倍他胡萝卜素

食物中胡萝卜素的测定方法

Methodfordeterminationofcaroteneinfoods

1主题内容与适用范围

本标准规定了食物中胡萝卜素的测定方法——纸层析法。

本标准适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定，其最

小检出限为0.11g。

2原理

以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行

纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色纱分离；剪下含胡萝

卜素的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。

3试剂

3.1石油醚（沸程30～60℃）：同时是展开剂。

3.2丙酮：分析纯。

3.3丙酮-石油醚混合液：3：7（V/V）。

3.4无水硫酸钠：分析纯。

3.55%硫酸钠溶液。

3.61：1氢氧化钾溶液：取50g氢氧化钾溶于50mL水。

3.7无水乙醇：需经脱醛处理。

3.8-胡萝卜素标准溶液：取5mg-胡萝卜素标准品，溶于10mL三氯甲烷中，

浓度约为500g/mL，准确测其浓度。

取标准溶液10.0L，加正己烷3.00mL，混匀，测吸光值，比色杯厚度1cm，以正

己烷为空白，入射光波长450nm，平行测定三份，取均值。

计算公式：

………………………………（1）

式中：X1——胡萝卜素标准溶液浓度，mg/mL；

A——吸光值；

E——-胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度为1cm，

溶液浓度为1ppm的吸光系数，为0.2638；

——将ppm,换算成mg/mL;

——测定过程中稀释倍数的换算。

3.9-胡萝卜素标准使用液：将已标定的标准液用石油醚准确稀释后，每毫升溶

液相当50g，避光保存于冰箱中。

4仪器和设备

4.1实验室常用设备。

4.2玻璃层析缸。

4.3分光光度计。

4.4旋转蒸发器：具150mL球形瓶。

4.5恒温水浴锅。

4.6皂化回馏装置。

4.7点样器或微量注射器。

4.8新华滤纸：定性，快速或中速，101号。

5样品的采集和处理

5.1粮食：样品用水洗三次，置60℃烤箱中烤干，磨粉，储于塑料瓶内，放一小

包樟脑精，盖紧瓶塞保存，备用。

5.2蔬菜与其他植物性食物：取可食部用水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，切碎，

用匀浆器制成匀浆，贮于塑料瓶内，冰箱内保存备用。

6测定步骤（以下步骤需在避光条件下进行）

6.1样品提取

6.1.1取适量样品，相当于原样1～5g（含胡萝卜素约20～80g）的匀浆，粮食样

品视其胡萝卜素含量而定，置100mL带塞锥形瓶中，加入丙酮20mL，石油醚5mL，

振摇1min，静置5min，将提取液转入盛有100mL5%硫酸钠溶液的分液漏斗中，

再于锥形瓶中加入10mL丙酮-石油醚混合液，振摇1min，静置5min，将提取液

并入分液漏斗中。如此提取2～3次，直至提取液无色为止。

6.1.2植物油和高脂肪样品：需先皂化，取适量样品（＜10g＝，加脱醛乙醇30mL，

再加10mL1：1氢氧化钾溶液，回流加热30min，然后用冰水使之迅速冷却，皂

化后样品用石油醚提取，直至提取液无色为止。

6.2洗涤

6.2.1将提取液（6.1.1）静置分层，弃去下层水溶液，反复用5%硫酸钠溶液振摇

洗涤，每次约15，直至下层水溶液清亮为止。

6.2.2将皂化后样品提取液（6.1.2）用水洗涤至中性。

6.2.3将6.2.1或6.2.2的石油醚提取液通过盛有10g无水硫酸钠的小漏斗，漏入球

形瓶，用少量石油醚分数次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤液并入

球形瓶内。

6.3浓缩与定容

将上述球形瓶内的提取液于旋转蒸发器上减压蒸发，水浴温度为60℃，蒸发至

约1mL时，取下球形瓶，用氮气吹干，立即加入2.00mL石油醚定容，备层析用。

6.4纸层析

6.4.1点样：在18cm30cm滤纸下端距底边4cm处作一基线，在基线上取A、B、

C、D四点（如图1所示），吸取0.100～0.400mL浓缩液(6.3)在AB和CD间迅速

点样。

图1

6.4.2展开：待纸上所点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，置于预先用石

油醚饱和的层析缸中，进行上行展开。

6.4.3洗脱：待胡萝卜素与其他色素完全分开后，取出滤纸，自然挥发干石油醚，

将位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带剪下，立即放入盛有5mL石油醚的具塞试

管中，用力振摇，使胡萝卜素完全溶入溶剂中。

6.5比色测定

用1cm比色杯，以石油醚调节零点，于450nm波长下，测吸光度，以其值从标

准曲线上查出-胡萝卜素的含量，供计算时使用。

6.6标准曲线绘制

取–胡萝卜素标准使用液（浓度为50g/mL）1.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00mL

分别置于100mL具塞锥形瓶中，按样品测定步骤进行操作，点样体积为0.100mL，

标准曲线各点胡萝卜素含量依次为2.50、5.00、7.50、10.00、15.00、20.00g。为

测定低含量样品，可在0至2.50g间加做几点，以胡萝卜素含量为横坐标，以吸

光度为纵坐标绘制标准曲线（见图2）。

图2实测图例胡萝卜素标准曲线图

7计算

…………………………………（2）

式中：X

2

——样品中胡萝卜素的含量，以-胡萝卜素计，mg/100g；

——在标准曲线上所查得的胡萝卜素的含量，g；

——点样体积，mL；

——样品石油醚提取液浓缩后的定容体积，mL；

——样品质量，g。

8结果的允许差

同一实验室平行测定或重复测定结果的相对偏差绝对值

、应用范围

该方法用于预混料中－胡萝卜素的定量分析

2、原理

样品被KOH水溶液皂化，－胡萝卜素被乙醇和环己烷萃取出来，用乙醇和异丙醇稀释后，

用分光光度计测定－胡萝卜素含量。

3、分析过程

3.13mol/L的KOH溶液：将34.0gKOH溶于水，然后定容到200.0ml

3.2样本溶液配制

精确称取含大约10mg－胡萝卜素到锥形瓶中。加入20ml3mol/L的KOH溶液，在65℃（超

声或水浴中震摇）15min，冷却后加入50.0ml环己烷和50.0ml无水乙醇，用磁搅拌子以700

转/分的速度搅拌至少5min，（或强烈震摇10min,使均匀），取该溶液1ml用异丙醇定容到10ml

在最大波长452nm测定吸光度，用异丙醇做空白。

4、计算结果

A（吸光度）稀释量0.955（校正因子）

取样量（mg）250

A（吸光度）50（环己烷量）10（异丙醇定容量）0.955（校正因子）

取样量（mg）250

1％－胡萝卜素取0.10－0.12g

GB/T5009.83--2003食物中胡萝卜素的测定

本方法检出限：高效液相色谱法为5.0mg/kg（L），线性范围为0~100mg/L；纸层析法

为0.11g，线性范围1ng～20ng。

第一法高效液相色谱法

2.原理

试样中的-胡萝卜素，用石油醚丙酮（8020）混合液提取，经三氧化二铝柱纯化，然

后以高效液相色谱法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。

3试剂

3.1石油醚：沸程30℃~60℃。

3.2甲醇：色谱纯。

3.3丙醇。

3.4己烷。

3.5四氢呋喃。

3.6三氯甲烷。

3.7乙腈：色谱纯。

3.8三氧化二铝：层析用，100-200目，140℃活化2h，取出放入干燥器备用。

3.9含碘异辛烷溶液：精确称取碘1mg，用异辛烷溶解并稀释至25mL，摇匀备用。

3.10-胡萝卜素标准溶液：精确称取1mg-胡萝卜素，加入少量三氯甲烷溶解，然后用

石油醚溶解并洗涤烧杯数次，溶液转入25mL容量瓶中，用石油醚定容，浓度为40g/mL，

放入-18℃储存备用。

3.11-胡萝卜素标准溶：精确称取-胡萝卜素12.5mg于烧杯中，先用少量三氯甲烷溶解，

再用石油醚溶解并洗涤烧杯数次，溶液转入50mL容量瓶中，用石油醚定容，浓度为250

g/mL。-18℃储存备用。二个月内稳定。根据所需浓度取一定量的-胡萝卜素标准液用移动

相稀释成100g/mL。

3.12-胡萝卜素标准使用液：分别吸取-胡萝卜素标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL

于推荐图书 10mL容量瓶中，各加移动相至刻度，摇匀后，即得-胡萝卜素标准系列，分别含-胡萝

卜素5、10、

20、30、40、50g/mL。

3.13-胡萝卜素异构体：精确称取1.5mg-胡萝卜素于10mL容量瓶中，充入氮气，快速

加入含碘异辛烷溶液10mL，盖上塞子，在距20W的荧光灯30cm处照射5分钟，然后在避

光处用真空泵抽去溶剂，用少量三氯甲烷溶解结晶，再用司法考试时间 石油醚溶解并定容至刻度，浓度为

150g/mL，-18℃保存。

4仪器

4.1高效液相色谱仪

4.2离心机

4.3旋转蒸发仪

5分析步骤

5.1试样提取

5.1.1淀粉类食品：称取10.0g试样于25mL带塞量筒中（如果试样中-胡萝卜素量少，

取样量可电梯管理 以多些），用石油醚或石油醚丙酮（8020）混合液振摇提取，吸取上层黄色液体

并转入蒸发器中，重复提取直至提取液无色。合并提取液，于旋转蒸发器上蒸发至干（水浴

温度为30℃）。

5.1.2液体食品：吸取10.0mL试样于250mL分液漏斗中，加入石油醚丙酮（8020）20mL

提取，然后静置分层，将下层水溶液放入另一分液漏斗中再提取，直至提取液无色为止。合

并提取液，在旋转蒸发器蒸发至干（水浴温度为40℃）。

5.1.3油类食品：称取10.0g试样于25mL带塞量筒中，加入石油醚丙酮（8020）提取。

反复提取，直至上层提取液无色。合并提取液，于旋转蒸发器蒸发至干。

5.2纯化将5.1.1，5.1.2，5.1.3的试样提取液残渣，用少量石油醚溶解，然后进行氧化

铝衣服搭配技巧 层析。氧化铝柱为1.5cm（内径）4cm（高）。先用洗脱液丙酮石油醚（5：95）洗氧

化铝柱，然后再加入溶解试样提取液的溶液，用丙酮石油醚（5：95）洗脱-胡萝卜素，控

制流速为20滴/min，收集于10mL容量瓶中，用洗脱液定容至刻度。用0.45um微孔滤膜过

滤，滤液作HPLC分析用。

5.3测定

5.3.1HPLC参考条件：

色谱柱：SpherisorbC18柱4.6mm150mm。

流动相：甲醇乙腈（9010）

流速：1.2mL/min

波长：448nm

5.3.2试样测定：吸取“5.2”项已纯化的溶液20ul依法操作，从标准曲线查得或回归求

得所含-胡萝卜素的量。

5.3.3标准曲线：分别进标准使用液20ul，进行HPLC分析，以峰面积对-胡萝卜素浓

度画标准曲线。

6结果计算

见式（1）。

VC1

X=--------1000------------………………（1）

m10001000

式中：X－试样中-胡萝卜素的含量，单位为克每千克或克每升（g/kg或g/l）；

V－定容后的体积，单位为毫升（mL）；

C－试样中-胡萝卜素的量（在标准曲线上查得），单位为微克每毫升（g/mL）；

m－试样的量，单位为克或毫升（g或mL）；

计算结果保留两位有效数字。

7精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

第二法纸层析法

8原理

试样经过皂化后，用石油醚提取食品中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开

剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分离，剪下含胡萝卜素

的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。

9试剂

9.1石油醚（沸程30℃～60℃）：同时是展开剂。

9.2氢氧化钾溶液（11）：取50g氢氧化钾溶于50mL水。

9.3无水乙醇：不得含有醛类物质。

9.3.1检验方法：

9.3.1.1银氨液：加浓氨水于5％硝酸银液中，直至氧化银沉淀溶解，加入2.5mol/L氢

氧化钠溶液数滴，如发生沉淀，再加浓氨水使之溶解。

9.3.1.2银镜反应：加2mL银氨液于试管内，加入几滴乙醇摇匀，加入少许2.5mol/L

氢氧化钠溶液加热。如乙醇中无醛，则没有银沉淀，否则有银镜反应。

9.3.2脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢氧化钠溶于温乙醇中，将两者倾

入1L乙醇中，暗处放置两天（不时摇动，促进反应），过滤，滤液倾入蒸馏瓶中蒸馏，弃

去初蒸的50mL。乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。

9.4无水硫酸钠

9.5-胡萝卜素标准溶液

9.5.1-胡萝卜素标准贮备液：准确称取50.0mg-胡萝卜素标准品，溶于100.0mL三氯

甲烷中，浓度约为500g/mL，准确测其浓度。标定浓度的方法如下：

取标准贮备液10.0L，加正己烷3.00mL，混匀。测其吸光度值，比色杯厚度为1cm

以正己烷为空白，入射光波长450nm，平行测定三份，取均值。

按式（1）计算溶液浓度：

A3.01

X=---------------………………………………（2）

E0.01

式中：X--胡萝卜素标准溶液浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；

A--吸光度值；

E--胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度1cm，溶液浓度为1mg/L

的吸光系数，为0.2638；

3.01

-------------测定过程中稀释倍数的换算。

0.01

9.5.2-胡萝卜素标准使用液：将已标定的标准液用石油醚准确稀释10倍，使每毫升溶

液相当于50g，避光保存于冰箱中。

警告：通常标准品不能全溶解于有机溶剂中，必要时应先将标准品皂化，再用有机溶

剂提取，用蒸馏水洗涤至中性后，浓缩定容，再进行标定。由于胡萝卜素很容易分解。所以

每次使用前，所用标准品均需标定，在测定试样时需带标准品同步操作。

10属马和属虎 仪器

10.1实验室常用设备

10.2玻璃层析缸。

10.3分光光度计。

10.4旋转蒸发器：具配套150mL球形瓶。

10.5恒温水爱屋及乌成语故事 浴锅。

10.6皂化回馏装置。

10.7点样器或微量注射器。

10.8滤纸：18cm30cm。定性，快速或中速。

11分析步骤（以下步骤需在避光条件下进行）

11.1试样预处理

11.1.1皂化

取适量试样，相当于原样1g～5g（含胡萝卜素约20g～80g）匀浆，粮食试样视其胡

萝卜素含量而定，植物油和高脂肪试样取样量不超过10g。置100mL带塞锥形瓶中，加脱醛

乙醇30mL，再加10mL（11）氢氧化钾溶液，回流加热30min，然后用冰水使之迅速冷却。

皂化后试样用石油醚提取，直至提取液无色为止，每次提取石油醚用量为1mL5～25mL。

11.1.2洗涤

将皂化后试样提取液用水洗涤至中性。将提取液通过盛有10g无水硫酸钠的小漏斗，漏入球

形瓶，用少量石油醚分数次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤液并入球形瓶内。

11.1.3浓缩与定容

将上述球形瓶内的提取液于旋转蒸发器上减压蒸发，水浴温度为60

℃，蒸发至约1mL时，取下球形瓶，用氮气吹干，立即加入2.00mL石油醚定容，备

层析用。

11.2纸层析

11.2.1点样：在18cm30cm滤纸下端距底边4cm处做一基线，在基线上取A、B、C、

D四点，吸取0.10mL0～0.400mL浓缩液（11.1.3）在AB和CD间迅速点样。

11.2.2展开：待纸上所点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，置于预先用石油醚饱

和的层析缸中，进行上行展开。

11.2.3洗脱：待胡萝卜素与其他色素完全分开后，取出滤纸，自然挥发干石油醚，将位

于展开剂前沿的胡萝卜素层析带剪下，立即放入盛有5mL石油醚的具塞试管中，用力振摇，

使胡萝卜素完全溶入试剂中。

11.3测定

用1cm比色杯，以石油醚调零点，于450nm波长下，测吸光度值。以其值从标准曲线

上查出-胡萝卜素的含量，供计算时使用。

11.4标准工作曲线绘制

取-胡萝卜素标准使用液（浓度为50g/mL）1.00、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00mL，

分别置于100mL具塞锥形瓶中，按试样分析步骤进行预处理和纸层析，点样体积为0.100mL，

标准曲线各点含量依次为2.5、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0g。为测定低含量试样，可在0至

2.5g间加做几点，以-胡萝卜素含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

12结果计算

试样中胡萝卜素含量按公式

（3）计算。

V2100

X=c-------------…………………………（3）

V1m

式中：X--试样中胡萝卜素的含量，以胡萝卜素计，单位为微克每百克（g/100g）；

c--在标准曲线上查得的胡萝卜素含量，单位为微克（g）；

V1--点样体积，单位为毫升（mL）；

V2--试样提取液浓缩后的定容体积，单位为毫升（mL）；

m--试样质量，单位为克（g）。

计算结果保留三位有效数字。

13精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

表2常见蔬菜中类胡萝卜素各组分含量(1)mg/kg

食物总胡萝卜素叶黄素玉米黄素隐黄质13-c--C-Ct--C9-c--C蕃茄红素

空心菜48.228.7950.2171.1430.0920.54815.6231.8340.000

菠菜40.917.2061.7530.0000.2941.20017.9542.5350.000

小白菜31.215.7950.0001.3870.1210.51811.6111.7190.000

韭菜30.416.3010.0000.9260.1200.51410.3332.2210.000

胡萝卜29.50.7390.0000.0000.6445.17922.6590.3040.000

菠菜29.110.3870.0001.2380.2511.07513.9892.1980.000

香菜27.116.8180.1371.1800.0440.3367.3831.2080.000

茴香24.812.5160.1031.6300.0770.3828.8121.2480.000

南瓜8.40.0890.0000.2420.2742.5004.1060.0431.127

白薯2.80.0000.0000.8470.0440.0731.8480.0350.000

本文来自:大众医药网

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—胡萝卜素和番茄红素的提取分离和测定

摘要：本文综述了从番茄酱中提取分离—胡萝卜素和番茄红素的原理及方法，并且介绍了—胡萝

卜素和番茄红素的理化性质、化学结构以及生理功能。同时就该实验做了一定的分析。

关键词：番茄红素，—胡萝卜素，分离

文献综述

选题的意义

多种研究表明：摄入富含类胡萝卜素的果蔬能降低人群某些癌症的发病率。番茄红素是人类血浆和

组织中重要的类胡萝卜素，是类胡萝b素中最有效的单线态氧淬灭儿童便秘吃什么最快排便 剂，在体内具有抗氧化、预防和抑制癌

症、抑制诱变、保护心血管、防治白内障、调节机体免疫力等功能。番茄红素的抗氧化作用包括猝灭单线

态氧、消除自由基以及与其它氧化剂协同抗氧化作用等。其猝灭单线态氧的能力最强，是目前抗氧化剂—

胡萝董力女朋友 卜素的2～3倍，维生素E的100倍，番茄红素可以通过猝灭单线态氧预防脂类过氧化反应，保护细胞

免受自由基的损伤。

国内外研究的现状

1、番茄红素的国内外研究历史

1873年，Hartn最早从TamuscommunisL.中分离得到深红色的番茄红素结晶。1875年，Millardat从

番茄中获得一种含有番茄红素的粗提物，当时命名为Solanorubin。1913年，Dugger根据它对生长条件的影

响，又把它命名为lycoperison。而Schunck（1930年）的“lycopene”名称（中文即番茄红素）一直沿用至

今。

1.1国外对番茄红素的研究现状

1989年，Masic发现番茄红素在所有类胡萝卜素中对单线态氧的猝灭速度最高；1991年，Campbell发

现肝癌患者的肝脏中番茄红素含量较低；1994年，Franceschi发现消化道癌的发生与番茄红素的摄入有关。

随后，对番茄红素的功能的研究成为一大热点。1995年～2003年与番茄红素有关的报道达800多篇，内容

涉及番茄红素的吸收、运输及新陈代谢的动力学；番茄红素与癌症、心脏病及其他多种疾病的关系；番茄

红素的提取、测定及番茄产品的开发研究等。

1.2国内对番茄红素的研究现状

对番茄红素的研究在2000年以前鲜有报道，近三年骤然升温，出现了大量综述类文章，内容包括：

番茄红素的性质和提取方法；番茄红素及其研究进展；番茄红素的保健功能的研究现状；番茄红素生理活

性的研究进展；番茄红素及其生产应用研究；番茄红素的生产工艺研究进展；番茄红素分离与分析的研究

进展等。

2类胡萝卜素提取分离的国内外研究进展

—胡萝卜素是类胡萝卜素之一，也是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定

的天然色素

自1831年Wachenroder从胡萝卜根中分离结出晶状碳水化合物类的色素并以“胡萝卜素”命名至

今，已有不少国内外学者对类胡萝卜素进行了研究。邓宇

等对番茄中番茄红素的提取进行了初步研究，认为用氯仿作提取溶剂、当料液质量比为1∶5,浸提时

间为7ｈ,浸提温度为35℃时,浸取效果最好。适当增加浸提次数及搅拌速度有利于提高番茄红素的提取量。

吉宏武等人以活化的硅镁型吸附剂与赛力特硅藻土(1:1)作填料,以已烷-丙酮-甲醇不同组成与比例的流动相

洗脱,柱温20℃为条件,采用混合溶剂提取和自动柱层析分离方法和正已烷-丙酮-乙醇-甲苯(10:7:6:7)与40%甲

醇氢氧化钾浸提皂化12h的制备方法,制备了4种类胡萝卜素——-胡萝卜素、叶黄质、堇黄质、新黄质。

类胡萝卜素在硅胶G薄层上分离时,由于不同类胡萝卜素的末端基团的不同,因此具有不同的色谱行为。彭

光华等人用薄层色普法对枸杞中的类胡萝卜素进行了分离获得了玉米黄素、-隐黄素和-胡萝卜素。胡晓

丹等人对金盏菊花类胡萝卜素的最佳提取工艺进行了研究，结果表明，用石油醚：丙酮（１：１、Ｖ／Ｖ）、

料液比为１：２５（ｇ／ｍｌ）、４５℃提取１小时，反复４次，效果最佳。从所报道的文献分析得出，

类胡萝卜素的提取多采用有机溶剂法。随着色谱法的发展，国外科技工作者开始采用HPLC技术来分析类

胡萝卜素，但是对其定量测定未做深入研究，分离制备方面的报道也较少。

实验仪器设备及试剂

1、试剂及原料

亨氏番茄酱、95%乙醇（C.P）、二氯甲烷（C.P）、石油醚（60-90℃）、氯仿（A.R）、中性氧化

铝（C.P）、氯化钠（C.P）、无水硫酸钠（C.P）、苏丹红Ⅰ（C.P）

2、仪器

回流装置、恒温磁力搅拌器、层析柱(15cm左右内径为1-1.2cm)、分析天平,移液管、容量瓶、VIS-7220

分光光度计

研究的方法

实验原理:

番茄红素结构化学式如下：

-胡萝卜素结构化学式如下：

类胡萝卜素为多烯类色素，不溶于水而溶于脂溶性有机溶剂。本实验先用较高极性的溶剂提取较

高极性的色素，同时脱去样品中的存在的少量水分；再用较低极性的溶剂补充提取较低极性的色素。因为

低极性溶剂不与水混溶，故先除去水分后才能有效地从组织中较完全地萃取类胡萝卜素。根据番茄红素与

-胡萝卜素极性的差别，用柱层析可以将它们分离。

番茄红素在不同的有机溶剂里均有类似的吸收峰,最大吸收峰的波长在500nm附近，将分离后的样

品溶解在适当的溶剂中,在最大吸收峰处用分光光度计测定溶液的吸光度；由于番茄红素标样的不稳定性，

在此以苏丹红代替番茄红素作为标准品，用氯仿作为溶剂及参比液，在500nm附近测定苏丹红的系列吸光

度，绘制标准曲线；用番茄红素的提取液的吸光度值在此标准曲线上查取相应浓度，以此来表征番茄红素

的浓度。通过换算得到番茄酱中该色素的含量。

-胡萝卜素的含量采用色价的测定及计算方法。色价是色素在商业上的浓度计量方式，特点是不需

要校准样，也不需作标准曲线，简单快速。取样品m克，在天平上准确称重，用Vml石油醚溶解，以石油

醚作参比液，在max下测量样品溶液的吸光度A，样品色价E按下式计算：

试验方法：

1、混合色素的提取

称取新鲜番茄浆[1]10g于50ml干燥的圆底烧瓶中，加极性的试剂(建议用95%乙醇)［A］20ml，摇

匀，装上回流冷凝管及恒温磁力搅拌器，在相应温度的水浴中加热，回流5分钟，冷却后抽滤，滤液直接

进入一个的50ml锥形瓶中。残渣转入原50ml圆底烧瓶中瓶内，加入15ml低极性溶剂(建议用二氯甲烷)［A］，

在相应温度的水浴上回流5分钟，冷却，混合物常压过滤，滤液直接滤入以上50ml锥形瓶中，再加5ml低

极性溶剂洗涤残渣，过滤。合并高极性提取液和两次低极性提取液，倒入100ml分液漏斗中，加4ml饱和

氯化钠溶液[2]，振荡萃取，静置分层。分出较深色有机相后，使其流经一个在颈部装有疏松棉花且在棉花

上铺有6g无水硫酸钠的漏斗，以除去其中的微量水份。再用5ml低极性溶剂洗涤干燥剂，合并干燥后所得

的溶液于一干燥的50ml圆底烧瓶中。水浴蒸馏溶液，蒸出大部分溶剂后，在通风橱内直接水浴加热圆底

烧瓶[3]，并用洗耳球不断向圆底烧瓶吹气,直到完全蒸干为止备用。

2、层析柱的制备

取一支长15cm左右内径为1-1.2cm的干燥的层析柱，将其垂直固定于铁架上，底部铺上少量棉花，

打开活塞。称取8g氧化铝小心倾入层析柱中，在氧化铝上铺一层棉花[4]。然后向柱内加入15ml石油醚，

让溶剂浸润并流过层析柱，注意柱顶部溶剂不能干涸。待溶剂液面刚好与氧化铝表面相切时，关闭活塞，

备用。

3、柱层析分离

向蒸干的粗样品中加入2ml苯使其溶解。用一长颈滴管取样，小心滴入层析柱内，注意产品不能接

触柱壁[5]。打开活塞，让溶液自然流下，待液面刚好与柱顶氧化铝表面相切时，加入2ml石油醚，用50ml

干燥的锥形瓶[6]接收滴出的溶液。待溶剂液面与氧化铝表面相切时，再加入8ml或更多的石油醚，至滴出

的溶液无色，关闭活塞，收集红色的番茄红素溶液(a)；打开活塞，再往层析柱中先后加入2ml及8ml的氯

仿，洗至滴出的溶液无色，用另一50ml干燥的锥形瓶[6]接收，关闭活塞，收集黄色的-胡萝卜素溶液（b）。

然后用相应温度的水浴蒸干(a)、(b)，差重法分别称出相应浓缩物的重量Wa、Wb(精确到0.0002)。

4、苏丹红(Ⅱ)工作曲线

用分析天平准确称取约5.0mg苏丹红(Ⅱ)于小烧杯中，加入少量溶剂(建议用氯仿)［B］在通风橱内

水浴加热搅拌溶解，待溶液冷却至室温后全部转移到100ml的容量瓶中，用溶剂(建议用氯仿)稀释定容至刻

度线，可得到50g/ml的标准液。然后用10ml的移液管分别移取该溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml于五个

25ml的容量瓶中，然后加入溶剂将其稀释定容至刻度，它们浓度分别为4g/ml、8g/ml、12g/ml、16g/ml、

20g/ml。用该溶剂作参比溶液，在波长为510nm下分别测其吸光度，以吸光度对浓度作图，可得到吸光度

对浓度的标准工作曲线图及关系式。

5、番茄红素及-胡萝卜素含量的测定［D］

5.1、番茄红素含量的测定及百分含量的计算

往蒸干（a）所得的浓缩物中加入5ml的氯仿溶解，此溶液的浓度为C1；用1ml移液管移取0.5ml该

溶液于25ml锥形瓶中，用定量的氯仿分步稀释该溶液，使溶液的颜色与吸光度为0.5左右的苏丹红(Ⅱ)溶

液的颜色接近，此时溶液的浓度为C2［7］。在400-600nm区间测定番茄红素最大吸收波长max，在此max

下测其吸光度［C］。将该吸光度值代入标准工作曲线，求出其浓度C2，从而推算出番茄酱中番茄红素的

含量。

其中：f是C1稀释到C2倍数；各值的单位：C2：g/ml;W番茄酱：g.

5.2、-胡萝卜素含量的测定及色价的计算［D］

用5ml石油醚作溶剂溶解(b)的浓缩物，取出１ml，再用石油醚稀释3-5倍，使其吸光度值落在0.3-0.7

的范围内。然后以石油醚作参比溶液,在480nm测其吸光度。由色价公式算出稀释后的浓缩物中-胡萝卜素

的色价，从而推算出样品番茄酱中-胡萝卜素的色价。

色价计算公式：

E：稀释后浓缩物的色价、A：吸光度、V：稀释浓缩物所用石油醚的总体积(ml)、m：浓缩物（b）

的质量Wb(g)

番茄酱中-胡萝卜素的色价计算公式：

m稀释后浓缩物E稀释后浓缩物=m番茄酱E番茄酱

预期结果：

番茄红素的最大吸收波长：484~500nm

-胡萝卜素的最大吸收波长:480nm

实验创新之处：本次实验中使用了苏丹红(Ⅱ)的原因：1、番茄红素不稳定，不易提取。2、降低实验

成本。

参考文献

1、苏永恒,蒋惠然,李发生.番茄红素测定方法的研究进展.中国卫生检验杂志,2004,14(6)

2、余孔捷,杨方,卢声.分光光度法测定红辣椒及其产品中苏丹红Ⅰ.中国卫生检验杂志,2004,14(5)

4、隋晓.辣椒红色素晶体制备技术的研究.精细化工，1999,16(4)

5、孙庆杰,丁霄霖.番茄红素稳定性的初步研究.多功能精密恒温仪,第24卷第2期

6、凌关庭,唐述潮,陶民强.食品添加剂手册.1997年2月第2版

7、蔡俊,邱雁临,谈小兰,夏服宝,段新斌.番茄红素提取工艺的研究.食品与发酵工业,26(2)

8、惠军,韩彬,单艳丽,惠寿年.番茄红素提取工艺及其稳定性初步研究.新疆农业科学,2004,41(4):204～207

9、毛跟年，许牡丹主编.功能食品生理特性与检测技术.化学工业出版社,2005

10、唐传核编著.植物功能性食品.化学工业出版社,2004

11、番茄红素研究现状与展望.检验检疫科学,2004,14(2)

12、张连富，丁霄霖.番茄红素及其生产应用研究.食品与机械,1998（6）:14～16

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