高效液相色谱分析(高效液相色谱分析的基本原理)

高效液相色谱分析的基本原理

高效液相色谱分析的基本原理：使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。

补充说明：

高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理，主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。

它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

高效液相色谱仪（HPLC）广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究以及环境研究中。

高效液相色谱分析法的原理是什么？

高效液相色谱分析原理：
（一）高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。
（二）高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

如何分析高效液相色谱图

分析色谱图的方法：

手动进样步骤 配置好流动相，将滤嘴洗头放入流动相页面内，打开泵和检测器，快跑排除气泡，设置既定流速，稳定一段时间，让基线跑平，用液相针吸取称量融配脱气后的对照（含量已标定）。

打开定量环将液相针里的液体匀速注入定量环中，拔出针头好立刻关闭六通阀，一般随六通阀关闭电脑自动采样，等主峰跑完整后记录其峰面积，一般跑两个对照，每个对照跑两针，共四针。

然后开始注称好溶配脱气后的样，以对照主峰的保留时间来判断样品中目标峰的位置，外标法以峰面积计算供试品中某物质的含量。

X=[S样*K /m样（1-水分）]*对照品含量% *100

扩展资料

高效液相色谱法有“四高一广”的特点：

①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。

⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

⑥柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物

⑦样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。

参考资料百度百科高效液相色谱

如何分析高效液相色谱图

色谱图，其实简单地讲，是一个横坐标是时间，纵坐标是电信号的二维图谱。
高效液相色谱法，你可以简单地想象，固定相是一个多空海绵状的柱形结构，样品在孔洞中进进出出。因为各个物质的吸附能力不同，所以才会在色谱图中拉开距离。
和实验相关的参数：
1、保留时间-也就是可以定性的数据参数
如果使用同样的色谱柱，同样的流动相，分析同样的样品，那么这个样品的保留时间，应该是固定的。不同保留时间的色谱峰，应该表现出的是不同的物质。如果你跑的是反相色谱，那么色谱峰越靠后，它对应物质的极性也就越小。
2、峰面积-也就是可以定量的数据参数
这是你在色谱图中可以读出来的参数，在同一个色谱条件下，同一个物质的浓度和峰面积是成正比的。也就是说，如果你配制1.0mg/ml的X物质，进样后峰面积是10000，那么，你配制0.5mg/ml的X物质，进样后峰面积差不多就是5000
3、波长-这个是可以顺利进行试验的前提条件
同一样品，同一方法，同一色谱柱，在不同波长的峰面积是不同的。一个物质指在某些特殊波长下有吸收。比如一个物质在210nm和254nm处有吸收。那么波长在280nm处可能无法检出该物质。所以一个实验方法开始时要进行波长扫描。

高效液相色谱法原理 高效液相色谱法有何特点

1、高效液相色谱法的原理是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测。

2、高效液相色谱法有“四高一广”的特点：

（1）高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

（2）高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

（3）高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

（4）高灵敏度：紫外检测器可达0。01ng，进样量在μL数量级。

（5）应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

高效液相色谱法有哪些特点

1、高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

2、高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，小于1小时。

3、高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

4、高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。

5、应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

6、柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物

7、样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

高效液相色谱分析的流程

由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。

遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，

而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。

以上内容参考：百度百科-高效液相色谱、百度百科-高效液相色谱分析法