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琥珀酸脱氢酶

更新时间:2023-03-11 02:06:37 阅读: 评论:0

百合花的折法-鲢鱼头的做法

琥珀酸脱氢酶
2023年3月11日发(作者:幼儿园教师读书心得)

实验十六:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

【实验名称】:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

09救援一班第三大组李岚宇2009222336

室温:25℃

(一)实验目的:1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。

2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。

(二)实验原理:化学结构与酶作用的底物结构相似的物质,可与底物竞争结合酶的活性中

心,使酶的活性降低甚至丧失,这种抑制作用称为竞争性抑制作用。琥珀酸脱氢酶是机体内

参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶,其辅基为FAD,如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的

情况下,可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。

这样,便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。

丙二酸的化学结构与琥珀酸相似,它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢

酶已与丙二酸结合,则不能再催化琥珀酸脱氢,这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥

珀酸的浓度,则可减轻丙二酸的抑制作用。

(三)实验材料与仪器:

1器材大白鼠、手术剪、镊子、磁盘、匀浆器、量筒、烧杯、纱布、滤纸、试管及试管

架、恒温水箱、电热水浴锅

2试剂0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液、0.2mol/L丙二酸溶液、0.02mol/L

丙二酸溶液、1/15mol/L磷酸缓冲液、0.02%甲烯蓝、液体石蜡。

(四)实验步骤:

1、酶提取液的制备:去大白鼠的肝脏、心脏、肾脏,用冷水洗3次,加入1/15mol/L磷酸

缓冲液pH在7.4。在匀浆器中进行匀浆,然后用纱布过滤,用干净的烧杯收集过滤的备用。

2、取试管6支,编号,在按图步骤操作,

酶提

取液

(ml)

磷酸

缓冲

(ml)

0.2mol/L

琥珀酸

(滴)

0.02mol/

L琥珀酸

(滴)

0.2mol/L

丙二酸溶

液(滴)

0.02mol/L

丙二酸溶液

(滴)

蒸馏

(滴)

甲烯

(滴

褪色时间

(分钟)

试管12-8---833分33秒

试管22-8--8-35分30秒

试管32-8-8--36分04秒

试管42--88--37分28秒

试管5-28---83无限大

试管62-8---83无限大

试管6,在酶提取液先在100℃的水浴加热煮沸5min。

各管溶液立即混均匀,沿试管壁加入液体石蜡,约0.5cm,各管置于37℃的水浴中保温,

切勿摇动试管,随时观察比较各试管颜色的变化,记录褪色时间。

(五)实验结果记录:

表1

(六)实验讨论:

1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性,表1所示,在试管1中没有抑制剂,但琥珀酸

依然能脱氢,使得甲烯蓝反应得甲烯白。

2、各管的褪色有明显的时间差别,褪色时间随[I]/[S]逐渐增大,而增大。

3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制,其特点:最大反应速率

Vmax不变,米氏常数Km增大,竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度。

4、本实验中5号、6号试管的作用是做对照,5号试管和1号试管做对照,说明酶

提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在,6号试管中的酶提取液在100℃的水浴加热煮沸过,所以

琥珀酸脱氢酶是失活的。

【注意事项】:

1、酶提取液的制备应操作迅速,以防止酶活性降低。

2、加入液体石蜡的作用是隔绝空气,以避免空气中的氧气对实验造成影响,

因此加石蜡时试管壁要倾斜,注意不要产生气泡。

3、37℃水浴保温过程中,不能摇动试管,避免空气中的氧气接触反应溶液,

使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。

4.、37℃水浴保温过程中,要注意随时观察各试管的褪色情况。

5、实验结果结束后,一定要洗干净试管内的液体石蜡。

2010年10月9号

褪色时间

(分钟)

[I]/[S]

试管13分33秒0

试管25分30秒0.1

试管36分04秒1

试管47分28秒10

试管5无限大0

试管6无限大0

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