叶酸含量

文件编码SOP-QC-2010-01共7页

题目叶酸检验操作规程

制定制定日期审核审核日期

批准批准日期颁发部门GMP办公室颁发日期

执行部门质量部执行日期取代共印4份

分发部门质量部、生产部、物流部

1感官要求

取10g被测样品，置于洁净的白瓷盘中，用肉眼在自然光线下观察其色泽、

组织形态、杂质，品尝其滋味，嗅其气味。

2一般规定

本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T

6682—2008中规定的三级水。

试验方法中所需标准滴定溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按

GB/T601、GB/T603之规定制备。

3鉴别试验

3.1试剂和材料

氢氧化钠溶液：c(NaOH)=0.1mol/L。

3.2仪器和设备

紫外分光光度计，附1㎝吸收池。

3.3紫外吸收试验

称取实验室样品，加氢氧化钠溶液制成每1mL中含10μg实验室样品的

溶液，用紫外分光光度计测定，在256nm±2nm，283nm±2nm，365nm±4nm

的波长处有最大吸收，在256nm与365nm波长处的吸光度比值应为2.8～3.0。

4叶酸的测定

4.1试剂和材料

4.1.1甲醇：色谱级。

4.1.2磷酸二氢钾。

4.1.3氢氧化钾溶液：c(KOH)=0.1mol/L。

4.1.4氨水溶液：0.5→100。

4.1.5叶酸对照品。

4.2仪器和设备

高效液相色谱仪。

4.3色谱分析条件

推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表A.1，叶酸典型高效液相色谱图参见

附录B，其他能达到同等分离程度和柱效的色谱柱和色谱条件均可使用。

表1色谱柱和典型色谱操作条件

色谱柱柱长25cm，柱内径4.6mm，十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。

流动相

6.8g磷酸二氢钾与70mL氢氧化钾溶液，加水稀释至850mL，并调节pH至6.3

±0.1，加80mL甲醇，用水稀释成1000mL的溶液。

流速1mL/min。

检测波长254nm。

柱温30℃，控制精度±1℃。

4.4分析步骤

4.4.1对照品溶液的制备：

称取约10mg叶酸对照品，精确至0.02mg，置50mL容量瓶中，加30mL

氨水溶液溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。

4.4.2实验室样品溶液的制备：

称取约10mg实验室样品，精确至0.02mg，置50mL容量瓶中，加30mL

氨水溶液溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。

4.4.3

系统适用性试验

理论塔板数按叶酸峰计算应不低于2000，叶酸峰与相邻杂质峰的分离度应

大于5。

4.4.4测定

按表1色谱柱和典型色谱操作条件，精密量取10μL实验室样品溶液注入

液相色谱仪，记录色谱图；另取叶酸对照品溶液，同法测定。

4.5结果计算

叶酸含量（以C19H19N7O6计,干基计)的质量分数以w1计，数值以%表示，

按式计算：

%100

)31(2

211

1







wmA

wmA

W

式中：m——实验室样品的进样量的数值，单位为毫克（mg）；

m1——叶酸对照品的进样量的数值，单位为毫克（mg）；

w2——叶酸对照品（以C19H19N7O6计,湿基计）的质量分数的数值，数值以%表

示；

w3——按A.5下测定实验品样品含水量的质量分数的数值，数值以%表示；

A1——实验室样品溶液中叶酸的峰面积的数值；

A2——对照品溶液中叶酸的峰面积的数值。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的相对偏差不

大于2.0%。

5水分的测定

5.1试剂和材料

5.1.1费休氏试液。

5.1.2无水甲醇。

5.2仪器和设备

费休氏水分测定仪。

5.3分析步骤

按《中华人民共和国药典》2005年版二部附录ⅧM水分测定法第一法A

测定。称取约0.1g实验室样品，精确至0.0002g，溶剂为无水甲醇，用水分

测定仪直接测定，或将实验室样品置干燥的具塞玻璃瓶中，加25mL～30mL无水

甲醇,在不断振摇（或搅拌）下用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，

或用永停滴定法指示终点；另作空白试验。

5.4结果计算

实验室样品中水分的质量分数以w3计，数值以%表示，按式（A.2）计算：

%100

)1(

30





m

FVV

W

式中：

F——每1mL费休氏试液相当于水的质量的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V1——实验室样品消耗费休氏试液的体积的数值，单位为毫升（mL）；

V0——空白所消耗费休氏试液的体积的数值，单位为毫升（mL）；

m——实验室样品的质量的数值，单位为毫克（mg）。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行试验的相对偏差应小于

0.2%。

6灼烧残渣的测定

6.1试剂和材料

硫酸。

6.2分析步骤

称取约1.0g实验室样品，精确至0.0002g，置已灼烧至恒重的坩埚中，

缓缓灼烧至完全碳化，冷却至室温；加硫酸0.5mL～1mL使湿润，低温加热至硫

酸蒸气除尽后，在550℃±50℃灼烧使完全灰化，移至干燥器内，冷却至室温，

精确称定后，再在550℃±50℃灼烧至恒重。

6.3结果计算

灼烧残渣的质量分数以w4计，数值以%表示，按式（A.3）计算：

%100

32

4





m

mm

W

式中：

m2——恒重坩埚和残渣的质量的数值，单位为克（g）；

m3——恒重坩埚的质量的数值，单位为克（g）；

m——实验室样品的质量的数值，单位为克（g）。

取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不

大于0.02%。

7重金属的测定

7.1试剂和材料

7.1.1硝酸。

7.1.2硫酸。

7.1.3盐酸。

7.1.4甘油。

7.1.5乙酸铵。

7.1.6硝酸铅。

7.1.7硫代乙酰胺。

7.1.8氨试液：400→1000。

7.1.9氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1mol/L。

7.1.10盐酸溶液：c（HCl）=2mol/L。

7.1.11盐酸溶液：c（HCl）=7mol/L。

7.1.12氨水溶液：c（NH3·H2O）=5mol/L。

7.1.13酚酞指示液：10g/L乙醇溶液。

7.1.14乙酸盐缓冲液（pH3.5）：

称取约25g乙酸铵，加25mL水溶解后，加7mol/L盐酸溶液38mL，用2

mol/L盐酸溶液或氨水溶液准确调节pH至3.5（pH计），用水稀释至100mL，

即得。

7.1.15

硫代乙酰胺试液：

称取约4g硫代乙酰胺，精确至0.01g，加水使溶解成100mL，置冰箱中

保存。临用前取5.0mL混合液（由1mol/L15mL氢氧化钠溶液、5.0mL水及

20mL甘油组成），加上述1.0mL硫代乙酰胺溶液，置水浴上加热20s，冷却，

立即使用。

7.1.16铅标准溶液：

称取约0.160g硝酸铅，精确至0.0002g,置于1000mL容量瓶中，加5mL

硝酸与50mL水溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，移取

10mL±0.02mL贮备液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每

1mL相当于10μg的Pb）。配置与贮存用的玻璃仪器均不得含铅。

7.2分析步骤

按《中华人民共和国药典》2005年版二部附录ⅧH重金属检查法第二法测

定，具体方法如下：

取6下遗留的残渣，加0.5mL硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后（或取实验

室样品1g，缓缓灼烧至完全炭化，冷却至室温，加0.5mL～1.0mL硫酸，使恰

湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加0.5mL硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，

冷却至室温，在500～600℃灼烧至完全灰化），冷却至室温，加2mL盐酸，置

水浴上蒸干后加15mL水，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加2mL乙酸

盐缓冲液（pH3.5），微热溶解后，移置纳氏比色甲管中，加水稀释成25mL；

另取配制实验室样品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加2mL乙酸盐缓冲液（pH3.5）

与15mL水，微热溶解后，移置纳氏比色乙管中，加1mL±0.01mL标准铅溶液，

再用水稀释成25mL；再在甲乙两管中分别加各2mL硫代乙酰胺试液，摇匀，

放置2min，同置白纸上，自上向下透视，甲管中显示的颜色与乙管比较，不得

更深。斑。