组织蛋白

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蛋白提取实验步骤

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蛋白提取实验步骤：

1、细胞总蛋白提取

A、对于悬浮细胞:离心收集细胞，每106细胞加250ulRIPA（在使用

前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。如果需要提高蛋白浓度，可以适当减

少细胞总蛋白提取试剂体积。

B、对于贴壁细胞:

a、用TBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻无烟校园 底吸干残留液。

b、建设银行个人网银 加入适当体积的RIPA（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、

瓶内3-5分钟。期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下质保期承诺函 ，收集到1.5ml离心管中。

C、冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

D、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

2、组织蛋白提取：梦见死去的人还活着

A、组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入

10倍组织体积本试剂（使用前数分售前客服工作内容 钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。如

果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。

B、将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。冰浴30min，期间用移液器反

复吹打，确保细胞完全裂解。

C、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

注意事项

1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80℃冰箱，

并避免反复冻融。

2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。

3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶

抑制剂。

4、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200l）反复吹打，或再加

入适量裂解液以保证充分裂解。

5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶个人网名 依旧有活性）可在-80℃短时间保存，建议

立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20℃保存，避免反金子旁的字 复精品佳作，安心下载，

放心使用

冻融。

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