草内

山地农业生物学报２９（５）：４６１～４６５，２０１０

Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ

烟田杂草内生真菌的分离鉴定及

生物学特性的初步研究术

张秀伟，桑维钧 ，谢鑫，王莉爽，桂泽文

（贵州大学贵州山地农业病虫害重点实验室，贵州贵阳５５００２５）

・研究简报・

摘要：从烟田杂草中分离筛选出对烟草病原真茵具有拮抗作用的内生真菌，通过对峙试验，对筛选出的拮抗作

用较强的４种内生真茵进行了鉴定和生物学特性研究，确定了不同内生真菌生长的最适培养基、碳源、温度和ｐＨ

值，为更好地利用它们提供了最佳的培养条件。

关键词：烟田杂草；内生真菌；生物学特性

中图分类号：￥４７６＋．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８—０４５７｛２０１０｝０５—０４６１—０５

Ｔｈｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃ￣ｒｉｚａｆｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ Ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ Ｗｅｅｄｓ ｉｎ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｆｉｅｌｄ

ＺＨＡＮＧ Ｘｉｕ—ｗｅｉ，ＳＡＮＧ Ｗｅｉ－ｊｕｎ ，ＸＩＥ Ｘｉｎ，ＷＡＮＧ Ｌｉ－ｓｈｕａｎｇ，ＧＵＩ Ｚｅ—ＷｅＦｔ（Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒ

Ｐｌａｎｔ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆＭｏｕｎｔａｉｎｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎ，Ｇｕ￣ｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｇｕｉｚｈｏｕ ５５００２５，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｅ ｆｕｎｇｉ，ｗｈｉｃｈ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ，ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ

ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｗｅｅｄｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｆｉｅｌｄｓ．Ｂｙ ｃｏｎｆｒｏｎｔａｔｉｏｎ ｔｅｓｔｓ，ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｏｕｒ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ

，

ｗｈｉｃｈ ｓｈｏｗｅｄ

ｓ￣ｏｎｇ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ，ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ

ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ，ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ

，

ａｎｄ ｐＨ ｖａｌｕｅ ｅｔｃ．ｗｅｒｅ ｆｕｒ－

ｔｈｅｒ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｗｅｅｄｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｆｉｅｌｄｓ；Ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ

从植物内生真菌中寻找杀虫、抗菌天然农用活性物质为植物病虫害的生物防治拓宽了思路并提供了

另一个广阔的研究领域。目前，经调查含有内生菌的植物大约有数百种，且从中发现了许多拮抗作用强的

内生真菌，故从中筛选抗菌活性物质具有更大的优势和几率…。

烟田杂草种类繁多，生命力极强。在烟草病害大面积发生时，杂草仍能健康生长。本文从４种常见的

烟田杂草中分离得到４株对烟草赤星病菌Ａｌ￣ｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ（Ｆｒｉｅｓ）Ｋｅｉｓｓｌｅｒ、烟草根黑腐病菌Ｔｈｉｅｌａｖｉｏｐｓｉｓ

ｂａｓｉｃｏｌａ（Ｂｒｅｋ．ｅｔ Ｂｒ．）及尖孢镰刀菌Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ（Ｓｃｈｌｅｃｈｔ）ｆ．ｓｐ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ（Ｊｏｈｎｓ．）Ｓｎｙｄｅｒ ｅｔ

Ｈａｎｓｅｎ均有较强拮抗作用的内生真菌，并对４种内生真菌的生物学特性进行试验，为能更深入地研究它们

奠定一定的基础。

１材料和方法

１．１材料

烟田杂草小飞蓬Ｃｏｎｙｚａ ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｃｒｏｎｑ、野菊Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ Ｌ．、辣子草Ｇａｌｉｎｓｏｇａ ｐ口 ．

收稿日期：２０１０—０５—１３；修回日期：２０１０—０７—０８

基金项目：贵州大学研究生创新基金（２００９００９）

作者简介：张秀伟（１９８０一），女，河北保定人，硕士研究生。研究方向：真菌学及植物真菌病害。

通讯作者：桑维钧，男，教授，硕士生导师。研究方向：真菌学及植物真菌病害。Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｊ＝ｎｇ＠１６３．ｃｏｍ

４６２ 山地农业生物学报 ２０１０矩

ＪＺｏｒａ（Ｃａｖ．）、曼陀罗Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａ均在贵州大学教学实验农场采得；另配备一定数量的马铃薯葡萄糖

一培养基。

１．２方法

１．２．１ 内生真菌的分离 用研磨法，先用自来水将杂草叶片冲洗干净。用７５％的乙醇处理４ ｒａｉｎ，无菌水

冲洗３次，再用２．５％次氯酸钠处理３ ｒａｉｎ，无菌水洗涤３次。将表面消毒的材料放入无菌研钵中并加入适

量无菌水研磨成匀浆，吸取０．５ ｍＬ浆液于加有青霉素的ＰＤＡ培养皿中，均匀涂布，２５℃恒温培养。用最

后一次冲洗的无菌摆摊技巧 水作为对照 Ｊ。３～４ ｄ后观察，分离内生真菌，并编号保存。内生真菌的鉴定参考魏景

超《真菌鉴定手册》鉴定其种类 。

１．２．２拮抗作用内生真菌的生物学特性研究用不同培养基（燕麦培养基、学生会面试稿 玉米培养基、查氏培养基、水

琼脂培养基）和不同碳源（蔗糖、葡萄糖、淀粉、麦芽糖）对内生真菌培养３ ｄ，观测菌落大小和菌落形态。

设不同的温度和ｐＨ值梯度，对内生真菌进行培养，３ ｄ后观测结果 ｊ。每个处理设３次重复。

２结果与分析

２ １不同烟田杂草内生真菌的分离结果

从４种烟田杂草中分离内生真菌，共获２０种（表１）。通过对峙试验后，筛选出具有较强拮抗作用的

内生真菌４种，由此可知烟田杂草中含有非常丰富的内生真菌，值得进行研究。

表１烟田不同杂草内生真菌的分离结果

Ｔａｂ．１ Ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｗｅｅｄｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｆｉｅｌｄｓ

２．２ ４种拮抗内生真菌的鉴定结果

参照魏景超的《真菌鉴定手册》，对４种拮抗作用较强的内生真菌进行了鉴定，结果见表２。

表２烟田杂草内生真菌的鉴定结果

Ｔａｂ．２ Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｏｆ ｗｅｅｄｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ ｆｉｅｌｄｓ

内生真菌 菌株 培养特性和形态特征

注：下文中４种内生真菌的名称全部用菌株序号表示。

第５期 张秀伟，等：烟田杂草内生真菌的分离鉴定及生物学特性的初步研究

２．３ 内生真菌的生物学特性

２．３．１ 不同培养基对４种内生真菌生长速度和长势的影响 由表３可以看出，不同培养基对４种内生真

菌生长的影响是不同的：）（３内生真菌在４种不同培养基上均能萌发生长，但其菌丝生长速度和长势在４

种不同培养基上表现差异明显：在燕麦培养基上生长速度最快，在１％水平下较其他３种培养基达到极显

著。菌丝色泽除在查氏培养基上为浅黄色外，其他均为白色；Ｍ３内生真菌在水琼脂、燕麦和玉米培养基上

生长速度差异不显著，但较查氏培养基差异显著，菌丝色泽均为白色形态，除在水琼脂培养基上表现不规

则形状外，其他３种均为圆形；Ｌ２内生真菌在燕麦培养基上菌丝生长最快，达到１．５５ ｃｍ／ｄ，较其他３种培

养基达到极显著，玉米和查氏培养基较水琼脂培养基表现差异显著，菌丝色泽均为浅粉色，且菌落形态一

致；Ｙ１内生真菌在４种培养基上均能生长，除在水琼脂培养基上菌丝生长速率较慢外，在燕麦、查氏和玉

米培养基上生长速率分别达到１．４２、１．３７和１．２５ ｃｍ／ｄ。菌丝色泽除在查氏培养基上表现为浅黄色外，其

他均为白色，菌落形态除水琼脂培养基外，其他３种表现一致。

表３不同培养基对４种内生真菌生长的影晌

Ｔａｂ．３ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉａ Ｏ１１ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｆｏｕｒ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ

２．３．２不同碳源对４种内生真茵生长速率和长势的影响由表４可以看出，不同碳源对４种内生真菌生

长的影响是不同的：ｘ３内生真菌在以蔗糖为碳源时菌丝生长速率最快，达到２．３９ ｃｎＣｄ。在１％水平下，达

到差异极显著。葡萄糖和麦芽糖两种碳源对Ｘ３内生真菌的生长表现差异不显著。菌丝色富有哲理的诗句 泽有黄色和白

色两种，菌落形态基本一致；Ｍ３内生真菌以蔗糖、淀粉、葡萄糖和麦芽糖为碳源时均能生长。以麦芽糖为

碳源时生长速率最慢，在以其他３种为碳源时差异表现不明显。菌落形态和菌丝色泽均一致；Ｌ２内生真

菌在以蔗糖和麦芽糖为碳源时生长速率最快，较其他两种碳源差异明显。４种碳源在１％水平下没有达到

极显著差异，菌落形态一致，菌丝色泽除淀粉外，其他３种碳源均表现为浅粉色；Ｙ１内生真菌以淀粉、葡萄

糖、蔗糖和麦芽糖为碳源时菌丝生长速率没有差异性，菌落形态和菌丝色泽表现一致。

２．３．３ 不同温度、ｐＨ值对４种内生真菌生长的影响 由表５可以看出，不同温度和ｐＨ值对４种内生真

菌生长的影响是不同的：当温度降到１０℃时，Ｘ３内生真菌不能萌发生长，在２５℃条件下生长速度最快，随

着温度升高生长速率开始下降，适合生长的ｐＨ值在５～９之间，最佳ｐＨ值为６和９；Ｍ３内生真菌在１Ｏ℃

时不能萌发生长，在一定的温度范围内随着温度升高，真菌生长速率加快，３０℃时达到２．０６ ｃｍ／ｄ，在ｐＨ

值４～１０之间均能生长，以ｐＨ值等于７时生长速率最快，达到１．３４ ｃｍ／ｄ；Ｉ２在１０℃时不能萌发生长，随

温度升高生长速率开始下降，最适合生长的温度为２５℃，ｐＨ值等打招呼的英文 于４时Ｌ２已经不能萌发生长，在５～９之

间均能生长，最佳ｐＨ值为７；Ｙ１在１０～３Ｏ℃之间均能萌发生长家长发言 ，２５℃为最佳生长温度，最佳ｐＨ为６和９，

在５～１０之间均能萌发生长。多数真菌的生长ｐＨ为中性偏酸性，一般在６左右，具体每种是不一样的。

４６４ 山地农业生物学报 ２０１０年

１０＂Ｃ生长速率 １５℃生长速率 ２Ｏ℃生长速率 ２５￣Ｃ生长速率 ３Ｏ℃生长速率

（ｃｍ／ｄ）（ｅｒａ／ｄ） （ｅｒｎ／ｄ）（ｃｎｖ＇ｄ） （ｅｍ／ｄ）

表６不同ｐＨ对４种内生真菌生长速率的影响

Ｔａｂ．６ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐＨ ｖａｌｕｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆｆｏｕｒ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ

３讨论

３．１本研究结果表明，烟田杂草中含有丰富的内生真菌，可作为拮抗菌的筛选范围，值得进一步进行研

究。对４种杂草内生真菌做了鉴定，分别是丛梗孢目，交链孢霉菌属；丛梗孢目，青霉属；曲霉目，裸囊菌

科，珠网霉属；Ｍ３因不能产孢，未鉴定出结果，有待改变培养条件进一步进行研究。

３。２通过对４种烟田杂草内生真菌生物学特性的研究，获知了４种内生真菌的生长对不同培养基、碳源、

温度和ｐＨ值的需求，并获知了内生真菌生长的最佳培养条件：Ｘ３在燕麦培养基上以蔗糖为碳源，ｐＨ值为

６和９时在２５℃下培养最佳；Ｍ３内生真菌在水琼胶和燕麦培养基上以淀粉为碳源，ｐＨ值为７和９时在

３０℃下培养最佳； 内生真菌在燕麦培养基上以蔗糖为碳源，ｐＨ值为９时在２５￣Ｃ下培养最佳；ＹＩ可以在

燕麦、查氏和玉米培养基上培养，４种碳源均可，ｐＨ值为９时在２５℃下培养最佳。

３．３烟田杂草内生真菌的种类繁多，本次研究仅用了ＰＤＡ培养基进行分离，不能保证各种杂草中的内生

第５期 张秀伟，等：烟田杂草内生真菌的分离鉴定及生物学特性的初步研究４６５

真菌全部分离出来；而且内生真菌的生活环境特殊，在人工培养基上有些不能产孢，增加了鉴定难度，今后

可以尝试用多种培养基进行培养，以求产孢条件，丰富内生真菌研究的内容。

参考文献：

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［２］武子敬，杨小生，朱海燕．植物内生真菌的研究现状［Ｊ］．江西中医学院学报，２００７，１９（１）：９８—１００．

［３］何佳，刘笑洁，赵启美，等．植物内生真菌分离方法的研究［Ｊ］．食品科学，２００９，３０（１５）：１０８—１８３．

［４］魏景超．真菌鉴定手册［Ｍ］．上海：上海出版社，１９７４：４０５—６０２．

［５］王伟科，袁卫东，周祖法．不同碳、氮源对绣球菌菌丝生长的影响研究［Ｊ］．浙江农业科学，２００７（１）：４７—４９．

［６］张延威，康冀川．石斛内生真菌的研究概述［Ｊ］．山地农业生物学报，２００５，２４（５）：４３８—４４１．

（上接第４５５页）

科学种植优质专用早熟马铃薯，推动黄平县农业结构的调整，促进黄平县早熟马铃薯产业发展、农村经济

稳步提高和增加农民收人具有十分重要的意义。

４．２由于评价过程中指标的选取采用专家经验的方法，该方法易受人为主观因素的影响，因此，评价指标

的选择方法有待进一步完善。

４．３本研究采用的评价技术与方法可以为喀斯特山区土地适宜性评价工作提供有益的参考。由于整个

评价过程所需数据量大，对数据的前处理要求高，评价方法单一，因此，构建具有数据管理、多种评价方法

可供选择的土地适宜性评价决策支持系统是今后研究的方向。

参考文献－

［Ｉ］武强，陈萍，董东林，等．基于ＧＩｓ技术的农业土地适宜性综合评价［Ｊ］．工程勘察，２００１（４）：４４—４７，５１．

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