StraitPhamucepticaiJonmaOVol33No52001
•中药与天然药物•
麸炒枳壳配方颗粒的HPLC指纹图谱研究
姚娜42,黄燕明4李雪银4陈桂生4汪静4康志英1(1.广州市香雪制药股份有限公司,广东广州510663;
2.宁夏隆德县六盘山中药资源开发有限公司,宁夏固原756300)
摘要:目的建立麸炒枳壳配方颗粒的指纹图谱,对共有峰进行指认,为其质量控制提供参考。方法采用HPLC法
,以WatexSymmetm-C4
色谱柱
,甲醇762%甲酸为流动相,流速为1.2mL■mip-1进行梯度洗脱,检测波长为336cm;采用液质联用技术(LC-MS)获得特征峰的分子量
和分子离子碎片,结合对照品和文献比对等方法进行共有峰结构指认。结果10批麸炒枳壳配方颗粒的指纹图谱均呈现15个共有峰,采用
UPLCQ-POF-MS/MS联用技术对15个共有峰进行了指认,分别为新圣草苷、
芸香柚皮苷
、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橘皮内酯、枸橘苷、马
尔敏、橘皮内酯、川陈皮素、
异橘皮内酯、/,5,6,7,5,3,,41七甲氧基黄酮、
橘皮素。结论建立的麸炒枳壳配方颗粒HPLC指纹图谱,方法简便、
重现性好,可用于麸炒枳壳配方颗粒的产业化生产的质量控制。
关键词:麸炒枳壳;配方颗粒;指纹图谱;液质联用
中图分类号:R254文献标识码:A文章编号:1202-3725(2601)-65-6627-62
StudyonFingerprintofBranAurantiiFmctusDisperisingGranules
YAONa42,HUANGYan-ming1,LIXue-yin1,CHENGui-dheng1,WANGJing1,KANGZhi-ying1
(.,Guangzhou510663,ChCa;2.
LongdeLiuPanShanChC
.,Guyuan776360,Chtna)
ABSTRACT:OBJECTIVEToestaniisSafingeruXctforthempikdetexninationofBranAurantiikmctusformula
grannies,STheassaywaspeXoxnePonC4columnwiththe
moPPa
pPasaconsistingofmethacol-9.4%aceticacikingraniectmonaataflowrateof1.4mL•min_ection
wavelengthofDADwas
ecclar
weightantmolecclarionfragmentsofcUaractexsticpeanswemoPi
taicehbpusingliquik-masscombinationtecCniqua,antthecUaractexsticpeanstmctumwasikeutifiehbpmeansof
compaxsopofrefereucemd/SThefmgypXctconsis/hof13commonpnks,dnt11
ofthemwereikeutifieh;whichwereceoexocitRn;narimtin;7X1170;hypyidin;—0X1-100;meranzinhyprata,
ponciPn,meranzin,in,3,5,6,7,5,3',4’SIONThe
methoPdisplaysgoopsimpla,staniPtaantrexeataniPtawhicCissyitaUlaforthequdlityevaluatiop
ofBranAurantii
hoPhasgoopreheatanilityantstanilite,whicCcanbau/forthequalitycopr
trotoftheintust/alizehproPuctionoftheBranAurantiiFmctusfomiula
grannies.
KEYWORDS:BranAurantiiFructus;Dispexsing
gxnPes;Fin7emX7RLC-MS
麸炒枳壳为枳壳饮片经炮制加工制成
。枳壳为芸香科植
物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种的干燥未成熟果实。
7月果皮尚绿时采收,自中部横切为两半,晒干或低温干燥。
枳壳有理气宽中,行滞消胀的功效,临床上用于胸胁气滞,胀
满疼痛,食积不化,痰饮内停,脏器下垂t1•5]。生品药性峻烈,
作者简介:姚娜,女(1999-)。学历:硕士。职称:中级药师
。研究
方向:中药制剂与分析。
基金项目宁夏回族自治区重点研发计划项目(项目编号:
2617BY677)
经麸炒后可缓和其药性,偏于理气健胃消食,用于宿食停滞,
呃逆暧气,风疹瘙痒〔〕。现代研究表明,麸炒枳壳水煎液对
兔离体肠管、兔离体子宫及小白鼠胃肠运动作用强度均较生
品减弱,从而减缓生品对肠道平滑肌的刺激作用t4•5
]。枳壳
主要含有橙皮苷、新橙皮苷
、柚皮苷等黄酮类成分、少量的生
物碱和挥发油类。经炮制后,挥发油、柚皮苷、橙皮苷、新
橙皮苷等含量均降低。本研究选用不同产地的16批麸炒枳
壳饮片制成配方颗粒,采用HPLC法建立其指纹图谱,并采用
液质联用技术(LC-MS)对18个共有峰进行指认,
为麸炒枳壳
配方颗粒的质量评价提供参考。
-07•
海峡药学2001年第33卷第5期
1
仪器与试药
11仪器Agilent
1264高效液相色谱仪(安捷伦);怎样脱毛 BS124S
万分之一电子分析天平(德国SARTORIFS公司
);BT25S十
万分之一分析天平(德国SARTORIUS公司);KQ500DE数控
超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司
);AgPect1090型超
高效液相色谱(UPLC),连接6534型四级杆-飞行时间串联质
谱仪(Q-POF-MS),配有两个独立二元泵、可控温自动进样器、
可控温柱温箱
、二极管阵列检测器(DAD)和电喷雾离子源
(ESF)。
1.2试药枳壳对照药材(批号:110722-201613),购自中国
食品药品检定研究院;柚皮苷对照品(批号:110722-201312,
纯度:94.7%)
,购自中国食品药品检定研究院;新橙皮苷对照
品(批号:111857-201102,纯度:99.6%)购自中国食品药品检
定研究院;芸香柚皮苷对照品(批号:A0132,纯度:99.20%),
购自成都斯特生物科技有限公司。川陈皮素对照品(批号:
160145,纯度&98%、,购自成都普菲德生物技术有限公司。
橘皮素对照品(批号:151021纯度95%,购自成都普菲德
生物技术有限公司。3,5,6,7,8,3,4,七甲氧基黄酮对照品
(批号:20150423,纯度:98%),购自宝鸡市辰光生物科技有限
公司。
甲醇(天津赛孚瑞公司,色谱级);甲酸(天津市光复精细
化工厂,分析纯
);甲醇(
北京化工厂,分析纯);水为娃哈哈纯
净水。
1.3样品
共收集2批枳壳饮片,其中湖南衡阳5批,湖南
沅江4批,湖南益阳2批,江西新干5批;包含了枳壳药材的
道地产区和主产区。样品经广州市香雪制药股份有限公司高
级工程师康志英鉴定为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.
及其栽培变种的干燥未成熟果实。参照2615年版《中国药
典》麸炒枳壳炮制方法将10批枳壳饮片炮制成麸炒枳壳饮
片
。由本实验室根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技
术要求(征求意见稿)》,研究麸炒枳壳配方颗粒的制备工艺,
并按照确定的制备工艺制成10批中试批量的麸炒枳壳配方
颗粒。
2方法与结果
2.1麸炒枳壳配方颗粒指纹图谱的建立
0.7.7色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅
胶为填充剂,以甲醇为流动相A,以0.2%甲酸溶液为流动相
B按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为336nm。
表1
时间(min-
流动相A(%)
流动相B(%)
6〜2526T615—59
25〜4541t4459—55
46-8644—9559—5
2.1.2参照物溶液的制备:取枳壳对照药材0.5g,精密称
定,置圆底烧瓶中,加水34mL,煎煮34min,滤过,
滤液置蒸
发皿中,蒸干,残渣加甲醇适量,超声处理(功率250W,
频率
•28•
44kHz)使溶解,转移至25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇
匀,滤过
,
取续滤液,作为对照药材参照物溶液。另取柚皮苷
对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含0.8mg的对照
品溶液,作为对照品参照物溶液。
27.8供试品溶液的制备:取麸炒枳壳配方颗粒,
混匀,研
细,取约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇55
mL,密塞
,
称定重量,超声处理(功率650W,频率44kHz)34
may取岀
,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,徐志摩的爱情 摇匀,
滤过,即得。
232
指纹图谱方法学考察
2.0.7精密度试验:取麸炒枳壳配方颗粒样品按供试品溶液
的方法制备,
按色谱条件测定
,连续进样6次,次14mL。结
果各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3%,表
明精密度良好。
2.2.2重复性试验:取同一批麸炒枳壳配方颗粒样品,平行
6份,
依法制备,测定
。结果各共有峰相对保留时间和相对峰
面积RSD均小于3%,表明重复性良好。
228稳定性试验:取同一份供试品溶液,按色谱条件,分别
在0、2、4、6、8、12、24、48h进样分析
。
结果各共有峰相对保留
时间和相对峰面积RSD均小于3%,表明供试品溶液在45h
内稳定性良好。
2.3指纹图谱的构建取2批麸炒枳壳配方颗粒
,按供试
品溶液制备方法和色谱条件测定,得到10批麸炒枳壳配方颗
粒的色谱叠加图(见图1)。根据相对保留时间稳定及各批次
样品均能检岀的原则,
选择了2个特征峰作为共有峰。采用
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(20127版)》进行评价,
结果相似度均大于0.90。
S101520
25303S40
75
8时胃[min]
图110批麸炒枳壳配方颗粒HPLC叠加图
2.4共有峰的指认通过质谱检测对麸炒枳壳配方颗粒指
纹图谱中的共有峰进行指认。
20.7供试品溶液的制备:同4.1.8项下方法制备供试品溶
液。
4.0.
2色谱条件:
采用AgilentEclip
PlusC15UPLC色谱柱
(
2.7x150mm,1.8Mm),配有在线过滤器。流动相:A为
0.7%甲酸水,B为乙腈
。梯度洗脱程序:/~8min(20~41%
B)
,8~13mic(41~44%B),13~25min(44~95%B)
,75-
26min(95-100%),26~30min(140%),后运行时间14
Strait
PhamiaceaticgtJoumatVol33No52021
min。柱温40t,流速0.3
mL•miu"1o检测波长330nm,每
次进样3pL。
0.4.3质谱条件:分别在正、负离子模式下进行
,干燥气温度
350t,干燥气流速10L•miu"1,雾化气压力30pi,毛细管
电压3500V(
正模式)和3000V(负模式、
,碰撞电压154V。
一级质谱选用MS3模式,质量扫描范围54
~1500io。
二级
质谱选用Taraet-MS/MS模式
,碰撞电压20和44eV。所得
LC-MS数据由AgilentMassHuator软件采集。
6.0.0质谱分析:精密吸取麸炒枳壳配方颗粒供试品溶液注
入LC-MS仪,按上述条件进行检测,根据麸炒枳壳配方颗粒
供试液的UPLC0UV色谱图和UPLC0T0F0MS总离子流图(正、
负模式
)(见图2)。结合各色谱峰的一级(正、负模式
)、二级
(选用一种合适的电离模式、质谱信息,确定共有峰的结构
(见表2)。图中标识的303号色谱峰物质,均得到了良好的
分离和检测
。
11
2
13
12k
35
nII6
IIIII
78916
响应vs.采
集时间(min)
UPLC-UV色谱图
(330nm)
UPLC-MS总离子流图
(正模式)
UPLC-MS总离子流图
(负模式)
图2麸炒枳壳配方颗粒UPLC-AV色谱图和UPLCA0F-MS
总离子流图
表2麸炒枳壳配方颗粒UPLC-QA0F-MS分析
峰号化合物名称
一级正模式下一级负模式下
加合离子1。,
加合离子1。/,分子式
质量测定误差ppm质量测定误差ppm
二级正或负模式下
特征碎片离子1。
结构式
597.1798〔M+H〕+
2.68;595.1654〔M-H〕-,
新圣草苷pm
610.1610
2542
CH0
(NeoeUociPia)〔M+Na〕+,2.55
651/^〔皿+①〕-,
64丄丄3255
635.1369〔M+K〕
+,
197
0560
595.1635〔M-H〕-
459.1118
〔MOHCHg02〕-
287.2545
〔M-H-Rhv-Gic〕-
1310232
〔M-H-Ahv-Gic-
C8H806]-
OH
芸香柚皮苷。。4
(Nariatin)
5811852〔M+H〕+
2521
665.1086
〔M+Na〕+,6.71
579.1718〔M-H〕-,
6.22
625.1775
〔M+HC00〕-,6.17
613.1462〔M+Ct〕-
,
2.12
C27H320i4
57951690
M0H〕-
45951129
〔M-H-CH0〕-
27150593
[
M-H-Ahv-Gic]-
15150034
〔M-H-Ahv-Gic-
CH0〕-0H
5811862[M+H]+,
0549
576.1765〔M-H〕-,
柚皮uo,696160351676
2546
C67H3201
(Narinoia)〔M+Na〕+,157
613.1484〔M+Ct〕-
,
610.1418〔M+K〕
+,
6.91
0534
5795162〔M0H〕-
4595112
〔M0H0CH0〕-
27150597
[M-H-Ahv-Gic]-
15150033
〔M-H-Ahv-Gic-
CH0〕-
橙皮苷bm〕
(
Hesperiain
)
6111966〔M+H〕+,
124
635.1808
〔M+Na〕+,2.86
649.1495〔M+K〕
+,
236
669.1822〔M-H〕-,
35。2皿4*09
645.1587〔M+Ct〕-,273
0573
60951799
M0H〕-
4
95133
〔M0H0CH0〕-
30150699
fM-H-Ahv-Gic]-
15150034
〔M-H-Ahv-Gic-
C9H150
6]-
1
2
3
4
・20•
海峡药学2001年第33卷第5期
续表0
峰号
化合物名称
一级正模式下
加合离子iz,
质量测定误差ppm
一级负模式下
加合离子iz/,
质量测定误差ppm
分子式
二级正或负模式下
特征碎片离子iz
结构式
669.1769〔M-H〕-
611.1956〔M+H〕+,
432.1356h、
0.57
669.1520〔M-H〕
-,〔M-H-C%O〕-
5
新橙皮hhi7•10]
633.1755
6.05
C28
H34O
15
361.0299
(
NeoPespeCdig)〔M+Na〕+,7.75
645.1557〔M+Ci〕-,〔M-H-Rha-Gic〕-QWmhHO*
+,
6.75
31.9631
1.59〔M-H-Rha-Gici
C9H17O2〕-
HO
296.1459
221.1157OH
水合橘皮
〔M+NH〕+18
〔M+HRHO〕+十
6
内酯C12^18]
361.7641077.106〔M-H〕
-,
C17
H19O5
03.1210r^OH
(Meranzin〔M+Na〕+,1.80
1.63〔M+HRHO〕+
hypratc-
079.1236〔M+H〕+,
189.6506XXj
1.75〔M+HRH2O-C4H6〕+
593.1551〔M2〕-
595.
2603〔M+H〕+,
239.1203
473.1412
6.24
〔M+HCOO〕-12〔M-H-C%O〕-
7
枸橘苷〔i2〕617.1847593.882〔M-H〕-,
C28
H34O14
255.6742
(Poncirin)〔M+Na〕+,7.371.64〔M-H-Rha-Gic〕-Ytw
hoA/phOHO633.1570〔M+K〕
+,629.1645〔M+Ci〕-,151.0633
1.296.39〔M-H-Rha-Gic-OH
CHO〕-
243.1203
261.1114〔M+H〕+,
〔M+HRHO〕+
橘皮内酯TP3〕
2453
2536235
189.6537Vo
5
(Meranzic/Isome
〔M+Na〕+,0.06
无响应C17
H16O4〔M+H-H2O-C4H6〕+C>=<0
ranzin-
'
O78.3386
151.6493
〔M+NH4〕+,7.31
〔M+HRHO-
C6H8O4]+
355.1565377.1599
35541513
〔M+Na〕+,0.24
〔M+HCOO〕
-,0.55
〔M+Nn〕+
v,oWo
9
马尔敏[12•16)
(Maunin-
333.1692〔M+H〕+,
1.37
377.1367〔M+Ci〕-,
0.92
C19H24O5
337.1420
〔M+Na-HO〕+
371.1245〔M+K〕
+,331.1553〔M-H〕-,
185.6220OH
0.796.91〔M+Na-C]()H]7O6〕+
243.1237
261.1115〔M+H〕+,〔M+HRHO〕+丫
异橘皮内酯t1-518,
0.04
2754356
189.6539
12
(Meranzin/Nome
ranzin-
〔M+NH4〕+,7.51
无响应
C17H17O4〔M+H-H2O-C4H6〕+
151.2491
253.6939
〔M+Na〕+,6.64
〔M+HRHO-
C6H8O4]+
UM
493.1577
〔M+H〕+
493.1377〔M+H〕+,
88.1143
—O0
WO
11
川陈皮素〔2P4〕
(NoPile/n)
0.66
425.1463
无响应
C41H
22O5
〔M+H—H〕+
73.6911
〔M+Na〕+92〔M+HbCH〕+_0y
58.
7667
G
〔M+HRCH〕+
・36•
StraitPhannaceaticgtJoumatVol33Nog2021
续表2
峰号化合物名称
一级正模式下一级负模式下
加合离子1。,
加合离子1。/,
分子式
质量测定误差ppm质量测定误差ppm
二级正或负模式下
特征碎片离子1。
结构式
12
3,5,6,7,8,3,,
4'-七甲氧基
黄酮〔616〕
(30,a/,c,oy,
4'-Oep/mthoxy
Uavo5o)
435.145〔M+H〕+
194
455.1364
〔M+Na〕+,188
无响应C22H24。9
435.1487〔M+H〕
418.1466
〔M+HAH3〕+
465.1377
〔M+HOCH3〕+
38.1145
〔M+HOCH3〕+
75.9911
〔M+HOCH3〕+
4橘皮素up。〕
(Tanoeretia
)
37351271〔M+H〕
2590
395.1126〔M+Na〕
1
84关于石榴的资料
无响应C26H2004
37351279
〔M+H〕+
358.1045
〔M+H-CH3〕+
45.9812
〔M+HOCH〕+
328.6577
〔M+HOCH3〕+
13.9859
〔M+H02CH30C0〕
/
通过质谱检测结果结合参考文献比对分析,共指认岀13
个色谱峰的化学结构
。其中9个成分(芸香柚皮苷、柚皮苷、
新橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,6,8,3',4--七甲氧基黄酮、橘皮
素、与对照品比对,结果与质谱结果一致。
0.4.5对照图谱的建立2见图3)。
图5麸炒枳壳配方颗粒对照指纹图谱
峰1:新圣草苷峰;2
:芸香柚皮苷;峰5(S)
:柚皮苷;峰4:橙皮
苷;峰5:新橙皮苷;峰6:水合橘皮内酯;峰7-枸橘苷;峰&橘皮
内酯;峰9:马尔敏;峰11:川陈皮素;峰12:
3,
5,6,7,8,3',4'-七
甲氧基黄酮;峰13
:橘皮素
3讨论
指纹图谱方法摸索过程中,笔者对比聚四氟乙烯膜与尼
龙膜过滤供试品溶液对指纹图谱的影响。结果显示,二者所
得指纹图谱峰的个数相当,响应值适中,证明两种材质滤膜对
指纹图谱无影响。
考虑到指纹图谱多成分、整体质量控制,选择枳壳对照药
材作为随行对照,为与颗粒提取工艺保持基本一致,将枳壳对
照药材进行水煎煮。结果对照药材与颗粒色谱峰基本一致,
故选择枳壳对照药材作为麸炒枳壳配方颗粒指纹图谱的参照
物。
本文采用HPLC建立麸炒枳壳配方颗粒指纹图谱,
对其
相似度进行评估,采用UPLC-QA0F-MS分析技术指认了13
个共有峰,分别为新圣草苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新
橙皮苷、水合橘皮内酯、枸橘苷、马尔敏、
橘皮内酯、川陈皮素、
异橘皮内酯
、3,5,6,7,8,3-4-七甲氧基黄酮、橘皮素,为麸炒
枳壳配方颗粒的物质基础研究提供科学依据。
参考文献
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中国药典(一部)〔S〕北京:中国医药科技
出版社,4013:165.好词好句大全摘抄
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・31•
海峡药学2021年第33卷第5期
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:AComponud
DeUveh
fromChaihu-9huaa7-9auDisplaysAntidepressact
Poteutiai
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of
Polymethoxylateh
Flavonoids
iothePeeis
ofChineWilO
Mantario(Citmsret/clata
Blaccc)bpUPLC-Q-TOF-MS/MS〔J〕.FxPAnalyticaiMethoPs,
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,黄燕明,李雪银,等.HPLC同步测定麸炒枳壳配方颗粒特
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2619,21(11):1569R570.
高效液相色谱技术在金银花指纹图谱研究方面的进展
刘玉梅4张家俊4刘满超2,冉斐〔,周孟1(1.铜仁职业技术学院国家民委中兽药重点开放实验室,贵州铜
仁554300;2.贵州健康职业学院健康管理系,贵州铜仁556300)
摘要:金银花是我国中药材产业中常见的原料药材且在中成药中有大量的使用,而金银花由于分布广泛加上种植品种繁多,所以对其制定科学
可靠的质量标准就显得意义重大。高效液相色谱法在中药质量控制、中药指纹图谱中的应用越来越广泛成熟,本文就近十年来高效液相色谱技
术在金银花质量控制方面的研究做一归纳总结,为后续深入金银花质量控制研究做一定的指导。
关键词:金银花;高效液相色谱;指纹图谱;质量控制
中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1206-3765(2401)-95-9630-94
RearchPregressinHighPerformaneeLiquidChrematogrephyFingee
printsofLoniceraeJaponicaFlos
LIUYu-met1,ZHANGJiv-jun1,LIUMan-dhao2,RANFeC,ZHOUMeng1(nLaboretoiofChC
neVeterinaeMedicineofStataEtan古代房事 icAffairsCommission,Tong蟹黄豆腐汤 renPolyechnicCollege,Tongren
554300,ChCa;mentofheaiamanagement,GuizhouHealtaVocativnalCollege,Tongren559300,
China)
ABSTRACT:LoniceryaJaponiccFlosisacommonrawmateUaIinChineherUalmePicicain/ustuantiswiPCy
aitiswiPCydistrikutxSantplantehindifferentplaces,itisimpoUacttoc-
taklisPsciextiPcandre/tUPLC
tecC7omaeinthequality
controlantfingemUntsoftrakiPonaIChinemehicica(TCM)iswiPCyuh
per
revieweh
the
rearccpropressinHPLCantUPLCfinge/^rintsofLoniceraaJaponiccFlosinrecentyeau,andaimehtopro
videsomaauikdccefor
furtherstuUyonqualitycontrolofLoniceraaJaponiccFlos.
KEYWORDS:LoxiceraeJapoxicaFmate20尺寸 los;HighpeXormagccliquiOccroma/araphy;Fingerurints;Qualitycoxtroi
作者简介:刘玉梅,女(1981-)。职称:教授。研究方向:
中药质量控制
、天然产物开发与应用。
基金项目:贵州省高层次创新型人才培养(千层次创新型人才)铜仁市培养计划项目:2617R2614
)
E63号;铜仁市科技局科技计划项目:铜市科
研(2619)112号。
・32•
本文发布于:2023-03-24 22:53:45,感谢您对本站的认可!
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