲线及线性范围

将系列标准工作溶液，依次从低浓度到高浓度进行分析。

按

峰面积与对应的对照溶液的浓度做标准曲线。其浓度在2耀

200滋g/L范围内呈良好的线性关系，线性回归方程及相关系数见

表1,100滋g/L阿维菌素类药物标准溶液色谱图见图1。

3.3方法检出限

羊奶空白样品的色谱图及羊奶空白样品中添加50滋g/kg

表1阿维菌素类药物线性方程及相关系数

阿唯侗粕箜药物■Hl强束戡

问维閑索Y-!4.77X+282.09

0.9997

Y-mS^X+255.18

Y=833J8X-2O0-28

埃玛繭緊Y=5S*l；05X+l74.68

0刑旳

图

1阿维菌素类药物标准溶液色谱图（100ng/L）

图2羊奶空白样品色谱图

3Iten.^I-'.-AH!4|Hl

I-ek

SMWO

warn

UhaSAMillitslifeirj

图3羊奶加标样品色谱图（50滋g/kg）

阿维菌素类药物的色谱图，见图2〜3

,

结果显示空白试料对所测

分析物无干扰，各待测物的检岀限分别为阿维菌素1.2滋g/kg、多

拉菌素2.0滋

g/kg、伊维菌素2.3

滋g/kg、埃玛菌素2.5滋g/kg。

3.4准确度和精密度

羊奶中添加不同水平阿维菌素类药物回收率见表2遥如表

所示

，四种药物回收率达到66.7%~104%，相对标准偏差（RSD）

18

今H畜牧曹医

表2羊奶中阿维菌素类药物添加回收率试验结果

闖淮1■汶整托费

序冋举岬倉F的倒戟审

[%•

1冷誓列

■J11-昕点I

SJ.5-95.595.6-103

如一5上

W7-7J.S曲-77.4

71.7-713

J

为1.8%~5.4%。

4结论

羊奶中的阿维菌素、多拉菌素、伊维菌素、埃玛菌素等药物,

用乙腈和去离子水提取,C18固相萃取小柱净化,三丁香花 氟乙酸酐和

N-甲基咪唑衍生化，高效液相色谱-荧光法测定

，回收率范围为

66.7%~104%,相对标准偏差为1.8%~5.4%，该方法的检岀限为

1.2滋g/kg~2.5滋g/kg。该方法稳定性好，回收率咼，检测限低，具有

良好的可操作性和重现性,方法准确度和精密度均能满足兽药

残留分析方面的要求，适用于羊奶中阿维菌素类药物残留分析。

参考文献

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(

后接第28页)

夏季应该尽量降低猪群饲养密度，这样可以有效缓解热应激给

猪群带来的危害。现代规模化的养猪场，主要根据猪群品种、季

节、

生长发育速度

、体重、设施条件、技术水平等来科学设计猪群

饲养密度,针对饲养管理过程中的具体情况，及时分群或转舍,

帮助猪群顺利度过夏季，以预防热应激的发生。

一般夏季猪只采食量减少,为了满足猪群正常生长发育对

各种营养物质的需要，应适当调整饲料配方，尽量提高饲料营养

水平，建议减少纤维原料的使用，并在饲料中添加2%~5%的植

物油，可以有效提高饲料能量水平。为了缓解热应激可以适当降

低饲料中粗蛋白的含量，因为机体消化粗蛋白时会产生更多的

热量，但是应保证必需氨基酸含量充足,以满足机体生长发育的

需求叫

夏季应调整喂料时间，避开中午前后高温时段饲喂猪群，以

免降低采食量和产生更多的食后体增热

。建议在清晨或傍晚气

温凉爽的时候饲喂猪群，白天只供给麸皮或豆渣类食物,这样食

物能量含量低、

适口性好

,能够有效缓解热应激。如果白天采食

量太少，可以在晚上在补充饲喂一次,确保猪群增重达标。

4.4使用抗热应激药物

常见的抗热应激的药物有维生素、小苏打、

电解质和部分中

草药等。在猪舍温度超过35益时必须采取预防热应激的措施，生

产中常用药物方案如下:在饲料或饮水中添加维生素C、

维生素

E、可溶性氨基多维、小苏打等，常用的抗应激中草药有柴胡口服

液、鱼腥草散

、穿心莲散等，还可以在饲料中添加山楂、甘草、陈

皮、苍术等健脾开胃和清热消暑的中药,有利于提高猪群采食量

和抗热应激能力。

4.5热应激的治疗方法

加强饲养管理,每天认真观察猪群精神状况，一旦发现猪群

有热应激反应，应立即将病猪转移到通风良好的阴凉处，先让猪

口中含上冰块并用冷水浇头,进行物理降温,然后肌注5mL、10%

的樟脑磺酸钠注射液，每天注射2次，同时对耳静脉放血

200mL，再静脉注射250mL、

5%葡萄糖盐水，间隔6h后再注射一

次,有利于及时补充体内流失的水分,帮助猪尽快恢复健康131遥

5小结

总之,我们在了解猪群发生热应激的原因

、机理和坚持的议论文 临床表现

后，清楚了热应激给猪群带来的严重影响,所以在生产实践中必

须采取综合防控措施来缓解热应激,建议在建设猪舍时增加降

温设施

，夏季供给充足新鲜的饮水，

并加强饲养管理、

提高饲养

水平,在饲料或饮水中添加抗应激药物,认真观察猪群，一旦发

现有热应激反应时，立即采取相应的治疗措施，避免热应激给猪

群造成损伤。

参考文献

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