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表达实训总结例1

中***分类号：G886.914(2)文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)04-0477-06

2002年女子自由式摔跤被列为奥运会正式比赛项目，2004年，我国选手王旭勇夺雅典奥运会冠***，使我国女子摔跤项目达到了一个新的高度。然而，在训练过程中，尤其是赛前训练的负荷安排方面，我国教练员还存在“经验主义”的倾向，缺乏生理生化等量化指标的参考。因此，如何利用生理生化指标科学监控和把握运动员赛前训练的负荷节奏成为当前备战过程中亟待解决的重要课题。

1研究对象与方法

1．1研究对象

备战2008年奥运会的国家女子自由式摔跤队39名运动员，其中48 kg级运动员9名、55 kg级运动员9名、63 kg级运动员11名、72 kg级运动员10名。全部为健将或国际健将。

1．2研究方法通过对部分运动员比赛及赛前训练相关生理生化指标的测试来反映运动员比赛及训练负荷的特征。具体指标及测试方法如下：

1．2．1血***酸血***酸（Bla），取运动员训练内容结束后5 min的指血20 μL，加入到40 μL溶血液中，混匀。通过YSI 1500测试，参加国际比赛时，采用便携式的血***酸仪（Lactate ProTM）进行测试。在便携式血***酸仪用之前与YSI 1500标定。

1．2．2血氨血氨（Amm），取运动员训练内容结束后5 min的指血，通过Ammonia CheckerTM ⅡAA-4120测试。

1．2．3血常规在每周一早晨6：00－8：00取运动员静脉血0．5 mL，加到EDTA-2K抗凝管混匀。采用Beckman Counter三分类血球仪进行测试，采集的数据包括白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、细胞压积（Hct）等。

1．2．4血清肌酸激酶和血尿素血清肌酸激酶（CK）和血尿素（BU），在每周一早晨6：00-8：00取运动员静脉血0．5 mL，加到EDTA-2K抗凝管混匀。离心，取血清，采用Beckman Counter全自动生化分析仪进行测试。

1．2．5睾酮、皮质醇睾酮（T）和皮质醇（C），在每周一早晨6：00-8：00取运动员静脉血1．5 mL。离心，取血清，采用化学发光法进行测定。

1．3统计学分析

数据统计采用SPSS13．0统计分析软件，数据结果以平均值±标准差表示。两组之间的差异采用T检验，多组之间的比较采用one-way ANOVA分析。p

2结果

2．12006年亚洲锦标赛的强度监控

通过对参加2006年亚洲锦标赛的我国部分优秀运动员赛后的血***酸、血氨测试显示，我国运动员比赛的血***酸都在10 mmol/L以上，平均值(11．7±1．47)mmol/L，血氨的平均值(200．60±11．61)μmol/L（表1），以此作为赛前训练负荷强度的监控指标(表1)。

2．2赛前不同训练内容的强度监控

2．2．1赛前常用技术训练手段的监控由于血***酸可以作为训练负荷强度的检测指标，因此，通过不同技术训练内容后血***酸的变化情况可以反映该训练内容的强度特征。表2的监测结果表明，不同的技术训练内容强度差异很大，同一训练内容不同组合安排训练强度差异也很大。比如手法练习，3 min×5组合的手法练习组合与手法练习10 min（p=0．035）、6 min×3的组合相比（p=0．045）都有显著差异。

2．2．2实战和模拟比赛条件的实战的强度监控实战2 min×12和模拟比赛实战的负荷强度都不高，且二者之间没有显著的差异。模拟实战比赛第三局后48与72 kg两个级别之间有显著差异（表3）。

2．2．3教学比赛的负荷强度监控表4列出了4次教学比赛的强度监控血***酸指标的变化情况。在第一次教学比赛中，72 kg级运动员的血***酸值与48 kg级运动员相比有显著性差异（p=0．024）；第三次教学比赛的血***酸在72 kg级和55 kg级两个级别之间差异显著（p=0．037）；第四次教学比赛的血***酸在48 kg级和55 kg级两个级别之间（p=0．039）、48 kg级和72 kg级两个级别之间（p=0．041）、55 kg级和72 kg级两个级别之间（p=0．002）、63 kg级和72 kg级两个级别之间（p=0．042）都有显著差异。

在4次教学比赛中，第二次教学比赛的平均血***酸值最高，大于其他三次教学比赛。并且，第二次教学比赛的血***酸与2006年亚洲锦标赛时运动员的血***酸相比略有降低，但是没有达到显著性水平，说明在日常的训练也可以接近或达到比赛的强度。

实战训练2 min×12和模拟比赛条件的实战的训练强度远远低于教学比赛和正式比赛的强度。

2．3．172 kg级运动员赛前训练安排的负荷结构

2．3．1．1王×在基础训练期的个体特异性王×在基础训练期的血尿素小于72 kg级的全体运动员总的平均值（p=0．02），肌酸激酶大于72 kg级的全体运动员的总平均值（p=0．03）。其他指标没有显著性差异（表5）。

2．3．1．2王×在赛前训练负荷安排结构的监控王×在2006年亚运会赛前训练期的肌酸激酶显著大于基础训练期（p=0．000）（***1），也显著大于72 kg级的整个全体运动员的平均值。血尿素也有所降低，但是没有达到显著性。总睾酮值升高，但是也没有达到显著性（***2）（表6）。

2．3．263 kg级运动员赛前训练安排的负荷结构

2．3．2．1许×在基础训练期的个体特异性许×在基础训练期的红细胞（p=0．001）和血红蛋白（p=0．002）显著低于63 kg总的情况，但是肌酸激酶显著大于63 kg级总的平均值（p=0．04）（表7）。

2．3．1．2许×在赛前训练期负荷安排的监控2006年世界锦标赛赛前的肌酸激酶显著高于基础训练期（p=0．002）。总睾酮也升高，但是没有达到显著性。血尿素降低，但是没有达到显著性（表8）。

2006年亚运会前的肌酸激酶显著高于基础训练期（p=0．002）。总睾酮有所降低，但是没有达到显著性，但皮质醇显著性升高（p=0．001）（表9）。

两次赛前训练负荷的安排除了皮质醇以外（p=0．009），其他各指标之间均没有显著差异(***3-6)。

2．3．355 kg级运动员赛前训练负荷安排的结构

2．3．3．1苏×在基础训练期的个体特异性苏×在基础训练期的白细胞（p=0．000）、红细胞（p=0．000）、血红蛋白（p=0．005）、细胞压积（p=0．007）显著高于55 kg级总的平均值（表10）。

2．3．3．2苏×在赛前训练期负荷安排的监控在2006年赛前训练的肌酸激酶显著高于基础训练期（p=0．008），总睾酮也增高，但是没有达到显著性(表11)(***7、8)。

2．3．448 kg级运动员赛前训练负荷结构安排的监控

2．3．4．1黎×在基础训练期个体特异性黎×在基础训练期白细胞显著低于48 kg总的平均值（p=0．000）、红细胞显著低于48 kg总的平均值（p=0．020）、血红蛋白显著低于48 kg总的平均值（p=0．041）、肌酸激酶显著高于48 kg总的平均值（p=0．008）、血尿素显著低于48 kg级总的平均值（p=0．004）。

2．3．4．2黎×赛前训练负荷安排监控2006年亚运会赛前肌酸激酶显著大于基础训练期（p=0．035）。总睾酮也增高，但是没有达到显著性(表13)(***9，10)。

2．3．4．3任×在基础训练期个体特异性任×在基础训练期的血红蛋白显著高于48 kg级总的平均值（p=0．007）、细胞压积显著高于48 kg级总的平均值（p=0．008）、血尿素显著高于48 kg级总的平均值（p=0．018）和皮质醇显著高于48 kg级总的平均值（p=0．000）(表14)。

2．3．4．3任×赛前训练负荷安排监控2006年世锦赛前肌酸激酶显著高于基础训练期（p=0．000），血尿素也显著升高（p=0．000）。睾酮也升高，但是没有达到显著性(表15)(***11-12)。

3讨论

3．1赛前有效训练手段的特征通过对赛前技术训练内容安排的分析发现：1） 同一训练手段不同组合的强度有明显的差异。因此，教练在安排训练内容时，要根据自己的训练目设计相应的组合方式。有研究提出赛前技术训练强度的***酸值应在8 mmol/L左右，而本研究对象赛前训练的技术训练强度与这一要求有较大差异。2） 同一训练手段的负荷强度有明显的个体差异，即同样的训练手段施加于不同的运动员会产生不同的效果。究其原因，除了运动员血***酸动力学变化特点存在个体差异以外，运动员的主观能动性、对训练的投入程度也会造成血***酸水平的差异。因此，在训练中教练员应注意激励运动员的斗志，调动运动员的积极性，同时严格要求，才能达到预期的效果。

为了适应比赛强度，赛前训练经常安排一些实战、模拟比赛条件的实战和教学比赛，从监控结果可以看出，实战和模拟比赛条件的实战之间强度没有差异，血***酸值都在4～7 mmol/L之间，但是远远小于比赛中运动员所达到的血***酸水平。推测原因可能是实战和模拟比赛实战训练中，多对运动员一起进行实战演练，运动员没有建立起正式比赛的意识。因此，实战和模拟比赛条件的实战的训练强度可以作为提高运动员专项有氧耐力的强度，而不是适应比赛的耐***酸强度。

反观本研究对教学比赛进行的测试结果表明，某些教学比赛的强度可以达到国际比赛的强度。比如在前述的第二次教学比赛中，负荷强度已经接近国际比赛的强度。这主要是因为第二次教学比赛是2006年世界锦标赛的一次摸底，运动员重视程度很高。因此，赛前教学比赛可以作为耐***酸训练的有效方式，但训练效果取决于运动员的积极性和主观能动性的调动情况。

3．2赛前训练合理负荷结构的特征

本研究分析了5名我国优秀运动员赛前训练阶段相关生理生化指标的变化情况，以此判断和评价其训练负荷结构的特点。这6名运动员包括：2名2006年世界锦标赛银牌获得者，其中1名运动员还是2006年亚运会金牌获得者，2名铜牌获得者和1名第五名运动员。

研究结果显示，这5名运动员在基础训练期各项生理生化指标与同级别的其它队员相比有明显的个体特异性，但是在赛前训练期都表现出负荷强度高于基础训练期而训练量低于基础训练期的现象，这与***多・博母帕等的训练理论一致，但是具体到每一个运动员，赛前训练负荷安排的节奏各有不同。

72 kg级运动员王×在亚运会上获得冠***，同时也是2004年奥运会该级别金牌得主。该队员是在2006年的12月10日参加比赛，12月5日离开北京。赛前安排的3次监控的时间分别为11月20日、11月27日和12月4日。该队员在基础训练期的体重不大，因此在去赛区之前不需要降体重。该队员在到达集训队前一周已经开始赛前训练，赛前总体负荷强度增加、训练量有所降低。从肌酸激酶的监测看出，该队员在赛前的训练强度是先升后降，但是总体强度水平显著高于基础训练期。从血尿素的监测发现，其训练量与训练强度的安排节奏相反，也就是先降后升，但是变化幅度较小，总体水平比基础训练期略有降低，但是没有显著性差异。这表明该队员的赛前训练在强度提高时训练量略有下降，强度降低时训练量稍有增加，在赛前1周仍保持较高强度。该队员赛前的睾酮、皮质醇和睾酮/皮质醇比值呈现上升的趋势，表明运动员的恢复能力及训练和比赛的欲望都在逐渐的提高，赛前身体机能状况调整到较高水平，同时，亚运会冠***的比赛成绩也清楚地显示出该队员赛前训练负荷节奏的安排是十分科学合理的。

63 kg运动员许×是2006年亚运会铜牌和2006年世界锦标赛银牌获得者，该队员是在2006年的10月1日参加世界锦标赛，9月26日到达赛区，赛前监控安排在8月28日、8月28日、9月4日、9月11日、9月18日、9月25日。2006年亚运会的比赛日是12月10日，12月5日离开北京，赛前训练监控安排在11月20日、11月27日和12月4日。该队员的赛前体重较大，因此在去赛区之前就开始降体重了。但是经过对该队员的长期跟踪研究发现，降体重对该队员的血尿素没有影响。从其两次赛前训练的总体负荷安排来看，都是在赛前训练强度增加，训练量有所降低。但是，该队员两次比赛的训练负荷的节奏安排有所不同，在2006年世界锦标赛前训练强度是先升后降再升再降，在赛前一度恢复到基础训练期水平，而在2006年亚运会的赛前训练中，负荷强度是先升再降，在赛前一周还保持在高于基础训练期的水平。两次赛前训练负荷节奏安排的比较可以看出，第一次比赛前训练强度下降的过早，而第二次赛前训练强度的安排更为合理。该队员在两次比赛上分别获得是银牌和铜牌，但都是输给同一名运动员，所以到底哪一种负荷安排对于该运动员更为合理，需要进一步的研究。

苏×是2006年亚运会55 kg的参赛选手，亚运会的比赛日是12月10日，该队员于12月5日离开北京。赛前训练监控安排在11月20日、11月27日和12月4日。该队员的赛前体重较大，去赛区前开始降体重，但是经过对该队员的长期跟踪研究发现，降体重对该队员的血尿素没有影响。该队员在到达集训队前一周开始赛前训练，其赛前训练强度的节奏安排是先升后降再升，在赛前一周还保持在一个较高的水平。训练的量有逐步增加的趋势，但总体没有显著性变化。该队员皮质醇的变化表明其比赛欲望不高。

48 kg的两个队员黎×和任×分别参加2006年亚运会和2006年世锦赛。其中，任×赛前实施降体重，但长期跟踪研究发现降体重对该队员的血尿素没有影响。该队员是在2006年的9月29日参加世界锦标赛，9月26日到达赛区，赛前监控安排在8月28日、9月4日、9月11日、9月18日和9月25日。赛前训练安排的总体趋势是强度增加，训练强度的节奏是先升后微降，再升再降（在赛前的第四天下降―），但仍高于基础训练期水平；训练量的节奏安排与训练量的节奏安排一致。该运动员在世界锦标赛上获得第二的成绩。

运动员黎×12月10日参加亚运会比赛，12月5日离开北京。训练监控安排在11月20日、11月27日和12月4日。该队员也是在到达集训队前一周开始赛前训练，其负荷节奏是训练强度先升后降再上升，但是总体强度高于基础训练期，训练量的安排稍有增加，但与训练基础期没有显著变化。

4结论与建议

4．1结论对我国优秀女子摔跤运动员赛前训练内容安排的研究表明：赛前训练常用的实战和模拟实战训练强度是增强专项有氧耐力的有效强度；教学比赛的强度是有效的耐***酸训练的有效强度，但训练效果很大程度上取决于运动员训练的积极性和主观能动性。

对我国优秀女子摔跤运动员赛前训练负荷安排的研究表明：一个完整的赛前训练在4周～6周之间，赛前训练负荷安排总体是训练强度显著增加，训练量非显著性降低。但是训练负荷安排节奏有不同的方式：1）训练强度先升后降，在赛前一周前保持在高于基础训练期的水平，训练量与训练强度的变化相反，先降后升，总体低于基础训练期的水平；2）训练强度变化与第一种类似，但训练量没有明显的变化趋势；3）训练强度与训练量的变化节奏一致，都是先升后降再升再降，在赛前一度保持在高于基础训练期的水平，但训练量变化不明显；4）训练强度采用先升后降再升再降，训练量保持逐渐升高的趋势。从比赛的结果表明赛前训练总体安排相对比较合理。需要进一步的探讨。

4．2建议教练员应根据训练目的选择适当的训练内容和手段来提高赛前训练的针对性和有效性。

赛前实战和模拟比赛条件的实战训练中要激发运动员的比赛欲望、提高其身体的动员和投入程度，以保证良好的训练效果。

教练员应根据运动员自身的特点选择和使用赛前负荷安排的不同节奏方式。

参考文献：

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表达实训总结例2

中***分类号：G804．7 文献标识码：A 文章编号：1007―3612(2007)02―0200-03

本文依据文献推测，长时间力竭运动机体代谢旺盛的组织心肌活性氧产生增加，当其产生的量超出其还原能力时，势必对细胞的氧化还原状态产生影响，激活氧化还原敏感的转录因子AP一1的表达。本部分实验的研究目的：根据目前的大量的细胞实验研究结果提出种假设：长时间力竭运动产生的氧化应激有可能对原癌基因c―jun和c―fos的mRNA表达产生影响，进而激活转录因子AP一1，诱导某些特殊基因的转录。

1　研究对象与方向

1．1研究对象 实验选用纯系雄性Sprague―Dawley(SD)大鼠50只，体重200～250g，由上海医科大学实验动物中心提供，常规条件下采用分笼饲养，每笼5只，饲料选用国家标准啮齿类动物混合饲料喂养。室温控制在22℃±2℃，自由饮水进食。

1．2试剂与仪器ELISA检测大鼠TNF－a试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)异硫氰酸胍(Gibco公司)AMV逆转录酶(Promega公司)dNTPs(Promega公司)Oligo(dT)(Promega公司)Taq酶(华美公司)引物(赛百胜公司)DNA ladder(MBI公司)核酸蛋白分析仪(Beckman公司)核酸蛋白成像仪(Phar．macia公司)电泳仪及水平电泳槽(Bio―Rad公司)PCR仪(PE公司)

1．3 PCR引物设计

2 实验方法

2．1 实验动物分组、训练与处理 本实验模型参照Vebditti(1997)大鼠游泳训练模型。大鼠自购入后适应环境两天，然后在150 cm×60 cm×60 cm的玻璃水池中进行无负重游泳适应性训练一周，(水深45、水温维持在(33±2)℃)，15 min／次、5次／周。随机分成6组，即对照组(cR)、力竭组(CE)、训练组(TR)、训练力竭组(TE)、注射BSO组(BR)、注射BSO力竭组(BE)。

训练组进行10周渐增游泳训练，5次／周。第一周15min／次，第二周50 min／次，以后每周增加10 min直至第6周。第6～10周保持90 min／周。安静组和注射BSO组的大鼠常规条件下饲养。在游泳训练的最后8d，注射BSO组的大鼠开始注射BSO(L―Buthionine―Sulfoximine，丁胱亚磺酰亚胺)，一种谷氨酰半胱氨酸合酶(GCS)的抑制剂，采用腹腔注射。BSO的用量为：6 mmol／kg体重，用O．8～1．0 mL的生理盐水溶解，每天分别在8：00 AM～5：00 PM注射两次，对照组和训练组注射等量的生理盐水，共8d。

在最后一次训练后24h，先尾静脉取血，然后立即断头处死TR组的大鼠。在最后一次注药后30 min，大鼠尾静脉取血后，断头处死BR组的大鼠，安静状态，先尾静脉采血后断头处死CR组的大鼠。在力竭游泳后尾静脉采血，然后断头处死CE、TE、BE组的大鼠。处死后立即取大鼠的心肌放入液氮中保存。

2．2大鼠心肌的c―JunmRNA、c―FosmRNA的半定量测定

2．2．1 组织总RNA抽提及逆转录反应

2．2．2 采用紫外分光光度法，测定RNA样品在波长260 Flln和280 nm的紫外吸收值 根据10D260相当于40μg／mL RNA确定RNA的量，根据OD260／OD280光密度值定量判定RNA样品的纯度，并用电泳法鉴定其分子完整性。

2．2．3逆转录(总体积20 μL) Olig(dT)1μL，总RNA 2μg(根据OD260定量结果计算体积)H2O补足体积至12 uL，70℃反应10 min，立即至冰上逆转录体系包括：5×逆转录缓冲液(100 mM Tris―Hcl，500 mM KCl，1％Tritonx－100)4μL，0．1 mMDTT 2μL，10 mM dNTPs 1μL，AMV逆转录酶0．5μL，42℃反应50 min，75％反应10 min灭活逆转录酶。

2．2．4 PCR PCR反应组成如下：正向、反义链引物各2乩，25 mM MgCl2 1．6μL，10×扩增缓冲液2μL，10 mM dNTPs 0．5μL，逆转录产物2μL，Taq酶1μL，ddH2O补足20μL混匀，高速离心10s后加入20μL液体石蜡，防止蒸发并置于PCR仪上开始PCR反应，反应条件为：94℃预变性5 min；94℃30 s，55 ℃30 s，72℃30s，30个循环；72℃延伸7 min

2．2．5 电泳分析结果 配制1．8％的琼脂糖凝胶胶电泳，紫外灯下观察照片。

2．2．6结果计算 凝胶电泳结束后用凝胶成像系统拍照并进行电泳条带光密度分析。某标本靶基因条带光密度参数与内参基因(β―actin)条带的光密度参数之比值作为该标本mRNA的表达水平参数。

2．3统计学处理 实验数据采用SPSS软件包处理，进行方差分析和组间T检验。

3 结 果

3．1总RNA抽提结果用异硫氰酸胍／酚／氯仿一步抽提组织RNA经紫外分光光度计检测显示，260／280nm比值介于1．8～2．0之间，纯度符合要求。1％琼脂糖凝胶电泳总RNA鉴定见***1，28S荧光量度约为18S的1倍，无其它大分子条带，表明总RNA无蛋白污染，无降解。

3．2递增负荷训练、力竭运动及注射BSO后大鼠心肌c―JunmRNA表达的变化

3．3递增负荷训练、力竭运动及注射BSO后大鼠心肌c―Fos

mRNA表达的变化

4　讨 论

本实验采用注射BSO排空组织GSH，心肌中的c―junmRNA和c―fos mRNA表达的量增加，进而激活转录因子AP－1。BSO、TNF―a均可诱导体内产生氧化应激及降低GSH的含量，改变细胞的氧化还原状态，从而激活转录因子AP-1和NF―kB，诱导某些特殊基因的表达。本实验结果也证明了此推论。其可能的机制为：BSO排空细胞内的GSH，细胞易受到活性氧的攻击，长时间力竭运动机体活性氧产生增加，TNF―a含量增加，细胞GSH／GSSG的比值变化的潜在可能性增加，氧化还原状态敏感的转录因子AP―1与DNA的结合活性增加，这可能部分由于在此过程中GSH在细胞核内的重新分布，核AP－1与DNA结合需保守的氧化状态敏感的半胱氨酸通过静电作用与锌原子形成“锌指结构”与DNA结合。氧化半胱氨酸可升高细胞内外的二硫键的含量，在这种情况下，半胱氨酸巯基可调节转录因子的立体结构或者半胱氨酸巯基可结合到蛋白的辅助因子上，位于蛋白序列的特殊位点上的4个胱氨酸和组氨酸与锌原子静电作用形成“锌指结构”适合DNA的大沟。由于巯基基团对氧化还原状态的敏感性，可调节转录因子的活性。通过非致命的氧化应激介导的细胞中不同的氧化还原状态短暂地改变，能调节一些转录因子的活性。调节作用有正调节和负调节，因此能上调或下调基因表达。

本实验另一结果显示：运动训练组c―jun mRNA的表达高于对照组，而训练组c―fos mRNA的表达与对照组没有明显变化。提示可能是由于随着时间运动时间的延长c―junmRNA不能完全降解，使其在细胞内累积，导致运动训练后c―jun mRNA的表达增加。因c―Fos蛋白和mRNA的半衰期短，运动训练24 h后，没有发现其mRNA表达的增加。可能由于AP－1的诱导作用受诱导反应时效较短的限制。AP－1总的DNA结合活性的增高，总伴随着AP-1复合物组分量的变化。如在受刺激后的较短时间内，c―Fos、FosB、c―Jun和JunB等成分的含量即有明显增加；这些亚单位数量上的变化引起的具体效应目前还不甚清楚。细胞c―Jun的表达量起着重要作用，在AP一1的组成成分中，c―Fos蛋白和mRNA的半衰期短于c―Jun蛋白及其mRNA，诱导前大多数AP－1的复合体是c―Jun同源或异源二聚体。诱导作用后，c―Fos蛋白表达量增加，大多数诱导的AP―1是从c―Fos和c―Jun的异源二聚体，c―Fos诱导作用可能是产生转录激活的峰值，c―Jun的激活作用是维持稳定AP－1的活性。

表达实训总结例3

中***分类号:G804.2文献标识码:A文章编号 :1007-3612(2010)03-0046-04

The Effects of Four Weeks Living HighTraining Low on p70S6 K of Skeletal Muscle in Rats

LI Xiaohong,ZHAO Hua,ZENG Fanxing

(Beijing Sport University, Beijing 100084, China)

Abstract: Objective: To explore the influence of hypoxic exerci on skeletal mu scle protein and p70S6K in rats. Methods: SD rats are divided into four groups:control group, hypoxic group, normal exerci group and living hightraining lo w (HiLo) group. Control group lives in normal environment quietly. Hypoxic groupwas traded with 13.6% oxygen concentration all the day, and live quietly. Theother two groups take four weeks exercis, 1hour/day, and 6 days/week. And HiLogroup was traded with 13.6% oxygen concentration during night. Results: After28 days, compared with control group, HiLo group’s total protein concentrationin rat skeletal muscle decread significantly (p

Key words: livng hightraining low (HiLo); protein of skeletal muscle;p70S6K; p70S6K (Thr389)

研究表明低氧及低氧运动抑制骨骼肌蛋白合成,这是低氧训练面临的一个重要问题。 细胞内信号转导通路是影响骨骼肌蛋白合成的关键。大量的细胞培养实验表明低氧抑制蛋白 合成,而且与细胞内信号转导通路有关。高度保守的哺***动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian t arget of rapamycin,mTOR)信号转导通路在骨骼肌蛋白代谢中发挥了关键性的作用。

mTOR可以感受细胞能量状况(AMP/ATP)、环境中营养状况以及PI3K等信号。激活后的mT OR再将信号传递给下游三种主要靶蛋白p70S6K、4EBP1、eIF4G,这些靶蛋白是蛋白质 合成的重要调控因子[1],其中p70S6K是备受关注的一个信号分子。p70 S6K是 核糖体40 s小亚基s6蛋白激酶,其主要功能是使细胞内40 s核糖体蛋白s6磷酸化,而s6磷酸 化被认为是提高翻译效 率的关键因素,它可以促进含有5’TOP(tract of pyrimidine)结构mRNAs翻译,这些mRNA的 主要翻译产物包括核糖体蛋白、延长因子和结合蛋白等,这些翻译元件的生物合成是蛋白质 合成的基础。一般认为,只有活化的p70S6K才能发挥作用。目前,已发现p70S6K 有12个磷酸化位点[2]。p70S6K的激活过程非常复杂, 需要多个丝氨酸/苏 氨酸位点的磷酸化作用,其中Thr389的磷酸化直接激活蛋白激酶[3]。

本研究以细胞转导信号通路为切入点,探讨分析低氧以及低氧运动对大鼠骨骼肌总蛋 白量以及p70S6K的影响,从而能更好地了解低氧运动对骨骼肌蛋白代谢的调节机制。

投稿日期:2009-11-05

基金项目:国家自然科学基金项目(批准号30671013)。北京体育大学2 009届本科毕业论文。通讯作者:曾凡星教授。

作者简介:李晓红,在读硕士研究生,研究方向运动生理学。 1 研究对象与方法

1.1 实验对象

9周龄的雄性SD大鼠40只,由北京维通利华公司提供。昼夜节律人工控制光 照(光照时间为07:00-19:00),环境温度(23±2)℃,大鼠自由取食及饮水。

1.2 实验方法

适应性训练:40只SD大鼠在常氧条件下静养半周后,再进行半周的水平跑台递增负荷适 应性训练,淘汰不适应跑台训练的大鼠,然后筛选36只实验大鼠随机分为4个实验组。动物 分组及训练方式见表1。

表1 动物分组及训练方式情况

分组编号数量生活方式训练方式 常氧安静组NS 8常氧环境下安静生活无低氧安静组HS 8低氧环境下安静生活无常氧训练组NE 10 每天在常氧环境下以恒定 训练强度 :35 m/min强度训练1 h,其余时间在运动时间:1 h/d常氧环境下安静生活6 d/周,持续4周高住低训组HLE10每天在常氧环境下以恒定强训练强 度:35 m/min度训练1 h,19:00-7:00在13.6%运动时间:1 h/d,O2低氧环境下安静生活6 d/周,持续4周 1.3 组织取材

四组大鼠均在第28 d取材,取材前禁饮食12 h,25%乌拉坦腹腔麻醉后,速取后肢趾长伸 肌,剔除肌腱及筋膜组织,用锡纸将其包裹后迅速投入液氮,而后置于-80℃冰箱保存待测 。

1.4 指标测试与方法

1.4.1 组织匀浆用于匀浆的肌肉样品,被切成重约100 mg大小,加50 μL的预冷的匀浆缓冲液于玻璃匀浆 器中冰上匀浆,当无肉眼可见的块状肌肉时,将匀浆液转移至1.5 mLEP 中,再用50 μL的 匀浆缓冲液冲洗匀浆器,也转移至EP管中。12 000 g,4 ℃离心10 min。取上清液,用于总 蛋白浓度测定及p70S6K测定。

1.4.2 骨骼肌总白浓度测定 骨骼肌总蛋白浓度采用Bradford 法测试,具体过程:1) 配制Bradford工作液:按照《精编分子生物学实验指南》[2]配制。2) 标准曲线制备:分别取1 mg/mL牛血清清蛋白(BSA标准蛋白)分别为0、10、20、40、6 0、80、100 μL,不足100 μL的再用生理盐水补足到100 μL,并将样品稀释数个梯度,以 测出最佳上样量。3) 加入5 mL Bradford工作液,用旋涡混匀器混匀,静置5 min。 4) 于595 nm处测定溶液吸光值A595 nm。制作标准曲线,并求出最佳上样量。5) 如上方法分批次测试样品吸光值,根据标准曲线求出样品浓度。

1.4.3 骨骼肌p70S6K及p70S6K(Thr389) 测定骨骼肌p70S6K蛋白表达和p70S6K(Thr389)磷酸化均采用Western Blot法测 定,所用试剂按照《精编分子生物学实验指南》[4]配制,具体过程如下:

1) 制胶:配制8%的分离胶灌入玻璃板中,用蒸馏水封胶,室温放置约30 min;再配制5% 的浓缩胶,胶凝固后取出梳子。

2) 取60 μg总蛋白,加入上样缓冲液、水、DTT,配成20 μL体系,混合均匀后置100℃沸 水中5 min,使蛋白变性,再于碎冰中冷却。

3) 上样:以3 000 rpm,室温离心。再将样品加入凝胶样品孔。

4) 电泳:5%的浓缩胶以80 V恒压,8%分离胶以120 V恒压条件下电泳。

5) 转膜:电泳结束后取出凝胶,放入转移缓冲液中浸泡10 min,再采用半干转将蛋白转 到硝酸纤维素膜(NC膜)上,以恒压20 V,持续90 min。

6) 封闭:将NC膜放入1×TBS液于摇床上轻摇5 min,再加入封闭液,室温下轻摇1.5 h 。之后将NC膜用TBST液洗3次,每次10 min,于摇床上轻摇漂洗。

7) 一抗孵育:将NC膜封入保鲜膜袋中,将用封闭液稀释过的一抗加入袋中,4℃孵育过 夜。不同抗体稀释比例分别为:actin 为1:1000,p70S6K抗体为1:1000,Phospho- p 70S6K(Thr389)为1:1200。之后将NC膜用TBST液洗3次,每次10 min,于摇床上轻摇 漂洗。

8) 二抗孵育:将NC膜封入保鲜膜袋中,将用封闭液稀释过的二抗(1:16 000)加入袋中 ,室温振荡孵育1 h。之后将NC膜用TBST液洗3次,每次10 min,于摇床上轻摇漂洗。

9) 化学发光:于暗室中配制ECL发光试剂反应液,将A、B等量混合后滴加到膜上,视情况 待其反应一段时间后,用保鲜膜封住,保持平整,保鲜膜表面外面没有残余液体。将蛋白面 朝上,放到胶片盒里,压片、感光、显影、定影。

10) 计算:曝光底片用Gel Doc XR 凝胶成像系统用透光拍照,用Quantity One***像分析 系统分析,进行背景消除后,用软件计算出目的条带的光密度值。将每个条带与相应样品的 β-actin条带光密度值进行比较,计算出目的条带的相对含量值。

1.5 统计方法计量资料用X±S表示,计量资料的比较采用单因素分析方法分析。显著性 水平 检验,以p

2 结 果

2.1 骨骼肌总蛋白浓度

表2和***1反应了四周低氧运动后大鼠骨骼肌总蛋白浓度的变化情况。28 d后,与对照组 比较,高住低训组骨骼肌总蛋白浓度显著降低(P

表2 四周低氧运动后骨骼肌总蛋白浓度的变化

组别 总蛋白浓度NS 62.66±3.78HS 60.53±3.52NE 63.12±6.63HiLo54.49±1.90**##*:与对照比较,P

2.2 骨骼肌p70S6K蛋白表达

表3和***2反应了四周低氧运动后大鼠骨骼肌p70S6K蛋白表达的变化情况。与对照组比 较,高住低训组p70S6K蛋白表达显著增加(P

表3 四周低氧运动后骨骼肌p70S6K蛋白的变化

组别p70S6K蛋白/actinNS3.32±0.12HS3.30±0.21NE4.68±0.27*HiLo4.22±0.15****1 四周低氧运动后骨骼肌总蛋白浓度的变化 ***2 四周低氧运动后骨骼肌p70S6K蛋白表达的变化2.3 骨骼肌p70S6K(Thr389)酸化

表4和***3反应了四周低氧运动后大鼠骨骼肌p70S6K(Thr389)磷酸化的变化情况。 与对照组比较,高住低训组p70S6K(Thr389)磷酸化显著降低(P

表4 四周低氧运动后骨骼肌p70S6K(Thr389)的变化

组别p7 0S6KThr389/actinNS1.42±0.06HS0.95±0.13**NE1.34±0.14HiLo 1.18±0.13** ***3 四周低氧运动后骨骼肌p70S6K(Thr389)的变化

3 分析与讨论

3.1 四周低氧运动后骨骼肌总蛋白的变化训练方式不同,对骨骼肌的影响也不同。抗阻力训练增加蛋白质的合成,引起肌细胞肥 大。耐力运动在促进骨骼肌肥大方面的作用不明显,但也有报道认为有氧耐力训练后骨骼肌 蛋白合成增加,这种差异可能与训练方法、训练时间以及训练强度有关。贺道远[7] 的实验 显示,28 d常氧训练后,骨骼肌总蛋白浓度显著增加。本实验中,与对照组比较,常氧耐力 运动组骨骼肌总蛋白浓度增加0.7%,但无显著性差异,这与以往一些研究结果较一致,本 实 验中的耐力运动对促进骨骼肌蛋白合成的作用不明显。本实验与贺道远的研究结果差异很大 程度上可能是由研究的肌肉不一致造成的,本实验中样本来自趾长伸肌,属于快肌,而贺道 远研究的是腓肠肌,属于慢肌。耐力运动对慢肌的训练效果更明显,这可能与耐力训练能够 提高慢肌的总蛋白浓度有关。

低氧暴露抑制骨骼肌蛋白质合成,其具体机制还不清楚。从贺道远等[5]人的 报道中我 们发现,低氧暴露抑制骨骼肌蛋白合成以及mTOR蛋白表达,提示低氧抑制骨骼肌蛋白合成可 能与抑制细胞内mTOR/p70S6K信号转导通路有关。蛋白质的生物合成特别是起始阶段 是一个非常耗能的过程,O2浓度对蛋白质合成非常重要。因此有人认为,低氧环境导致 肌细胞利用的氧减少,影响了细胞的呼吸作用,降低了体内ATP浓度,能量缺乏使骨骼肌蛋 白的合成受阻。本实验中,与对照组比较,低氧安静组骨骼肌总蛋白浓度减少3.4%,但 无 显著性差异,与原有研究结果稍有差异,这可能与低氧暴露的时间、频率以及低氧环境的氧 气浓度有关。

运动后的恢复期对蛋白合成代谢的影响至关重要,因为运动期蛋白分解加强合成抑制, 而运动后恢复期蛋白合成加强,而分解明显减弱。本实验中,与对照组和常氧耐力运动组比 较,高住低训组骨骼肌总蛋白浓度均显著下降,运动后恢复期的低氧环境是抑制高住低训组 骨骼肌总蛋白浓度显著性下降的重要因素。且与对照组比较,常氧耐力运动组和低氧安静组 骨骼肌总蛋白浓度无显著变化,这提示单纯的耐力运动或低氧环境对骨骼肌蛋白代谢的影响 有限,高住低训组骨骼肌总蛋白浓度显著降低是由运动和低氧两个因素共同造成的。

3.2 四周低氧运动后骨骼肌p70S6K蛋白表达的变化

低氧运动对骨骼肌p70S6K蛋白表达的影响的研究还不多见。李常艳的研究[ 6]指 出,12周游泳训练后,不同负荷运动组大鼠骨骼肌p70S6K蛋白的表达无显著性差异。 在本实验中,与对照组比较,常氧训练组骨骼肌p70S6K蛋白表达显著增加,这种差异 可能是由于两者运动方式和训练持续时间不同导致的。贺道远[7]的实验显示,28d后,间 歇低氧暴露组大鼠骨骼肌p70S6K蛋白表达显著下降,常氧运动组显著增加,高住低训 组无显著变化。本实验中,与对照组比较,低氧安静组骨骼肌p70S6K蛋白表达无显著 变化,高住低训组和常氧耐力运动组均显著增加,这也可能是由两者研究的肌肉不一致造成 的,但两个实验都得出了较一致的结论,耐力运动显著提高了骨骼肌p70S6K蛋白表达 。但耐力运动在提高骨骼肌总蛋白浓度方面的作用不明显,这可能是因为p70S6K是一 种骨骼肌蛋白酶,在骨骼肌总蛋白中所占比例非常小,骨骼肌总蛋白浓度较小的变化就能够 引起p70S6K蛋白的显著性变化。本实验中高住低训组骨骼肌总蛋白浓度和p70S6K 蛋白的变化趋势甚至是相反的,其具体原因还需要进一步实验说明。

训练条件的改变也会引起骨骼肌p70S6K蛋白相应的变化。Fujita 等[8]研究 发现低强 度的抗阻练习后p70S6K蛋白的表达没有变化;低强度的抗阻练习结合适度地减少工作 肌肉的血流量,可以增加p70S6K蛋白的表达。贺道远的实验中,28 d高住低训组和低 氧暴露组复氧7 d后,p70S6K蛋白的表达均显著增加。这两个研究都能够反映出氧气 浓度对骨骼肌 p70S6K蛋白的表达有着重要的影响。

3.3 四周低氧运动后骨骼肌p70S6K(Thr389)磷酸化的变化

很多研究都表明mTOR/p70S6K信号转导通路在骨骼肌蛋白代谢中起了关键性作用。抗 阻运动促进骨骼肌蛋白合成,并且Hernande等[9]实验证实,抗阻运动可增加大鼠 骨骼肌中 p70S6K的活性,这进一步说明了p70S6K在骨骼肌蛋白合成代谢中的重要作用。 贺道远等[7]人通过实验也发现低氧运动抑制骨骼肌蛋白合成,抑制PKB/mTOR信号 通路。本实验中,与对照组比较,高住低训组和低氧安静组骨骼肌p70S6K(Thr389) 磷酸化水 平均显著降低,同时这两组的骨骼肌总蛋白浓度也不同程度降低,骨骼肌p70S6K(Thr 389)磷酸化水平与总蛋白浓度的变化一致,这提示低氧及低氧运动通过调节p70S6K细 胞信号转导通路来调节骨骼肌蛋白的合成代谢。当然,低氧及低氧运动对骨骼肌蛋白代谢的 影响还受其他很多因素的影响,如生长因子和胰岛素水平、睾酮水平以及其他非mTOR/p70 S6K信号转导通路等。对人和大鼠的实验证明,只有大强度的力学收缩才能激活p70 S6K[10]。本实验中,与对照组比较,常氧耐力运动组骨骼肌p70S6K(Thr3 89)磷酸 化水平无显著变化,这提示本实验中的耐力运动对骨骼肌的刺激是不够的,骨骼肌p70S 6K(Thr389)磷酸化对低氧以及低氧运动等刺激较敏感。

一般认为,只有活化的p70S6K才能发挥作用。目前已发现p70S6K有12个磷酸化 位点[2]。p70S6K的激活过程非常复杂, 需多个丝氨酸/苏氨酸位点的磷酸化 作用,其中Thr389的磷酸化直接激活蛋白激酶[3]。Thr389直接由mTORC1复合物中的mTOR 磷酸化, 因此p70S6K的激活与mTOR磷酸化密切相关。朱一力[12]的研究认为运动诱导 mTOR磷酸 化增加,p70S6K磷酸化也随之增加,他的研究提示mTOR磷酸化促进p70S6K磷酸 化。但p70S6K磷酸化还受其他很多因素的调节,有研究显示耐力训练可以引起mTOR磷酸化增加,但是p70S6K并没有被激活。贺道远等人[5]的实验结果显示, 大鼠低氧 暴露28 d后,骨骼肌mTOR表达下降86.6%,复氧7 d后,mTOR表达显著升高,为410%,表明低 氧暴露对mTOR表达有明显的抑制作用。本研究中,28 d低氧暴露组和高住低训组p70S6K (Thr389)磷酸化水平均显著降低,低氧环境对p70S6K(Thr389)磷酸化有明显的抑制 作用,这也进一步证实p70S6K(Thr389)磷酸化与mTOR磷酸化密切相关,但低氧对mTOR /p70S6K信号通路的影响机制还不太清楚,需要进一步研究。

4 结 论

1) 在本研究结果表明,高住低训抑制了骨骼肌蛋白合成及p70S6K(Thr389)磷酸化, 这也提示机体可能通过调节mTOR/p70S6K细胞信号转导通路来调节骨骼肌蛋白的代谢 ;

2) 耐力运动提高了骨骼肌p70S6K蛋白的表达。

参考文献:

[1] 朱伦,陈增良.mTOR的结构与功能[J].国际病理科学与临床志,2006,26(1 ):13-33.

[2] Shah OJ,Anthony JC,Kimball SR,et al.4E-BP1 and s6k1:translational integra tion sites for nutritional and normonal information in muscle[J].Am J Physio l Endocrinol Metab,2000,279(4):E715-729.

[3] Pearson RB, Dennis PB, Han JW, et al. The principal target of rapamycin-i nduced p70s6k inactivation is a novel phosphorylation site within a conrved hy drophobic domain[J].EMBO Journal,1995,21:5279-5287.

[4] 奥斯伯,布伦特,金斯顿等主编.马学***,舒跃龙译.精编分子生物学实验指南[M].北 京:科学出版社,2005.

[5] 贺道远,曾凡星,王伟明.高住低训抑制大鼠骨骼肌mTOR蛋白表达[J].北京体育大 学学报,2008,31(8):4071-5071.

[6] 李常艳.不同负荷运动对老龄小鼠骨骼肌mTOR、p70s6k和ERK1/2磷酸化表达的 影响[D].北京体育大学博士学位论文,2008.

[7] 贺道远.低氧运动对骨骼肌PKB/mTOR信号通路的影响[D].北京:北京体育学,2007 .

[8] Fujita S, Abe T, Drummond MJ, et al. Blood flow restriction during low-in tensity resistance exerci increas S6K1 phosphorylation and muscle protein sy nthesis[J].J Appl Physiol, 2007,103(3):903-910.

表达实训总结例4

在《表现性素描》课程的课堂实践教学中，既要有针对全体学生的总的训练思路，又要充分体现以人为本、因人而异的个体关怀。总的训练思路要结合具体授课班级的前期基础课程中表现出来的整体水平来设定相应的课程内容与难度。这就要求授课教师要具有较高的教学实践水平和大量的前期调研工作。艺术教育最终是要具体落实到学生个体的，要培养学生形成具有鲜明个性的表现语言和自由地表达思想的人，进而培养成为具有***人格的人！这还要求授课教师要具有高尚的人格；较强的课堂教学控制能力、丰富的专业知识、灵活的教学思想。

《表现性素描》教学要在总的阶段性教学计划安排下始终关注和引导具体学生个人的思维发展。帮助学生敞开心灵，发现自我；寻找自己喜爱的方式方法，追寻适合自己个性特点的表现语言。课程伊始要对学生进行大量的***片赏析，通过欣赏和点评开拓学生的眼界、丰富学生的思想。尤其是要让学生明白：艺术不是为了再现自然，而是表达情感、观念，进而表达思想。艺术的真实不是自然的真实，而是情感和心灵的真实！什么描摹自然、什么工具材料、什么方式方法、什么形式美感等等都是艺术的表现手段而已！

《表现性素描》课程的教学内容不应该过于复杂，可以在以后的《表现性色彩》、《表现性绘画》教学中逐步增加，循序渐进。

《表现性素描》技术性因素的主要内容包括：

1、点、线、面、体、结构、形式的抽取、组织与研究； 2、各种表现方法的实验与研究；3、各种工具、材料的实验与研究；4、发散性思维、线性思维及其拓展训练。

《表现性素描》表现性因素主要内容包括：

1、注重个人直觉感悟；激发创造潜能；2、主观观念的表达及个性表现语言；3、主观表现与客观技术性因素的关系。

《表现性素描》课程技能实践训练方法：

1、具象写实（尽精微）训练，以具象的手段展示表现的思想；2、形式美感（致广大）训练，寻求表现语言的多样化；3、思维的线性拓展训练，开拓并寻求新的思维方式；4、个性表现语言的探求与研究训练，追寻独特的艺术语言。

下面以四个阶段的课程安排为例：

第一阶段 具象写实（尽精微）

1、放大细节，仔细观察。画未曾画过；未曾画出的东西；2、带着构成的观点看待局部细节，将其归纳为点、线、面等元素；3、经过局部放大，仔细观察，细致描绘，表现出自己得到的结果，尤其是自己独特的感受和见解，并将其细致清晰地呈现出来，使观者感叹；4、表现曾经未表现过的；表现曾经想表现但未能表现出来的；表达自己对局部细节进行细致描绘的感受和发现；5、描绘内容主体要新颖，要自己感兴趣或喜欢；6、尽可能表现新的感受和观点；7、有意识与以往的全因素素描的常规性表现方式拉开距离，寻求新的面貌和形式。

第二阶段 形式美感（致广大）

1、形式既画面上各种视觉元素的样式及其相互之间的组织结构关系；2、放弃细节，专注于画面总的形式美感研究；3、对每一个物象形式趣味的感受与表现；4、各个物象在画面总体中相互之间的组织结构关系；5、抛弃光影、透视、结构等全因素素描的束缚，从纯平面化角度去理解和组织画面的形式感；6、从平面构成角度去理解,尽力将眼睛看到的概括简化为点、线、面等视觉元素, 组织好各视觉元素之间的相互关系；7、依据客观感受,更要依据画面的主观需要去安排大的黑、白、灰关系；8、形式美感的提取与建立要在客观的认真观察与感受的基础上进行，切不可以主观臆造为基础，那样只能罗列出华而不实的东西，只能是无源之水，无本之木，经不起琢磨和研究；9、各种工具与材料的实验研究；10、通过实验获取各种效果的感知经验，并将这种感知经验加以合理巧妙的运用。

第三阶段 思维的线性拓展

表达实训总结例5

中***分类号：R197.39；F203 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2017）12-0201-03

1 数据来源

来源于2016年1月1日至2016年11月30日，阜新中心收集、核实、评价并成功上报到国家药品不良反应监测系统263例MDAE报告。

2 数据处理和统计方法

利用Excel软件，对阜新市2016年上报的263例MDAE报告表进行回顾性综合汇总分析。

3 统计结果

3.1 报告来源及构成（表1、表2）

县区报告覆盖率达100%，而且，两县五区均达每百万人口100份报告。

医疗器械生产企业报告数为零，应加强对其培训与督导，使各医疗器械生产加强对本单位生产的a品进行跟踪监测。

3.2 患者基本情况（表3、表4）

中老年MDAE发生的比例较大。43报告没有填写年龄，均来自经营企业，因经营企业报告有时对患者的年龄不容易获得。以后对基层报告单位培训时强调报告的真实性、完整性、准确性、及时性。

MDAE发生比例男女等同。

3.3 MDAE所涉及的医疗器械信息（表5、表6）

Ⅱ类医疗器械的MDAE发生比例较大，均占报告总数的47.91%，应加强Ⅱ类医疗器械的监测。

MDAE涉及的器械以6826物理***设备占报告总数的25%，其次为6866医用高分子材料及制品，占报告总数的16.7%，再其次6864医用卫生材料及敷料占报告总数的14.0%。在日常监测工作中应对上述三种医疗器械进行关注。

3.4 医疗器械不良事件主要伤害及临床表现（表7）

MDAE有1例造成死亡，大部分主要伤害为皮肤。

3.5 医疗器械不良事件结果（表8）

严重MDAE报告比例，占报告总数的16.0%。

4 结语

4.1 加强医疗器械生产企业责任意识

阜新辖区内医疗器械生产企业三家，2016年阜新市MDAE报告数为零。应加强对医疗器械生产企业监测人员的培训与督导，增强其责任意识，对本企业所生产的产品进跟踪监测。

4.2 继续提升县区级监测机构的监测能力

阜新辖区内共有两个县五个区，16年县区报告复盖率达100%，而且，均达到每百万人口100份。但报告质量较差，16年我中心收集364份，市中心核实、评价后能提交至国家药品不良反应监测系统的只有263份。应继续加强对县区级监测人员的培训与督导，提升其监测能力，保证报告质量，提升报告数量。

4.3 强化报告的真实性、完整性、准确性

表达实训总结例6

中***分类号：G804.2　文献标识码：A　文章编号：1007－3612(2010)04－0039－05

高住低训(Living high-training low HiLo)是美国学者莱文在高原训练基础上提出的一种低氧训练模式，主要用于耐力项目运动员提高有氧运动能力。高住低训期间运动员白天进行耐力训练，肌肉蛋白质分解增加，合成减少，存在蛋白质净降解现象，耐力运动后蛋白质以合成代谢为主，蛋白质合成增强的趋势一直持续到第二天训练之前。高住低训是否可以避免低氧对骨骼肌的负面作用?运动员白天进行耐力训练后，晚上在低氧环境中休息是否抑制骨骼肌蛋白质合成?这些都直接关系到运动员训练后的恢复、运动员力量、速度素质的保持或提高，所以为了全面完整地把握高住低训对机体作用的规律，高住低训，尤其是高住低氧对蛋白质合成的影响是一个亟待探讨的问题。因对运动员实施肌肉活检很困难，所以本研究以大鼠为研究对象，利用一个促进骨骼肌蛋白质合成的耐力运动训练模型，模拟高住低训，观察低氧、低氧运动是否影响雄激素受体(Androgen Receotor AR)含量及其活性，最终影响耐力运动后骨骼肌蛋白质的合成。为了进一步证实低氧、低氧运动对骨骼肌收缩功能的影响本研究还测试了骨骼肌中肌球蛋白重链(Myosin heavy chainMHC)的含量，试***为高住低训期间运动员运动能力和肌肉力量保持和提高提供理论依据。国内外未见高住低训从AR表达和AR转录激活活性等方面对骨骼肌蛋白质合成作用及其机理的研究报道。

1　研究方法

1.1　实验对象与分组　健康雄性、2月龄SD大鼠80只，体重180～200g，随机分为8组：对照组(2组)、低氧组(2组)、运动组(2组)、低氧运动组(2组)，每组各l(只。北京大学医学部实验动物科学部SPF级动物房中饲养，温度22～26℃，湿度30％～58％，自由进食及饮水。

运动组和低氧运动组先进行适应性跑台训练1周，然后进行正式实验4周，各组的生活、运动和低氧暴露方式具体见表1。

1.2　测试样本采集与处理　在实验第1d、第28d各组动物出低氧帐篷后分别用25％乌拉坦麻醉后腹主动脉取血处死，快速取出腿部的腓肠肌，剔除脂肪和筋膜，用预冷的生理盐水洗净，滤纸吸干后称重，投入液氮中保存。

1.3　指标测试方法

1.3.1　骨骼肌睾酮含量　称取40mg的腓肠肌，用眼科小剪迅速剪碎，按1:4的比例加入组织匀浆介质，匀浆20s×3次，匀浆速度为13000转/min，然后40℃，20000转/min离心20min，取上清于-80℃储存待测。

采用北京华英HY-020睾酮放免试剂盒，取标准品和待测样品按照试剂盒的操作步骤进行加样，利用GC-911-r计数仪直接读出样品浓度。

1.3.2　骨骼肌 ARmRNA表达 首先以TrizolTM提取总RNA，M-MLV逆转录酶反转录为cDNA。以genebank上提供的AR mRNA基因序列(序列号：NM-012502)及?-actin mRNA序列(序列号：NM-031144)为模板，以primerpremier5.0软件设计引物，采用TaKaRa Ex Taa(R)R-PCR Version 2.1，在ABI Prism@7300型荧光定量PCR仪上进行扩增。以ABI7300 system software软件对数据进行分析，计算方法使用比较CT法相对定量，目的基因表达量=2。

1.3.3　骨骼肌AR蛋白表达　取40mg骨骼肌组织，以1：4的比例加入细胞裂解缓冲液，冰浴匀浆，测定蛋白浓度。上样鲢40ug/well，浓缩胶60V，1.5h，分离胶90v，2.5h，电冰。JANSSEN LIFE SCIENCES PRODUCTS半干式电转印仪350mA转膜1.5 h。封闭过夜后，与稀释1：500的抗体(AR(N-20)sc-816：Santa Cruz Biotechnology)4mL结合，4℃过夜。与稀释1:3000的二抗(Anti-RabbitIgG/HRP：Dakoeytomation)4mL结合，室温震荡孵育1h。利用ECL显色试剂盒和ImageQuant ECL凝胶成像仪曝光，采集并分析***像。

1.3.4　骨骼肌组织中AR与DNA结合能力　称取肌肉组织40mg，利用美国Pierce公司NE－PER白抽提试剂盒制备白抽提物。考马斯亮蓝法进行白定量。采用特异性的竞争结合实验来证实探针的特异性，探针序列(5’－atagtccatgatgttctcaagat－3’，5’-atcttgagaacatcatggactat-3’)，利用AR(N－20)sc－816(santa Cruz Bioteehnology)进行超级凝胶电泳实验确定结合复合物中AR蛋白的特异性。凝胶电泳迁移率改变分析实验(EMSA)：采用美国Pierce公司LightShift Chemiluminescent EMSA试剂盒和TL-2000紫外交联仪进行白与探针结合，电泳，显影。利用LAS-3000化学发光及成像系统成像，采集信号。用Molecular Imager FX System软件系统对条带进行灰度分析。

1.3.5　骨骼肌总蛋白质含量　采用PIERCE公司BCA蛋白测试试剂盒，按试剂盒说明进行测试。

1.4　数据统计方法　所有数据均以“平均数±标准差”表示，用spss13.0统计软件进行数据处理，各组之间均数比较用单因素方差分析。P

常显著性差异。

2　结果与分析

2.1　急性和慢性低氧、运动对骨骼肌睾酮浓度和骨骼肌蛋白质总量的影响如表2所示，1d各组大鼠腓肠肌匀浆睾酮浓度之间比较均无显著性差异。如表3所示，28d低氧组腓肠肌睾酮浓度比对照组降低，有显著性差异。

如表2所示，1d各组大鼠骨骼肌总蛋白质含量比较均无显著性差异。如表3所示，28d运动组大鼠的骨骼肌总蛋白质含量比对照组明显升高，有显著性差异，比低氧运动组也明显提高，有显著性差异。

运动组骨骼肌总蛋白质含量的变化反映了机体对28d耐力运动的良好适应，说明本实验所采用的运动模型有效促进肌肉蛋白质的合成代谢，在此模型基础上进行低氧暴露模拟高住低训是可行的。

1d低氧组、运动组、低氧运动组大鼠的骨骼肌总蛋白质含量比对照组均降低，反映了一次低氧应激和一次耐力运动后蛋白质含量有减少的趋势，而低氧运动组是运动后进行低氧暴露，推测运动后低氧进一步抑制蛋白质合成，最终导致蛋白质含量最低。经过28d的慢性适应后，低氧组比对照组略高，说明与一天急性低氧应激相比，28d单纯的间断性低氧暴露对蛋白质含量的影响不大。但与1d低氧运动组类似，28d低氧运动组的骨骼肌总蛋白质含量最低，与运动组相比，说明每天运动后进行低氧暴露还是在一定程度上抑制了蛋白质的合成。

运动后进行低氧暴露降低骨骼肌总蛋白质含量的原因可能是：低氧抑制蛋白质合成、加快蛋白质分解，其中主要是抑制蛋白质合成，可能主要是由于促合成激素的变化或缺氧直接抑制了蛋白质的合成。

低氧暴露可能抑制睾酮合成：长期低氧暴露抑制下丘脑一垂体一性腺轴，抑制间质细胞内睾酮合成酶的活性，促进糖皮质激素分泌，糖皮质激素在下丘脑一垂体一三个环节影响睾酮的分泌。有学者报道了2km和5km的慢性连续低氧激活SS，显著抑制GH-IGF-1轴，这种抑制作用一直持续整个低氧过程。

Sandrine等人报道了低氧直接抑制蛋白质合成：大鼠肝细胞在5％氧浓度的低氧环境中孵育120min后，细胞内ATP、RNA和蛋白质合成分别明显降低了62％、82％和93％。Victor R等人测试了大鼠体内心肌、骨骼肌、肝脏、胫骨、皮肤、大脑、肾、肺等各种组织在10％氧浓度中低氧暴露6h后，蛋白质合成速率降低了15％～35％。近几年关于低氧直接抑制蛋白质合成的机理主要集中在蛋白质的翻译环节：低氧通过抑制mRNA翻译的起始步骤而快速抑制蛋白质的合成，低氧抑制翻译是通过两个不同的机理介导的：第一个是通过磷酸化并抑制真核起始因子eIF2a，PERK激酶可磷酸化这个因子；低氧抑制翻译的第二个机理是使第二个真核起始复合物eIF4F失活。低氧使蛋白质合成减少是通过氧传感途径直接抑制mRNA翻译的起始步骤，低氧通过抑制mTOR途径的4E-BPl和eEF2降低蛋白质合成。

2.2　急性和慢性低氧、运动对骨骼肌ARmRNA和AR蛋白表达的影响由表2、3所示，1d和28d各组大鼠骨骼肌ARmRNA水平比较无显著性差异。

由表2所示，1d运动组AR蛋白表达比低氧运动组明显升高，有显著性差异，1d低氧运动组AR蛋白表达的变化和ARmRNA表达的变化一致。由表3所示，28d低氧组AR蛋白表达比运动组明显降低，有非常显著性差异，28d低氧运动组AR蛋白水平明显低于运动组，有显著性差异。

1d运动组AR蛋白表达升高，与1d运动组睾酮的变化一致。有研究报道一次一般力量训练后，大鼠血睾酮出现短暂升高，Ⅱ型肌中AR含量也明显升高17。本研究也证实一次运动可提高AR蛋白水平，可能与一次运动后骨骼肌睾酮含量明显提高有关。28d运动组AR蛋白表达增加，结合28d运动组睾酮和骨骼肌蛋白质含量的变化，分析虽然睾酮没有明显变化，但运动可能是通过AR表达来调节骨骼肌的蛋白质合成，运动组AR蛋白表达升高是骨骼肌蛋白质含量增加的可能作用机制。1d和28d运动均提高AR含量，进一步说明本实验采用的运动模型是促进肌肉蛋白质合成的。

28d低氧组和低氧运动组AR蛋白表达的变化与两组睾酮水平的变化一致。多数研究表明ARmRNA和AR蛋白表达水平主要受睾酮的正向调节，有研究证明去势大鼠或小鼠前列腺ARmRNA和AR蛋白表达减少，DHT***去势动物可以恢复AR表达到正常水平。用雄激素处理人体肝癌细胞系和成骨细胞系可升高ARmRNA水平，而去势却降低大鼠海马ARmRNA水平。Doumit等实验证明，T具有明显上调AR的作用，外源性补充睾酮可提高ARm，RNA和AR蛋白表达，DHT处理人造骨细胞系上调ARmRNA表达，明显提高AR数量。在骨骼肌中，由于不同肌肉对雄激素的反应和敏感性不同，在不同肌肉中AR数量有很大差异，但多数研究仍证实在骨骼肌中雄激素正向调节AR的表达：Michel等观察到大鼠去势后，股四头肌AR水平随时间延长显著降低。Lee等研究证明氧雄龙可诱导骨骼肌ARmRNA表达升高。张文栋的研究显示常氧安静组大鼠ARmRNA水平与血清、股四头肌组织睾酮变化趋势一致，提示雄激素正向调节骨骼肌组织中ARmR，NA表达，6周、9周低负荷耐力运动及6周高负荷耐力运动使ARmRNA表达与同期睾酮水平出现一致性升高。作者认为ARmRNA水平升高是运动的作用，还是由于运动引起睾酮水平变化从而上调ARmRNA表达，尚待进一步研究。

结合28d运动组AR表达的变化，低氧组和低氧运动组AR表达明显下降说明低氧抑制AR蛋白水平：Ghafar etal，的研究报道LNCaP细胞在24h持续低氧暴露和24h低氧暴露后复氧均降低AR蛋白水平和AR靶基因PSA水平。但Soo-Yeon的研究发现LNCaP细胞和AU-14细胞在低氧处理4、8、16h后复氧2h均未观察到AR蛋白水平的明显变化。28d低氧组和低氧运动组ARmRNA水平无明显变化，说明低氧明显抑制ARmRNA后的翻译水平或翻泽后修饰等环节，低氧抑制蛋白质翻泽的起始步骤可以用来解释低氧抑制AR蛋白表达水平。低氧组AR蛋白水平最低也说明了28d长期低氧暴露抑制AR蛋白质的合成。28d低氧暴露明显抑制AR蛋白表达的另一个主要原因是睾酮水平下降，睾酮是调节AR水平的一个主要因素，本实验低氧组、低氧运动组睾酮明显降低的同时诱导AR蛋白水平相应降低，说明低氧是通过T-AR途径调节AR表达。

1d低氧运动组AR蛋白表达最低，低于低氧组和对照组，原因可能是一次低氧刺激AR蛋白水平略升高，而运动刺激明显升高AR蛋白水平，当两种刺激相互叠加时，可能由于刺激过度反而明显抑制AR蛋白水平。28 d低氧运动组的AR蛋白表达介于低氧组和运动组之间，说明大鼠对低氧运动在28d中有一个逐渐适应的过程，结合运动组的变化，说明低氧运动组AR蛋白表达明显减低是低氧抑制效应起了

主要作用。

虽然低氧组、低氧运动组睾酮降低正向调节AR蛋白表达，但低氧组、低氧运动组睾酮水平与ARmRNA水平的变化并不一致，类似的研究报道也显示睾酮降低的同时并不影响骨骼肌ARmRNA水平。Marcas观察到人体在一次急性向心或离心运动后，血清睾酮没有升高反而下降，但肌肉中ARmRNA含量却明显升高。Matsakas A等人观察12周跑笼训练对大鼠三种不同骨骼肌(腓肠肌、股外侧肌、比目鱼肌)中ARmRNA表达和血清睾酮的作用，RT-PCR结果显示在任何肌肉中训练组和常氧安静组ARmRNA表达比较均无显著性差异，酶免分析显示与常氧安静组相比，训练组血清睾酮水平显著降低，这些结果显示长期训练使大鼠血清睾酮水平降低，但并不影响骨骼肌中ARmRNA水平。张文栋的研究显示周高负荷耐力常氧运动组股四头肌组织睾酮水平显著降低，而ARmRNA表达仍明显高于常氧安静组，认为9周高负荷常氧运动组强度相对较大，运动时间较长，外周骨骼肌组织摄取和消耗睾酮量增加，引起股四头肌组织睾酮水平降低，为保证骨骼肌组织功能，抑制蛋白降解，ARmRNA表达一定程度代偿性升高，促进AR蛋白合成，是机体一种保护性反应。

虽然Id、28d低氧运动组ARmRNA和AR蛋白表达的变化基本一致，但低氧组、运动组ARmRNA和AR蛋白表达的变化不一致。很多研究也有ARmRNA和AR蛋白水平变化不一致的类似报道。在LNCaP、T47D、MDA453等细胞系中，雄激素下调ARmRNA水平的同时，上调AR蛋白表达水平。Douglas A.在研究中发现2～3月龄SD雄性大鼠肛提肌和趾长仲肌中ARmRNA水平相同，但肛提肌中AR蛋白含量明显高于趾长伸肌，推测两种肌肉AR蛋白水平不同可能是AR蛋白翻译效率和转换不同导致的。另有研究推测AR蛋白降解增加可能是AR蛋白水平降低的机理之一：新生期补充雌激素可降低大鼠腹侧前列腺AR蛋白水平，但并不降低ARmRNA水平，雌激素***可增加蛋白体介导的AR蛋白水解作用。还有研究提示即使是相同的ARmRNA水平，也可能因为翻译效率不同导致AR蛋白水平不同。综上所述，推测低氧应激对AR表达的调节更多是在翻译水平，而不足在转录环节，考虑低氧一方面抑制AR蛋白翻译，抑制AR蛋白质合成，一方面降低AR蛋白的稳定性，增加AR蛋白的降解，所以在低氧作用下AR蛋白水平是降低的。而ARmRNA在组织中很不稳定、降解快、采点时间单・可能是导致各组之间ARmRNA水平无显著差异的一个主要原因。

28d四组AR蛋白水平的变化趋势与腓肠肌总蛋白含量的变化一致，结合睾酮、ARmRNA、AR蛋白水平、骨骼肌蛋白含量的变化，说明睾酮是通过AR调节骨骼肌蛋白质合成，AR蛋白水平的变化更能反映骨骼肌蛋白质含量的变化。低氧暴露、运动或低氧运动通过改变骨骼肌睾酮水平来调节AR蛋白水平改变，最终影响骨骼肌蛋白质含量。

2.3　急性和慢性低氧、运动对AR与DNA结合能力的影响

如表2所示，1d运动组AR与DNA结合能力明显高于对照组，有显著性差异。如表3所示，28d运动组AR与DNA结合能力明显高于对照组，有非常显著性差异，比低氧组和低氧运动组明显升高，均有显著性差异。1d和28d各组AR与DNA结合能力的变化趋势一致。

1d和28d运动组AR与DNA结合能力明显提高，结合运动组AR蛋白水平升高，说明运动不仅通过改变AR含量，还可通过提高AR活性来调节骨骼肌蛋白质的合成。近年来的研究证明运动可以通过MAPK途径影响AR活性。与运动相关联的生长因子、细胞因子、缺氧、胞内钙离子的变化和机械应力等都可以刺激MAPK信号级联。许多学者的研究从MAPK信号转导途径探讨骨骼肌对运动的适应机制：ERK、JNK和p38MAPK是MAPK途径中三个主要的激酶，有学者的研究显示运动使骨骼肌中D38MAPK和JNK一次性升高，尤其是p38MAPKy的活性明显升高；动物实验和人体实验都表明一过性的耐力和力量训练后，骨骼肌细胞p38MAPK分子被激活；也有研究表明8周的耐力训练使骨骼肌发生适应性改变的同时，骨骼肌中p38MAPK活性明显增高。

有研究指出低氧可激活一些早期反应基因，这些立即的早期反应基因在低氧介导的信号转导中作为第三信使。低氧对这些信号转导途径作用的结果主要是引起酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化水平的改变，从而低氧可引起许多蛋白激酶磷酸化的改变：在大鼠心脏，氧分压降低可激活p38和JNK的活性，在大鼠肝细胞，低氧可激活JNK和ERK的活性。而这些蛋白激酶最终可能通过改变AR共调因子的磷酸化或直接改变AR的磷酸化水平，影响蛋白质的合成。

Soo-Yeon ark等人的研究观察了LNCaP细胞在低氧环境中暴露4h后复氧0、2、6、24h的AR与ARE结合活性的变化。结果显示4h低氧(氧浓度低于0.05％)处理后，LNCaP细胞中AR与ARE结合活性明显提高，在复氧2h时达到最大，然后随时间的推移逐渐下降。细胞被暴露8或16h低氧后复氧2h，观察AR的刺激作用小于低氧处理4h后所看到的最大AR刺激作用。同时还用Western blot和ELISA assav分析观察4h低氧处理后的复氧时间，细胞培养基中PSAmRNA水平、细胞PSA蛋白和PSA分泌明显增加，并且还发现低氧作用于转染了ARE-荧光素酶报告基因的LNCaP细胞后，荧光素酶活性明显提高了。以上两部分研究说明低氧提高了AR的转录激活作用，而且不只限于PSA基因。同时在低氧处理4、8、16h后复氧24h没有观察到AR蛋白水平的任何变化，说明低氧可促进AR的转录激活作用，但并不改变AR的含量。为了进一步证实短暂低氧对AR转录激活作用不仅是在LNCaP细胞，同时又利用人类缺乏AR的DU145前列腺癌细胞，把外源的野生型AR和ARE-荧光素酶一起引入到DU145细胞，进行4h低氧暴露后发现：与LNCaP细胞一致，短暂的低氧暴露激活外源性AR的转录活性，并提高了ARE一荧光素酶的活性，在低氧处理4h后同样观察到低氧对AR的最大刺激作用。总而言之，以上研究结果说明：低氧、复氧的动态变化提高了AR-ARE结合能力和AR靶基因的表达。本实验结果还显示在雄激素衰竭的培养基因中低氧诱导的AR-ARE结合活性完全停止，说明低氧提高AR转录激活是依赖雄激素的，雄激素结合雄激素受体是AR转录激活作用所必需的。低氧可提高AR对低雄激素水平的敏感性，建议在雄激素低于生理水平时，低氧明显刺激AR的转录激活活性。

Ghahr etal 的研究却报道了在进行24h持续低氧暴露后或24h低氧后复氧，LNCaP细胞中PSA和AR蛋白水平均明显降低。作者分析低氧提高AR功能的分子机理在于低氧激活ROS，活化的ROS经由PTK蛋白酪氨酸激酶刺激P13K和MAPK途径，激活的MAPK信号途径可明显提高AR的转录激活活性，低氧产生的ROS可能直接修饰AR的氧化一还原敏感区域，低氧调节共激活因子和抑制因子之间的平衡变化可能也影响AR激活。

本研究中未见28d单纯低氧暴露或运动后低氧暴露比对照组明显提高AR的转录活性，分析原因可能是低氧刺激的浓度较高，机体对低氧逐渐适应的结果。结合28d低氧组和低氧运动组睾酮水平明显降低，但AR蛋白水和AR活性比对照组都没有显著性差异变化，因此可以解释28天低氧组和低氧运动组骨骼肌总蛋白含量相对于对照组没有明显变化。

表达实训总结例7

      们：

经县***府研究，决定今天召开全县扶贫开发工作会议，这次会议的主要内容是：回顾总结25年度扶贫开 发工作，安排部署6年扶贫开发工作。请们自觉关掉手机，或将手机调至震动，遵守会场纪律，保持良好秩序，集中精力开好会。

今天的会议议程有六项。下面进行第一项：请刘树林主任传达省市扶贫工作会议精神，总结5年安排6年全县扶贫工作;

第二项：请田荣***主任宣读大荔县扶贫开发工作领导小组表彰决定;

第三项：颁奖;

第四项：请各乡镇签订劳动力转移技能培训目标责任书(城关镇、段家乡、范家镇、步昌乡)，由于时间关系、其他乡镇会后签订责任书;

第五项：表态发言(步昌乡***府、范家镇北干村、西北新世纪培训学院、**劳务职业技术学校、**兴华培训学院、**祥龙职业培训学校、**扶贫高级技术学校);

第六项：请刘县长讲话。

们，今天的会议议程已全部进行完毕。前面，刘树林主任传达了省市扶贫工作会议精神，总结了5年全县扶贫开发工作，并就今年扶贫开发工作作了具体安排部署;对25年度扶贫开发工作中做出突出贡献的先进集体和先进个人进行了表彰;并与各乡镇签订了劳动力转移技能培训目标责任书;步昌乡***府、范家镇北干村、西北新世纪培训学院、渭南劳务职业技术学校、渭南兴华培训学院、渭南祥龙职业培训学校、渭南扶贫高级技术学校做了表态发言;最后，刘县长作了重要讲话。请大家认真学习领会，并切实抓好落实。下面，我就贯彻落实这次会议精神再强调三点：

一、认真传达会议精神。各乡镇、各有关部门要迅速召开领导办公会和全体会，认真学习传达这次会议精神，结合各自实际，领会实质，统一思想，提高认识，明确任务，狠抓落实，确保扶贫工作任务的全面完成。

二、明确重点，夯实任务。各乡镇、各有关部门要以今天会上提出的重点和主要任务为统揽，进一步理清思路，制定工作计划，做到任务到人，责任到人，逐项抓好落实，以重点工作的强力突破，带动全局工作的快速开展，为完成全年扶贫目标任务奠定良好的基矗

三、加强领导，密切配合。完成全年目标任务，必须强化领导，狠抓落实。一是各乡镇、各有关部门“一把手”要负总责、牵好头。紧紧围绕加快新农村建设这一主题，沉下身子干实事，扎扎实实求发展。二是各成员单位要密切配合，加强协作。按照县上的统一要求，结合本部门实际，做到项目向贫困村倾斜，资金向贫困村集中，全力以赴帮助贫困村群众尽快脱贫。三是扶贫部门要全力抓。要集中时间、集中干部、集中精力，全身心地投入到完成全年扶贫目标任务上来，确保扶贫工作取得新成效。

们，目标已经明确，任务已经落实。让我们在县委、县***府的正确领导下，团结一致，齐心协力，扎实工作，努力开创我县扶贫开发工作新局面，为构建和-谐**做出新的贡献。

2017扶贫开发工作会议主持词【2】

      尊敬的各位领导：

大家好!首先，我谨代表大麻镇委、镇***府向 领导一行的到来表示热烈的欢迎和衷心的感谢!

在 (帮扶单位名称)的大力帮扶下，在县委县***府的亲切关怀和全体镇村干部群众的共同努力下， 村的村容村貌和村民生产生活条件发生了很大的变化。 (简要阐述帮扶措施及效果)。现在，请允许先我向大家介绍出席今天座谈会的领导： (帮扶单位领导) (县领导) (镇主要领导)

让我们以最热烈的掌声欢迎他们的到来!今天座谈会的主要议程有：

下面，有请扶贫驻村干部 做扶贫情况汇报。

下面，有请村支部委书记作补充讲话。

下面，有请镇领导(县领导)作指示。

最后，有请 (帮扶单位负责人)作指示。

座谈会到此结束，接下来，请各位领导移步到农户家开展扶贫慰问活动。(到某各现场点进行考察调研)。。。

2017扶贫开发工作会议主持词【3】

      们：

经县***府研究，决定今天召开全县扶贫开发工作会议，这次会议的主要内容是：回顾总结xx年度扶贫开 发工作，安排部署xx年扶贫开发工作。请们自觉关掉手机，或将手机调至震动，遵守会场纪律，保持良好秩序，集中精力开好会。

今天的会议议程有六项。下面进行第一项：请刘树林主任传达省市扶贫工作会议精神，总结xx年安排xx年全县扶贫工作;

第二项：请田荣***主任宣读大荔县扶贫开发工作领导小组表彰决定;

第三项：颁奖;

第四项：请各乡镇签订劳动力转移技能培训目标责任书(城关镇、段家乡、范家镇、步昌乡)，由于时间关系、其他乡镇会后签订责任书;

第五项：表态发言(步昌乡***府、范家镇北干村、西北新世纪培训学院、**劳务职业技术学校、**兴华培训学院、**祥龙职业培训学校、**扶贫高级技术学校);

第六项：请刘县长讲话。

们，今天的会议议程已全部进行完毕。前面，刘树林主任传达了省市扶贫工作会议精神，总结了xx年全县扶贫开发工作，并就今年扶贫开发工作作了具体安排部署;对xx年度扶贫开发工作中做出突出贡献的先进集体和先进个人进行了表彰;并与各乡镇签订了劳动力转移技能培训目标责任书;步昌乡***府、范家镇北干村、西北新世纪培训学院、渭南劳务职业技术学校、渭南兴华培训学院、渭南祥龙职业培训学校、渭南扶贫高级技术学校做了表态发言;最后，刘县长作了重要讲话。请大家认真学习领会，并切实抓好落实。下面，我就贯彻落实这次会议精神再强调三点：

一、认真传达会议精神。各乡镇、各有关部门要迅速召开领导办公会和全体会，认真学习传达这次会议精神，结合各自实际，领会实质，统一思想，提高认识，明确任务，狠抓落实，确保扶贫工作任务的全面完成。

表达实训总结例8

中***分类号：G646？摇 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2014）01-0218-02

药房实习是药学类学生的必经之路，是理论与实践、课堂与临床之间的桥梁，通过药房实习，使学生的理论知识进步得到巩固，由抽象到具体，由生疏到熟悉。同时药房实习也是培养语言表达能力、药房服务、工作态度的过程[1]，通过实习学生能准确表达自己的思想、观点、意见、建议，以求所表达的信息使顾客能理解、明白、接受。激发并提高学生主动参与的意识，倡导优良的沟通表达意识，使他们在不知不觉的氛围中自我感受和领悟“学什么”和“怎么办”，实习过程达到“润物细无声”的功效。那么如何对药学学生进行沟通能力的培养，总结多年的教学经历，认为可从实习前准备―实习过程―实习分析等几个环节展开。

一、实习前沟通准备

1.带教老师准备工作。结合药房实践环节，设置相关的语言表达训练或沟通内容。如要求学生在实习前进行分组，同学间用语言交流实习的意愿、目标、实习疑问、实习期望等，并且把可能的过程记录成文，加以分析和讨论，由带教老师做出解释或组织论坛，此举可以使同学了解实习目的，又能做到实习心中有数。

2.待实习学生准备工作。学生自行设置关于实习的调查问卷，内容可涉及实习准备、实习过程、实习内容、实习环节、实习安排甚至是生活方面的内容，完成实习问卷的设计后到同专业不同年级发放，并在规定时间内请他人认真、准确、准时完成问卷调查，这就要锻炼其与他人的沟通能力；将收回的调查问卷分类总结，写出书面报告，锻炼逻辑思维能力和书面表达能力；要求学生主持小型实习座谈会，就实习过程可能存在的热点问题进行讨论评价，开展讨论或辩论等言语应用活动，所有讨论话题或主题学生有权自由选择。

3.模拟药房工作。实习前模拟药房的实际工作开展实训项目，如药品分类陈列、处方调配、中药处方、药房服务礼仪、药品进销存电脑操作、药学咨询服务、用药指导、盘库等工作。针对常见病如胃肠道疾病、呼吸内科疾病等设计不同场景，要求同学之间互相扮演患者、药剂师、会计、监督员等角色，进行沟通、引导服务。通过模拟药房，使同学进入药房前有充分的心理准备，为之后的实习工作打下良好基础。

二、实习过程

1.语言表达训练。药房工作首先要求仪容仪表端正，面带笑容，对顾客要有耐心，礼貌用语要做足。对顾客称呼要切合当地习惯，使用敬语，如对于年长的顾客使用“您”，对于特殊人群如残疾、有缺陷的顾客不能表达任何不敬之语，相反更体现尊重和理解。在实习过程中就某个问题进行寻访，锻炼问话、聆听能力，完成分析报告，口语表达能力的训练在药房实习训练具有实际需求。

2.非语言培养。在与客户沟通时巧妙应用表情、眼神、手势等身体语言，可达到最佳效果，因此针对此方面做培训。表情训练要求面带微笑、主动热情，不能把不良情绪带到客户服务中，要用轻松而又愉悦的表情，拉近客我之间的距离。眼神往往最能反映一个人的内心，眼神训练要求与客户沟通时，注意观察对方的眼睛，用眼神与客户交流，显示对他们的尊重、理解。眼神要用得恰到好处，既不能死盯对方，又不能让人感觉你是不在乎的。手势训练要求在与客户沟通中，能将手势运用得巧妙到位，提高沟通的效率和水平，运用不当会给沟通带来阻力。如对于腿脚不便的顾客能主动上前扶一把，对于药物服用方法不明确的顾客可以主动示范，对于带孩子的顾客主动问候孩子可以拉近与家长的距离。在与客户沟通时，手不能乱动，更不能指手画脚。空间语言的训练，所谓空间语言就是在与顾客沟通时的站位、站姿、心理反映等。如与异性沟通时，不能靠得太近，这样会给对方心理造成不适。总之，非语言沟通是与顾客沟通的一个重要方面，训练和培养非语言沟通习惯，会大大提高与顾客沟通的水平和效率，提高顾客满意率，进而提高服务水平。

3.选定药房常见的工作情境为培训主题。充分与药房实际工作结合，具有较强实用性。通过药房实习工作分析，凝练数个教学主题，其中涉及与刚进药房的顾客沟通、疾病描述沟通、消费心理沟通、药物调剂沟通和正确用药沟通等。这些主题均是药房工作最常见的工作情境，是药剂师沟通的背景，且不同情境下的沟通又各具有不同的重点与要求，故培训这些工作直接提高服务水平，有助于与顾客沟通。

三、针对不同需求的培训

1.被动或急迫性需求。如患者托人代买药物或病情急，顾客到药店后购买其他药品的几率较小，除了购买目标药品外，不会在其他柜台驻足。针对此种顾客设置被动需求训练，其宗旨是认真聆听顾客需求，在顾客倾诉他们的意愿、心声时，需要恰到好处的沉默语言聆听，这样可以增加顾客对你的信任度。按需服务，以专业、简单的语言告知顾客所购药品的功效主治、服用方法以及副作用，提高服务效率，当顾客提出的医疗问题超过他们的解答能力时会心存畏惧，专业知识不足是第一位，故苦练内功是解决问题的根本。如顾客有其他需求再分析，若无则完成服务。

2.主动性需求。如患者亲自买药，其本身医药知识较贫乏，渴望了解不同药物的主治及使用。培养聆听、尊重顾客意愿是必需的，忌频繁打断顾客、以自己的主观愿望代替顾客所需，在顾客阐述不明确的情况下用简明扼要的语言解惑答疑，针对此类顾客设置主动需求训练，分析患者病情，介绍不同药物的特点、适应症等，给出合理的用药方案并完成药学服务。满足一种需求的某种药品既不能多，也不能少。用药种类太少，其***效果就不显著，甚至达不到治愈的目的，往往还会延误病情；用药种类太多，要考虑药物的相互作用，药品的毒副作用是否会增加，将药学基本常识介绍给顾客。

3.谨慎满足需求。“是药三分毒”用药不当不仅不能治病，还有可能致病。为顾客选购药品时需慎重，不能违背职业道德，为获利而给顾客强行推荐自己认为的“好”药，由于对疾病及药品知识的缺乏，顾客往往也错误地把药品价格的高低作为判断药品好坏的标准。因此要求正确指导顾客合理用药。除此之外，尚需提示用药期间的饮食、日常锻炼的综合指导。

四、实习结束接受指导

实习结束也是实结的最好时机，成功的实结应该是学生结合自己的实***历口头表达实习的内容、过程、收获、感想、实习建议。要求每个同学有口头实结的机会，根据表述情况给出合理的评价，并接受带教老师的点评或意见。实习结束时重新设计模拟药房的训练，与实习前的模拟比较，学生从中感受自己的进步与不足，实习效果大大提高，由被动变主动，由消极变积极，缩短了实习与工作之间的距离。由此可见，药房实习是药学类学生沟通与表达能力的一次很好的体现与实践。

表达实训总结例9

长期耐力训练能导致肌纤维及其MHC异形体由快型向慢型转变。这一点已有大量的研究采用组织化学、免***组织化学和蛋白电泳方法在蛋白水平上进行了证实[1~3]。但对于运动训练中MHC异形体mRNA的变化，本研究采用RT-PCR、免***组化及方波脉冲刺激等技术，观察4～6wk耐力训练对大鼠骨骼肌肌球蛋白收缩功能的影响，通过检测MHC各异形体mRNA的变化和肌纤维横截面改变，探讨运动训练影响其变化的可能因素。

1材料与方法

1.1实验动物：雄性SD大鼠20只，体重230±16g，随机分为对照组(n=10)和训练4wk组(n=10)，训练5wk组(n=10)，训练6wk组(n=10)。所有动物实验前均未进行过跑台运动。

1.2试剂：一抗为鼠源性抗骨骼肌肌动蛋白及快缩型肌球蛋白重链（MHCⅡ）单克隆抗体，ABCam产品。二抗为偶合碱性磷酸酶的抗鼠 IgG，SIGMA产品。

1.3运动方式：训练组动物每天进行两次运动训练，每次50min，跑速为18.5m／min～24m／min，坡度为0°，运动强度为70％～75％VO2max。持续训练4～6wk[4]。

1.4半定量RT-PCR检测腓肠肌MHC和α-actin表达水平。

1.5肌纤维横截面积计算与统计分析。

1.6离体腓肠肌最大等长收缩张力的测量。

2结果

2.1有氧训练对腓肠肌MHC表达的影响：经过4周耐力训练，训练组肌球蛋白总MHC表达是对照组的105％ （P<0.01）。MHCⅡa和MHCⅡx mRNA表达较对照组显著增加 （P<0.05， P<0001）。训练前后各MHC亚型在总MHC中的比例分另Ⅱ是253％ vs 254％（MHCⅠ)、245％ vs 252％（MHCⅡa）、24.9％ vs 25.6％ （MHCⅡx）和25.3％ vs23.7％（MHCⅡb）。2.2训练组大鼠肌纤维横截面积的变化：***2-1中被染成棕黑色的纤维为MHCⅡ型纤维，未着色者为MHCⅠ型肌纤维。在训练组大鼠中，随着时间的延长，快缩和慢缩纤维的横截面积均逐渐增大。在对照组中，快缩和慢缩纤维的横截面积均无多大变化。

***2-1大鼠腓肠肌肌纤维免***组化染色典型照片

A、C、E：4wk、5wk、6wk训练组MHC Ⅰ、Ⅱ横截面积变化；B、D、F：4wk、5wk、6wk对照组MHC Ⅰ、Ⅱ横截面积变化2.3腓肠肌等长收缩最大张力的变化：如***2－2有氧运动组大鼠腓肠肌的等长收缩最大张力经过4wk、5wk训练后与对照组无明显差异，但6wk训练组等长收缩最大张力较对照组显著增加(P<0.01)。

 ***2-2有氧运动组与对照组大鼠腓肠肌

的等长收缩最大张力的动态变化3讨论

本实验发现，2周跑台训练后，大鼠股四头肌深层肌α-actin mRNA表达和肌球蛋白总MHC mRNA 表达均增加，各MHC异形体mRNA变化却不一致，MHCⅡa和MHCⅡx mRNA表达上升，MHCⅠ和MHCⅡb mRNA变化不明显。考虑到采用的实验方法中mRNA的量是以单位总RNA的含量计算的，而总RNA上升，所以α-actin mRNA的绝对量可能是增加的。Paul RM等[6]对每天100min的2wk跑台运动后大鼠骨骼肌α-actin mRNA含量变化进行的测定显示，快肌α-actin mRNA含量增加了61％。与Paul之结果相比，本实验中α-actin mRNA仅增加了22％。

在本研究中MHCⅡb mRNA下降不明显，原因可能是，与其他的MHC异形体相比，其需要不同的转录因子、更高的机械刺激阈和更长的训练持续时间。耐力训练可以从转录水平上增加肌纤维收缩蛋白肌动蛋白和肌球蛋白重链的基因表达，而肌球蛋白重链表达的增加主要表现为MHCⅡa和MHCⅡx mRNA的含量增多[7]。但对于运动训练影响其变化的具体因素（强度、频率、时间）还需进一步研究。

训练后肌肉体积增大取决于下列因素：①每根肌纤维中的肌原纤维数量增加；②肌纤维中毛细血管的密度增加；③肌肉中蛋白含量增加；④肌纤维数量增加。肌肉横截面每增加1cm2,可提高力量6～12kg[5]。肌肉的生理横断面为该肌所有肌纤维横截面的总和。肌纤维增粗表明肌纤维中的能源物质三磷酸腺苷和磷酸肌酸增加，肌结缔组织增厚，肌糖元含量增多，毛细血管开放密度加大，肌凝蛋白含量增多，从而提高了肌纤维的质量，大大提高了每根肌纤维的负力进而决定了最大力量的提高[8]。在本实验中，经过4～6周有氧训练后，大鼠腓肠肌主要以Ⅰ型肌纤维为主，且肌肉横截面积较对照组来说有所增加，表明经过连续有氧训练后能明显提高大鼠肌纤维的质量。

参考文献

表达实训总结例10

[中***分类号] G633.41[文献标识码] A[文章编号] 16746058（2017）16004001

随着新课改的不断推进以及素质教育要求的逐步提高，英语口语表达越来越受教师和学生重视。

一、初中生英语口语表达现状

在初中英语教学中，经常会有考试成绩很出色但上课从不举手发言的学生，也有看似思维敏捷但用英语发言时就会结结巴巴的学生，更有根本无从用英语表达内心观点的学生……学生为什么在英语口语的表达上表现得如此困难呢？笔者结合自身的教学经验总结出以下几点原因。

1.不重视口语表达。很多家长与学生衡量学习的好差都只看考试成绩，虽然考试中有口语测试的部分，但与书面试题相比口语测试所占的比例很小，因此家长和学生对口语表达都不太重视。

2.羞于表达，没有勇气和自信。英语不是我们的母语，担心自己说不好、担心自己说错、担心其他同学嘲笑等都会使得学生在口语表达时不够顺畅，越是如此越是容易产生恶性循环。

3.词汇量太小。有的学生学习时不注重积累词汇，导致想表达的时候缺乏可用词汇。

4.没有良好的英语语言环境。将学生放在一个需要用目的语交际的环境中进行交流，那么语言学习更容易成功，这是欧莱特交际教学思想中的观点。不仅如此，欧莱特还认为只有这样才有利于学生自主判断其语言形式的\用得体与否，并且有利于学生在特定的语境中理解语言形式和意义。但是现实生活学习中，学生接触真实英语交际的情景太少，所以学生真正运用英语进行口语表达和交际少之又少。

二、提升学生英语口语表达能力的措施

1.引导学生重视英语口语表达。交流是语言学习的最终目的，英语是国际上用于交流的***语言之一，因此，英语口语表达能力对个人发展的影响是很大的。英语教师要引导学生形成这方面的意识，并促使其形成正确的学习动机。

2.欣赏学生表达，促使学生建立与增强自信心。“知之者不如好之者，好之者不如乐之者。”这句古话足以说明兴趣对于学习产生的巨大影响。因此，教师要善于调动学生“说”的兴趣，使学生由“要我说”逐步转变为“我要说”，从而使得口语教学变得生动、真实、高效。

教师要善于用自己的情绪感染学生，让学生觉得没有压力继而产生“说”的欲望。教师要善于开发适合学生英语交流的课程资源、语言情境，利用学唱英语歌、短剧表演、讲故事、小组对话等形式为学生创设英语交际的平台，不断刺激学生“说”的欲望，激发出他们“说”的意愿。教师可以设计由易到难的口语表达练习题组，鼓励和欣赏学生的口语表现，不断给学生的“说”增加信心和动力。教师可以迎合初中生的心理特征，开展口语游戏比赛，刺激学生由“说”到“说得对”、“说得好”。

3.帮助学生扩大词汇量。词汇量是口语表达的基础。因此，教师在确保学生掌握教材中的单词之后，还应该加强拓展性的练习，引导学生或是阅读英语课外资料，或是听听英文歌曲，或是看一部英语原声电影……长此以往，学生口语学习的兴趣增强，词汇量也在无形中得到扩大。

4.丰富口语训练的形式。“Practice makes perfect！”熟能生巧是大家都知道的道理。口语的训练需要一个长期的过程，所以，多样化的训练方式是必需的。学生英语口语能力的提高除了坚持长期的口语实践性训练以外别无他法，而长期的实践训练没有多样化的练习形式支撑会很枯燥乏味，所以多样化的练习形式和手段在口语实践训练中相当重要。

（1）Free talk.充分利用课前五分钟让学生进行英语自我介绍、英语对话或小品表演等多样化的口语练习，让学生在这五分钟内自由发挥，人人参与。在这一过程中，教师要鼓励与欣赏学生的表达并及时指导与总结。

（2）Recitation， imitation and retelling.背诵和模仿对于口语训练还处于初级阶段的学生来说是非常有效的口语学习方法。在学生的口语能力达到一定水平后，教师还应对学生提出“复述”的要求，培养学生的发散性思维，使学生的口语表达更为灵活。