蛋白裂解液

细胞裂解液成分及类型

1.裂解液成分了解：

（1）⼤多有效成分都是去垢剂，那么去垢剂是什么呢？

去垢剂功能的关键是具有两亲结构。所有的去垢剂都具有亲⽔“头部”区域和疏⽔“尾部”区域这⼀特征，常⽤的阴离⼦去垢剂SDS结构如图：

这些结构特性使得去垢剂可以在⽔性介质中聚集。在⾜够⾼的浓度下，每个分⼦的极性亲⽔区域朝向极性溶质（⽔），⽽疏⽔区域聚集在⼀起，形

成⼀个具有疏⽔核⼼的热⼒学稳定的胶束。去垢剂胶束的疏⽔核⼼区域与蛋⽩质的疏⽔表⾯结合，形成可溶性的蛋⽩质-去垢剂复合物。

去垢剂根据其亲⽔基团的不同分为：阴/阳离⼦去垢剂、⾮离⼦型两性去垢剂、两性去垢剂。

a阴/阳离⼦型去垢剂：作⽤强烈，会更⼤程度的改变蛋⽩质的结构，更容易受到pH、离⼦强度和反离⼦的性质等因素影响；

b⾮离⼦型去垢剂：作⽤温和，由于不分离蛋⽩质-蛋⽩质键，⾮离⼦型去垢剂使得蛋⽩质可以保留其天然的结构和功能，不易变形（疏⽔链长度

较短的去垢剂更易引起蛋⽩质失活）；

c两性去垢剂：相对于离⼦型去垢剂其更少产⽣变性，相对于⾮离⼦型去垢剂，⼜可以更有效的破坏蛋⽩质-蛋⽩质键并减少聚集。

（2）配置裂解液都需要Tris缓冲液，⼜是什么呢？

学名叫三羟甲基氨基甲烷，它和Tris-ba是⼀个东西，1M的Tris溶液的pH值⼤约是10～11，即常说的Tris碱；

-cl和Tris-HCl是⼀个东西，就是写法上有所不同，即常说的Tris酸；

-HCl就是在Tris-ba的溶液中加⼊适当量的盐酸，调成你所需要的PH值。

2.常⽤裂解液种类：

（1）NP40lysisbuffer：

a.主要成分50mMTris(pH7.4)，150mMNaCl，1%NP-40。

b.概述：NP-40是⼀种很温和的⾮离⼦型去垢剂，1%浓度基本可以破坏掉细胞膜，⽽对核膜的破坏作⽤较弱，结合特定的缓冲液可以获得胞浆蛋

⽩。与蛋⽩结合⼒强，⽤于防⽌物质分⼦疏⽔间相互作⽤，确保蛋⽩的充分溶解和结构稳定。

c.⽤途：常规的Western、IP和co-IP和ELISA，本实验室是做核蛋⽩的，由于获取核蛋⽩需要裂解细胞核膜，因此本labWB实验⽤

1%NP40+0.1%SDS（可使蛋⽩变形），IP/pulldown实验⽤1%NP40+超声（保留蛋⽩结构）。

（2）SDSlysisbuffer：

a.主要成分：50mMTris(pH8.1)，1%SDS

b.概述：是⼀种⽐较强烈的细胞组织裂解液，可裂解核膜。在SDS-PAGE电泳中，SDS能使蛋⽩氢键和疏⽔键打开并结合蛋⽩分⼦，使各种蛋⽩

质-SDS复合物都带上相同密度电荷且远远超过蛋⽩分⼦原有电荷，从⽽掩盖蛋⽩间电荷差别，使得电泳迁移率只取决于分⼦⼤⼩这⼀因素。

c.⽤途：⽤于常规Western、ChIP等