石蜡切片的制作步骤
石蜡切片的制作步骤如下：
1、组织包埋。
（1）乙醇脱水：组织经不同浓度的乙醇溶液进行逐级脱水70％、80％、90％、95％、100％、100％，各级乙醇 40min（注意：骨性及钙化组织需在JYBL-Ⅱ脱钙液中浸泡24h，待组织软化后再进行乙醇脱水步骤）；
（2）透明：组织依次浸泡于三个二甲苯中，每缸各1h；
（3）浸蜡：组织依次浸泡于三个石蜡缸中，每缸各1h；
（4）包埋：将液态的石蜡倒入模具盒中，再将浸好蜡的组织块平放底部，注意切面方向朝下放置，待石蜡凝固后去掉包埋框，完全冷却变硬后再修整蜡块，组织外围的石蜡保留适中以便切片。
2、切片制作将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向，刀的倾斜度通常15℃，转动轮转推进器，调节切片厚度为 4μm，切成厚度均匀的切片。
左手持毛笔，右手旋动切片机转把，切片带出来之后，用毛笔轻轻托起，再用镊子轻镊蜡片，以正面放入展片箱中，其水温 45℃左右。待摊平整后捞片。贴附切片左手持载玻片之一端，垂直入水去附贴切片，右手用镊子辅助推动，附贴至玻片上的三分之二处。
切片贴附后，放在空气中稍晾干，放置 65℃烤片机上烤1h，再放置烘箱内烘烤2h。
3、石蜡切片脱蜡至水
依次将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脱蜡。
4、HE染色
石蜡切片入苏木素染0.5-1分钟min，自来水漂洗，1%盐酸酒精分化数秒，自来水漂洗，然后1%氨水水溶液返蓝1min，流水冲洗数秒，放入伊红染液中染色数秒，流水漂洗。
5、脱水封片
石蜡切片依次放入75%乙醇 2min -85%乙醇 2min-无水乙醇5min -无水乙醇5min -二甲苯5min 透明，将切片从二甲苯拿出来中性树胶封片。
6、结果判读
细胞核为蓝色，细胞质为红色。
石蜡切片制作过程有哪些步骤
石蜡切片的制作过程的步骤包括：
取材，固定，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，贴片，染色，透明，封藏等步骤。
具体是：
1．取材
材料的好坏直接影响到切片的质量，无论取哪一种动植物材料，以下几点是必须注意的。
（1）植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分；动物材料取用时常对动物施以麻醉，常用的麻醉剂有氯仿和乙醚，或将动物杀死后迅速取出所需要的组织。
（2）取材必须新鲜，这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要，应该尽可能割取生活着的组织块，并随即投入固定液。
（3）切取材料时刀要锐利，避免因挤压细胞使其受到损伤。
（4）切取的材料应该小而薄，便于固定剂迅速渗入内部。一般厚度不超过2mm，大小不超过5×5mm2。
2．固定
组织和细胞离开机体后，在一定时间内仍然延续着生命活动，会引起病理变化直至归于死亡。为了使标本能反映它生前的正常状态，必须尽早地用某些化学药品迅速地杀死组织和细胞，阻抑上述变化，并将结构成分转化为不溶性物质，防止某些结构的溶化和消失。这种处理就是固定。除了上述作用外，固定剂会使组织适当硬化以便于随后的处理，还会改变细胞内部的折射系数并使某些部分易于染色。
固定剂的作用对象主要是蛋白质，至于其他成分如脂肪和糖，在一般制作时不加考虑，如要观察这些物质，可用特殊的方法将其固定下来。
3．脱水
生物组织中含有大量的水分，它和石蜡是不能相溶的，致使在包埋时石蜡无法渗入组织内部，因此须使用脱水剂将水分除尽，这就是脱水的作用。
脱水剂必须能与水以任何比例相混合。脱水剂有两类：一类是非石蜡溶剂，如乙醇、丙酮等，脱水后必须再经过透明，才能透蜡包埋；另一类是兼石蜡溶剂，如正丁醇，脱水后即可直接透蜡。
常用的脱水剂是乙醇，因为它价格便宜，易于得到。
4．透明
组织块用非石蜡溶剂脱水后必须经过透明。透明剂能同时与脱水剂和石蜡混合，它取代了脱水剂后，石蜡便能顺利地渗入组织。
透明剂的种类很多，较常用的是二甲苯、甲苯、苯、氯仿、香柏油和苯胺油等。
5．透蜡和包埋
透蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石蜡熔点3度，使经过透明的组织块依次用石蜡与二甲苯的等量混合液、纯石蜡处理。纯石蜡应处理2～3次，透蜡的时间依材料性质而定，一般每次需15～30min。
透明的关键是控制温度的恒定，切忌忽高忽低，温度过低石蜡凝固无法渗透，温度过高使组织收缩发脆。
包埋是使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中。具体做法是；先准备好纸盒（具体折法见图1-3及说明），将熔蜡倒入盒内，迅速用预温的镊子夹取组织块平放在纸盒底部，切面朝下，再轻轻提起纸盒，平放在冷水中，待表面石蜡凝固后立即将纸盒按入水中，使其迅速冷却凝固，30min后取出。
包埋用蜡的温度应略高于透蜡温度，保证组织块与周围石蜡完全融为一体。石蜡的迅速冷却也很重要，否则包埋块中将会产生结晶。以后切片时引起碎裂。
6．切片
切片前，将刀口置放大镜下观察，选择刀口平整无缺刻的部分来进行切削。将所要切的包埋块固定在标本台上，使包埋块外切面与标本夹截面平行，并让包埋块稍露出一截。将刀台推至外缘后松开刀片夹的螺旋，上好刀片，使切片刀平面与组织切面间呈15°左右的夹角，包埋块上下边与刀口平行。在微动装置上调节切片要求的厚度，调节时应注意指针不可在两个刻度之间，否则容易损伤切片机，将刀台移至近标本台处，让刀口与组织切面稍稍接触，这时就可以开始切片了。方法是：右手转动转轮，左手持毛笔在刀口稍下端接隹切好的片子，并托住切下的蜡带，待蜡带形成一定长度后，右手停止转动，持另一枝毛笔轻轻将蜡带挑起，平放于衬有黑纸的纸盒内，注意切片速度不宜太快，摇动转轮用力应均匀，防止切片机震动厉害引起切片厚薄不均匀，还应注意转动的方向，以防标本台后移而切不到片子。切片完毕，应及时用氯仿将切片机的有关部分擦净。
石蜡切片制作过程有哪些步骤？
石蜡切片操作步骤：
1、取材
2、固定
3、脱水：30%--50%---70%（每步60分钟）---85%---95%--100%---100%（每步30钟）。
4、透明：转入1/2二甲苯＋1/2无水酒精混合液20ml透明1h，纯二甲苯20ml透明1h，再用纯二甲苯20ml透明40min，并回收各液。
5、浸蜡：
（1）将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中，每级30分钟。该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行；
（2）将材料放入溶解的纯蜡中，时间为30分钟，该过程再重复两次。在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。
6、包埋
（1）将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中，石蜡溶解后应过滤后使用，以免含杂质影响切片；
（2）材料放入纸船，并摆好在蜡中的位置，如果包埋的组织块较多，应进行编号；
（3）将纸船放置在冷水上加速冷却过程。
7、切片
（1）修整：用刀片修成方形或长方形蜡块；
（2）以少许热蜡液，将蜡块底部粘附于小木块上，以少许石蜡融化在蜡块边缘，加强粘附的强度；
（3）木块粘附于切片机上，调整切片机，使蜡块切面与切片刀刃平行；
（4）切成连续的蜡带，切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量，可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度，也可在冰箱中放置一段时间；
（5）分割蜡带，分开的蜡片放在45℃温水上，使蜡片展开。
8、粘片与烤片
（1）可用粘片剂防止蜡片滑脱，但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色，影响观察，实验表明，载玻片洗的足够干净，一般不会滑片；
（2）用载玻片捞取展开后的蜡片，调整蜡片的位置使位于载玻片中央，自然干燥。
9、脱蜡与醇化
（1）将切片放入纯二甲苯溶液中10分钟，使石蜡完全溶解，共2次；
（2）溶去石蜡的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中，每级10分钟；
（3）再将切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中进行醇化，每级10分钟。
10、染色
（1）将切片放入番红染液中30分钟，番红染色后，将切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；
（2）洗脱后的切片放入固绿染液中染色1分钟；
11、脱水、透明与封片
（1）染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；
（2）洗脱后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明，每级10分钟，出现浑浊表示脱水不彻底，需重来；
（3）滴1-2滴中性树胶，将洁净的盖玻片倾斜放下，封片，镜检，选择好的贴上标签，性切片制作完成。
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石蜡切片的简介
石蜡切片（paraffin ction） 组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
如何制作石蜡切片？
1. 取材：切取一小段需要的组织，组织块的规格为 3-5mm×3-5mm×10-15mm。
2. 固定：固定液用量一般为组织块体积的10-20倍。
3. 冲洗：固定12-24小时后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。
4. 脱水：70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→无水乙醇Ⅰ（→无水乙醇Ⅱ
5. 透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ
6.浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。
二甲苯与石蜡混合液（1:1）→石蜡Ⅰ→石蜡Ⅱ浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片的质量。
7. 包埋：在盒内注入溶化的石蜡，将已浸蜡的组织块置入其内，使蜡块迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。
8. 切片：包埋后的组织块经修正后，用切片机切成5-7μm的石蜡带。
9. 粘片：将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片，然后用经1%氯化氢溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。
10. 烤片：将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干，待2-3小时。
11. 苏木精—伊红染色：将烤干的片进行染色。
石蜡切片制作超详细步骤
1．取材
颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织（或其他组织）。
切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。取下所需要的肝组织，切成一小块2－3mm厚。
注意事项：
（1）取材动作要迅速，不宜拖太久，以免组织细胞的成分、结构等发生变化。
（2）切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。
2．固定
将切好的肝组织用生理盐水洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定30－50min。
注意事项：
（1）一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。
（2）有些混合固定液的成分之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。
（3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。
（4）材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外贴上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字，用黑色铅笔写。
3.洗涤
材料经固定后,流水冲洗，数小时或过夜。
4.脱水
材料依次经70%、80%、90%各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95%、100%各2次，每次20min。
注意事项：
（1）脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行，防止吸收空气中的水分。
（2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。
（3）在低浓度酒精中，每级停留时间不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。
（4）在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。
（5）如需过夜，应停留在70%酒精中。
（6）脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象
5．透明
纯酒精、二甲苯等量混合液15min，二甲苯Ⅰ15min、Ⅱ15min（至透明为止）。
由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明状态。
透明注意事项
（1）使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分进入。
（2）更换每级透明剂，动作要迅速，一方面为了不使材料块干涸，另一方面能避免吸收湿气。
（3）在透明过程中， 如果材料周围出现白色雾状，说明材料中的水未被脱净，应退回纯酒精中重新脱水，然后再透明。
6．透蜡
放入二甲苯和石蜡各半的混合液15min，再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各50-60分钟。
透蜡的目的是除去组织中的透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便包埋。透蜡时间根据组织大小而定。透蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在55-60℃左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。一般置于恒温箱0.5h。
透蜡注意事项
（1）尽量保持在较低温度中进行，以石蜡不凝固为度；
（2）透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；
（3）操作要迅速，尽量在最短的时间内完成石蜡透入过程，以免引起组织变硬、变脆、收缩等。
7.包埋
包埋时，用镊子夹取石蜡模子（金属质地）在酒精灯上稍加热，放在平的桌面上，从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入少许石蜡。再将镊子在酒精灯上稍加热，夹取材料将切面朝下放入蜡模中，排列整齐。再放上包埋盒，轻轻倒入熔蜡。
8.切片
①将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。
②将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。
③摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。
④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。
⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般为4-10微米。
⑥一切调整好后主可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-50r/min为宜。
⑦切成的蜡带到20-30cm长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。
⑧用单面刀片切取蜡片一小段，放在载玻上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。
⑨切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保存。
9.展片、贴片
打开水浴锅，使水温维持在40-45℃，另准备30%乙醇溶液。
① 切片时，将一碗30%乙醇溶液放于切片机旁的桌面上。
② 用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带，放在乙醇溶液的水面上，使切片展开。
③小镊子轻轻地将连在一起的切片分开，用一个载玻片将切片完整，已展开的切片捞至温水中，使之充分展开。
④ 另取洁净的载玻片，捞起展开的切片，使其位于切片1/3处，另一端（磨边，粗糙的一端）磨面上标记或贴上标签，放于切片架上。
10.脱蜡复水
将水浴锅温度调至60℃，待水温控制在60℃时，将切片连同切片架放入一干燥的染色缸内，放入水浴锅中，盖上盖子（可密封），30min至蜡熔化。
之后，石蜡切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各3-5min，再放入蒸馏水中3min。
11.染色
切片放入苏木精中染色约10-30min。
染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。
12.水洗
用自来水流水冲洗约15min。使切片颜色变蓝（或放入碱性水中也可），但要注意流水不能过大，以防切片脱落。
13.分化
将切片放入1%盐酸乙醇液中褪色，约2秒至数十秒钟。见切片变红，颜色较浅即可。
14.漂洗
切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。
15.脱水Ⅰ
切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3-5min。
16.复染
用0.5%伊红乙醇液对比染色1-3min。
伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
17.脱水Ⅱ
将切片放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3-5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。
18.透明
切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3-5min。
二甲苯应尽量保持无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
19.封藏 ：中性树胶封存
因切片经二甲苯透明，使用中性树胶作为封藏剂，树胶可用二甲苯稀释至合适的稠度。
封藏的方法：
封片前应根据材料的大小，选用不同规格的盖玻片。材料透明后，在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从二甲苯中取出放在纸上（切片的一面向上），迅速地在切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，稍为倾斜使其左侧与封藏剂接角，然后再缓慢地将盖玻片放下，这样就可以减少或避免产生气泡。如胶液不足，可以用玻棒再滴一滴树胶从盖玻片边缘补足。如胶液过多，可在干燥以后用刀刮去，并用纱布蘸二甲苯拭去残留的树胶。
染色结果 ：细胞核被苏木素染成蓝色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
