高度怀疑

esbls

ESBLs是英文”ExtendedSpectrumBeta-Lactamas”的缩写，

中文翻译为”超广谱β-内酰胺酶".大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼

不动杆菌等通常最易生产,其次，阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳

地枸橼酸菌、绿脓杆菌也可生产。其特点是可以水解灭活青霉素类

抗生素、头孢菌素（主要为第三代头孢菌素，如头孢他啶、头孢哌

酮等，马斯平等除外）和单环β-内酰胺类抗生素(氨曲南、卡芦莫南

等），通常不水解头霉素类(头孢西丁、头孢美唑等)和碳青霉烯类

（亚胺培南、美罗培南等）。其活性可以被克拉维酸、舒巴坦、他

唑巴坦等β—内酰胺酶抑制剂所抑制。我国的产ESBLs菌株主要是

分解头孢噻肟的CTX—M型。

耐药特点

如果临床出现产ESBLs菌株，则对青霉素类、第三代头孢菌素

（头孢噻肟、头孢他啶、头孢哌酮、头孢曲松等)、单环β—内酰胺

类抗生素(氨曲南）耐药，ESBLs在实验室有一专门的检测方法，如

果病人的药敏报告单已注明为产ESBLs菌株，则表明已经实验室确

证。如果病人药敏报告单未注明为产ESBLs菌株，三代头孢菌素和

单环酰胺类抗生素中有一种MIC≥2ug/ml，或符合CAZ≤22mm、

ATM≤27mm、CTX≤27mm、CRO≤25mm

其中一个，则提示菌株可能产ESBLs,这种情况下，即使实验室报告

为敏感的第三代头孢菌素和单环β—内酰胺类抗生素,在临床也不推

荐使用。

预防

第三代头孢菌素和单环β—内酰胺类抗生素的广泛应用是导致产

ESBLs菌株出现及传播的主要因素，此外，尚有其它因素.若临床出

现产ESBLs菌株，会在病人和医院之间及不同菌株之间相

大肠杆菌互传播,导致临床高死亡率及高

比率持续性定殖,应充分引起注意。因此，在治疗时，减少第三代头

孢菌素和单环β-内酰胺类抗生素的应用,可以显著降低产ESBLs菌

株的出现.

选择治疗

哌拉西林/他唑巴坦首先，一旦确定

为产ESBLs菌株，应立即停止使用第三代头孢菌素和单环β—内酰

胺类抗生素的治疗。

对付产ESBLs菌株,最有效的抗生素为

碳青霉烯类，亚胺培南、美罗培南等较为常用。其次，头霉素类中

的头孢西丁、头孢美唑等对其也有效。因为ESBLs活性可以被克拉

维酸、舒巴坦、他唑巴坦等β-内酰胺酶抑制剂所抑制，所以，也可

以选择β—内酰胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂的混合制剂，如替

卡西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等，但如

果细菌同时产ESBLs和AmpC酶，这种方法就没用了,因为AmpC

酶可以水解以上抗菌药物,且其活性不被克拉维酸、舒巴坦等β-内酰

胺酶抑制剂所抑制。

检测方法

目前检测ESBLs的常用方法有双纸片协同试验（即阿莫西林双

纸片协同试验与替卡西林双纸片协同试验，以NCCLS纸片表型确

证试验测定结果为标准，筛选出产ESBLs)、纸片表型确证试验、琼

脂稀释法确证实验、三维试验等。

折叠扩散法

1。筛选试验：选用头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟或

头孢曲松(每片含量均为30μg)药敏纸片中的至少2种，用苗勒—欣

顿(MHA）琼脂，标准纸片扩散法测试抑菌环直径,按美国临床实验

室标准化委员会（NCCLS）1997年标准进行判断.凡头孢泊肟或头

孢他啶的抑菌环直径≤22mm,头孢曲松≤25mm,氨曲南或头孢噻肟

≤27mm,均应高度怀疑为ESBLs菌株，应进一步作确认试验来加以

确诊。

2。确认试验：用头孢他啶(每片30μg)和头孢他啶加克拉维酸

(30μg和10μg）；头孢噻肟（每片30μg）和头孢噻肟加克拉维酸

（30μg和10μg)；分别测量2种纸片单独及加克拉维酸的抑菌环直

径.加克拉维酸较不加克拉维酸的抑菌环直径≥5mm可确认为

ESBLs菌株。

质控菌株:大肠埃希菌ATCC25922（头孢他啶：头孢他晓+克拉

维酸≤2mm;

肺炎克雷伯菌ATCC700603（头孢他啶:头孢他啶+克拉维酸

≥5mm）。

折叠最低浓度

1.筛选试验:选用头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟或头

孢曲松至少2种以上,用阳离子增强的MH肉汤(标准肉汤稀释法)稀

释至1mg/L,凡被测菌在上述各管中能够生长（MIC≥2μg/ml），均

应高度怀疑为ESBLs，应进一步作确认试验来加以确诊。

2。确认试验:用标准肉汤稀释法测定MIC的方法,按

NCCLS(1997）推荐的筛选和确认ESBLs的标准进行判断。选用头

孢噻肟单独稀释（范围0.25～64mg/L）及头孢噻肟(稀释范围相同)

加克拉维酸（每管4mg/L）；头孢他啶单独稀释(范围0.25～

128mg/L）及头孢他啶加克拉维酸(每管4mg/L),上述2种药物必须

同时进行试验,结果加克拉维酸和不加克拉维酸的MIC差值如≥8倍

(3个稀释度），可确认为ESBLs菌株。质控菌株：大肠埃希菌

ATTC25922（头孢他啶:头孢他啶+克拉维酸〈8倍）;肺炎克雷伯菌

ATCC700603(头孢他啶:头孢他啶+克拉维酸≥8倍）。

折叠特殊试验

1。在MicroScan的一些药敏试剂条中包括了头孢泊肟、头孢他

啶或氨曲南,且每种试剂条均有2种指示药物,当被试菌对这些指示药

物的MIC≥2mg/L时，即可筛选出可疑的ESBLs菌株，符合

NCCLS（1999)推荐的筛选药物组合及浓度范围,可用于ESBLs的

筛选。

2。用浓度梯度法(Etest法)的常规试条中的三代头孢菌素或氨曲

南（2种以上），凡MIC≥2mg/L时，即高度怀疑为ESBLs,应进一

步作确认试验来加以确诊。现有2种Etest法的ESBLs确认试条,分

别是头孢噻肟及头孢噻肟加克拉维酸、头孢他啶及头孢他啶加克拉

维酸。检测结果加克拉维酸和不加克拉维酸的MIC差值≥8倍(3个

稀释度）,可确认为ESBLs菌株。

Etest检测ESBLs的具体操作步骤是

（1）在常规试验中选出对三代头孢MIC≥1mg/L的菌株（比

NCCLS的标准低一个稀释度）；

(2）按NCCLS（1999）推荐的方法,用2种底物筛选和确认

ESBLs(筛选试验：在头孢噻肟或头孢曲松中选1种,头孢他啶或氨

曲南中选1种。

确认试验:用头孢噻肟和头孢他啶）；

（3)确认该菌对头孢西丁的MIC≤8mg/L,以排除质粒AmpC酶;

（4）再测定该菌对其他非β内酰胺抗生素的药敏模式，以指导

抗菌治疗或收集流行病学资料。

折叠推荐方法

1.双纸片扩散法:药敏平板和菌液的制备方法与常规药物敏感试

验相同，将菌液涂布在，MH琼脂平板上，贴上药敏纸片,1张为三

代头孢菌素(头孢他啶、头孢噻肟或头孢曲松）或氨曲南,1张为含有

β内酰胺酶抑制剂(克拉维酸10mg/L)的纸片，两纸片相距

20~30mm(中心—中心)，35℃孵育18~24小时，观察结果。如显示

协同为阳性.

2。三相扩散法:该法又有直接法和间接法2种。直接三相扩散法

是在纸片扩散法的基础上略加改动，首先按标准纸片扩散法进行操

作,贴上药敏纸片，在离纸片3mm处打一个小孔(靠近平板中央一侧),

内加200μl浓度为105~106的菌液，35℃孵育过夜,如在头孢他

啶、头孢噻肟、头孢曲松或氨曲南周围的抑菌圈形状发生改变,试验

为阳性。如果在上述抗生素周围的抑菌圈很小或没有抑菌环，应该

用间接法重复。间接三相扩散法与直接法不同在于，直接法平板表

面涂布的细菌和小孔内的细菌是相同菌，而间接法平板表面涂布的

细菌是用已知对

上述药物均敏感的菌株如大肠埃希菌ATCC25922,小孔内为试

验菌。如出现试验菌孔干扰敏感菌株形成抑菌环的现象即判断为阳

性.该试验的优点在于可以同时了解细菌对抗生素的敏感情况和产

ESBLs的情况,但需要有经验的人员来判断结果.

此外,尚可用生物化学技术检测ESBLs的等电点（等电聚焦电

泳），或分析酶的底物谱及抑制物谱来分型。也可用分子生物学技

术检测和分析编码ESBLs的基因或突变位点，如聚合酶链反应

（PCR)—SSCP、PCR-限制性内切酶试验、PCR-点杂交、DNA探

针或序列分析等。