水洗牛皮纸

实验一、玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌一、目的要求1、掌握实验室常用玻璃器皿的

清洗、干燥和包扎方法。2、了解湿热和干热灭菌的原理并掌握有关的操作技术。二、原理

为确保实验顺利地进行要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净并干燥，微生物实验还要进行

灭菌。为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿，吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加

塞棉塞。这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验

结果，甚至会导致试验的失败。1、玻璃器皿的清洗①不能用有腐蚀作用的化学试剂，也不

能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2的盐酸溶液浸泡数小时，

用水充分洗干净。②用过的器皿应立即洗涤。③强酸，强碱，琼脂等能腐蚀，阻塞管道的

物质不能直接倒在洗涤槽内，必须到在废物缸内。一般的器皿都可用去污粉，肥皂或配成5

的热肥皂水来清洗。油脂很重的器皿应先将油脂擦去。沾有煤膏，焦油及树脂一类物质，

可用浓硫酸或40氢氧化钠或用洗液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之熔融后揩去，或用

有机溶剂苯，二甲苯，汽油，丙酮，松节油等揩去。④洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水

均匀湿润而无条纹和水珠。2、器皿包扎为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需

包扎。3、干燥做实验应经常要用到的仪器应在每次实验完毕后洗净干燥备用。用于不同

实验对干燥有不同的要求，一般定量分析用的烧杯、锥形瓶等仪器细净即可使用，而用于

精密分析的仪器很多要求是干燥的，有的要求无水痕，有的要求无水。应根据不同要求进

行干燥仪器。（1）、烘干洗净的仪器控去水分，放在烘箱内烘干，烘箱温度为105110℃烘

1小时左右。也可放在红外灯干燥箱中烘干。此法适用于一般仪器。称量瓶等在烘干后要

放在干燥器中冷却和保存。带实心玻璃塞的及厚壁仪器烘干时要注意慢慢升温并且温度不

可过高，以免破裂。量器不可放于烘箱中烘。硬质试管可用酒精灯加热烘干，要从底部烤

起，把管口向下，以免水珠倒流把试管炸裂，烘到无水珠后把试管口向上赶净水气。（2）、

热（冷）风吹干对于急于干燥的仪器或不适于放入烘箱的较大的仪器可用吹干的办法。通

常用少量乙醇、丙酮（或最后再用乙醚）倒入已控去水分的仪器中摇洗，然后用电吹风机

吹，开始用冷风吹12分钟，当大部分溶剂挥发后吹入热风至完全干燥，再用冷风吹去残余

蒸汽，不使其又冷凝在容器内。（3）、晾干不急等用的仪器，可在蒸馏水冲洗后在无尘处

倒置处控去水分，然后自然干燥。可用安有木钉的架子或带有透气孔的玻璃柜放置仪器。3、

灭菌灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大

类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。

通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水

量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热

大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增

加灭菌效力。（1）、湿热灭菌①煮沸消毒法：注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注

射器等用纱布包好，然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15～

30min，对于芽孢则需煮沸约1～2h。②高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，

是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高

而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经

15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻

璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。（2）、干热灭菌通过使用干热空气

杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，

即加热至160～170℃维持1～2h。干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带

有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。三、实验仪器药品1、培养皿，吸

管，试管，三角瓶，试管刷，棉花，报纸、包扎绳、去污粉等。2、电热鼓风干燥箱、立式

高压蒸汽灭菌锅。四、实验步骤与注意事项1、洗涤①用试管刷蘸取少量去污粉反复刷洗器

皿23次。②用自来水冲洗23次。③用少量去离子水荡洗12次，控干水分。2、器皿包

扎①培养皿：洗净的培养皿烘干后每5套或根据需要而定叠在一起用牢固的纸卷成一筒或

装入特制的铁桶中然后进行灭菌。②吸管:洗净烘干后的吸管在吸口的一头塞入少许脱脂棉

花以防在使用时造成污染.塞入的棉花量要适宜多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。每支吸管

用一条宽约45cm的纸条以3050℃的角度螺旋形卷起来吸管的尖端在头部另一端用剩余

的纸条打成一结以防散开标上容量若干支吸管包扎成一束进行灭菌，使用时从吸管中间拧

断纸条抽出吸管。③试管和三角瓶:试管和三角瓶都需要做合适的棉塞棉塞可起过滤作用避

免空气中的微生物进入容器.制作棉塞时要求棉花紧贴玻璃壁没有皱纹和缝隙松紧适宜.过

紧易挤破管口和不易塞入过松易掉落和污染.棉塞的长度不小于管口直径的2倍约2/3塞

进管口。若干支试管用绳扎在一起在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸再用绳扎紧。三角瓶加

棉塞后单个用报纸包扎。合格的棉塞不合格的棉塞3、干燥灭菌①干热灭菌（电热干燥

箱的使用）A、把要灭菌的物品放在箱内堆积时要留有空隙勿使接触器壁铁壳关闭箱门。B、

打开电源控温仪上有数字显示。C、按SET键进入温度设定，将温度设为160℃。D、再

按SET键进入时间设定，将时间设定为80min。E、待箱内温度降至60℃时才能打开箱

门取出灭菌物品。☆注意事项:由于纸张和棉花在180℃以上时容易焦化起火所以干热灭菌

的温度切莫超过180℃由于油纸在高温下会产生油滴滴到电热丝上易着火所以进行干热

灭菌的玻璃器皿严禁用油纸包装.由于温度的急剧下降会使玻璃器皿破裂所以烘箱的温度

只有下降到60℃以下才可打开烘箱门。烘箱内物品不宜放得太多以免影响空气流通而使

温度计上的温度指示不准造成上面温度达不到下面温度过高影响灭菌效果。干燥箱控制

控制示意图②湿热灭菌（高压蒸汽灭菌锅的使用）Ａ、打开电源，开启灭菌腔盖，加水。

☆注意：必须使用蒸馏水，每次灭菌后注意补充蒸馏水。Ｂ、装入待灭菌物品，关闭灭菌

腔盖。☆注意：关闭腔盖时，先快速旋转到闭盖指示灯闪烁，然后缓慢旋转手柄，直至闭

盖指示灯完全亮起，不要在指示灯亮起后继续旋紧手柄。Ｅ、选择灭菌程序，按DATA键

选择固体模式—U01。Ｆ、开始灭菌，按START键直接启动工作，20min。Ｇ、程序结束

与开盖，当温度低于40℃，“COMP”字符闪烁，可安全开盖。Ｈ、取出灭菌物品，戴上

隔热手套，待蒸气散开后方可将手伸入灭菌腔内。Ｉ、关闭电源。五、创新思考1、湿热灭

菌与干热灭菌有何不同。2、灭菌前为什么要进行包扎。3、干燥的主要方法。玻璃器皿的

及灭菌

微生物学实验

课前预习与目的要求

【课前预习】

1.高压蒸汽灭菌原理.

2.上海申安LDZX-50KBS灭菌锅的使用方法.

【目的要求】

1.学习并掌握玻璃器皿的方法.

2.掌握高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方法.

基本原理

微生物学实验所用的器皿,大多数要进行消毒,灭菌,才能用来培养微生物.

玻璃器皿的包装方法正确合理,在使用过程中才能有效防止杂菌的污染.

玻璃器皿包装好后,一般用高压蒸气灭菌法进行灭菌.

基本原理

高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅隔套间

的水沸腾而产生蒸气.

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,关闭排气阀,继续加热,此时由于蒸气不能

溢出,而增加了灭菌锅内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度.导致菌体蛋白质凝

固变性而达到灭菌的目的.

实验用品

棉花,试管,培养皿,纱布,三角瓶,橡皮筋,量筒,牛皮纸(或旧报纸),LDZX-50KBS立式高压蒸气

灭菌锅等.

方法步骤

1.熟悉微生物学实验的结构与功能.

2.清洗试管,三角瓶,培养皿等玻璃器具,烘干.

3.制作试管棉塞及三角瓶棉塞(参照微生物学实验基本操作技术).

4.用量筒或吸管取适量自来水于三角瓶和试管中,包装好以制备无菌水.

5.包装空培养皿,移液管.

6.灭菌(参照Ⅰ).

玻璃器皿清洗方法

玻璃器皿在使用过程中确保干净,用过的器皿应及时清洗.

器皿一般可以用去污粉,肥皂或洗洁净清洗.

琼脂培养基的器皿应先将培养基刮去.

琼脂和固体物不能丢弃到水池中,以免堵塞管道.

清洗方法详见Ⅰ.

棉塞的制作

棉塞的作用有二:一是防止杂菌污染,二是保证通气良好.

形状,大小,松紧适度.

培养皿的包装

培养皿常用旧报纸紧紧包裹,一包7～10套,包好后干热或湿热灭菌.

也可用金属筒包装.

移液管的包装

作用:以免使用时将杂菌吹入其中,或不慎将微生物吸出管外.

试管和三角瓶的包装

试管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅胶塞;

用二层报纸好(如有牛皮纸,效果更好),进行干热或湿热灭菌.

试管较多时,一般7个或10个一组,再用双层报纸.

上海申安LDZX-50KBS灭菌锅的使用

1)打开电源与开关,检查水位显示灯;

2)加灭菌物品;

3)盖紧;

4)设定温度和时间;

5)查看排气(水)阀旋至排气处;

6)排气;

7)结束后取物.

实验结果

记录自己制作的实验用品(含无菌水)名称的规格与数量.

注意事项

1.实验前,熟悉实验室平面布局图,了解实验仪器用品摆放规律及用途.

2.制备无菌水时,试管装水量要超过试管高度的1/5,三角瓶装水量不要超过规格容量的

1/2(装量过多,灭菌过程中易喷出或润湿棉塞);

3.灭菌锅的操作安全.

实验报告

1.高压蒸气灭菌开始之前,为什么要将锅内冷空气排尽灭菌完毕后,为什么待压力降低"0"时

才能打开排气阀,开盖取物.

2.在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时,怎样杜绝一切不安全的因素.灭菌在微生物实验操作中有

何重要意义

3实验七、玻璃器皿的清洗与包扎一、目的要求1、熟悉微生物实验所需的各种常用器皿

名称和规格。2、掌握对各种器皿清洗方法。3、掌握玻璃器皿的干热灭菌操作过程。二、

材料1、常用各种玻璃器皿。2、清洗工具和去污粉、肥皂、洗涤液。3、电热干燥箱。三、

概述为了保证实验顺利进行要求把实验用器皿清洗干净。保持灭菌后无菌状态需要对培养

皿、吸管等进行妥善包扎。试管和三角瓶要做棉塞。这些工作看来很普通如操作不当或不

按规定要求去做会导致实验的失败。因此应看作是微生物实验的基本操作。四、方法一

器皿洗涤的注意事项和方法1、任何洗涤方法都不应对玻璃器皿有所损伤所以不能用有腐

蚀作用的化学药剂也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。2、一般新的玻璃器

皿用2的盐酸溶液浸泡数小时用水充洗干净。3、用过的器皿应立即洗涤有时放置太久会

增加洗涤困难。4、难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起。有油的器皿不要与无油

的器皿放在一起否则使本来无油的器皿也沾上了油垢浪费药剂和时间。5、强酸、强碱、

琼脂等腐蚀、阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内必须倒在废缸内。6、含有琼脂培养

基的器皿可先用小刀或铁丝将器皿中的琼脂培养基刮去或把它们用水蒸煮待琼脂融化后趁

热倒出然后用水洗涤。7、一般的器皿都可用去污粉、肥皂或配成5热肥皂水来清洗油质

很重的器皿应先将油层擦去。8、如果器皿沾有煤膏、焦油及树脂类的一些物质可用浓硫

酸或40的氢氧化钠液洗或用洗涤液浸泡。9、当器皿上沾有蜡或油漆等物质用加热方法使

之融化揩去或用有机溶剂苯、二甲苯、丙酮、松节油等拭揩。10、洗涤后的器皿达到玻璃

能被水均匀湿润而无条纹和水珠。11、载玻片或盖玻片可先在2盐酸溶液中浸1小时然后

在水中冲洗23次最后用蒸馏水洗23次洗后烘干冷却或浸于95酒精中保存备用。用过的

载玻片或盖玻片先擦去油垢再放在5肥皂水中煮10分钟后立即用清水冲洗以后放在洗涤液

稀释中浸泡2小时再用清水洗至无色为止最后用蒸馏水洗数次干后浸于95酒精中保存备

用。12、凡遇有传染性材料的器皿洗涤前应经高压灭菌后清洗。二器皿包扎为了灭菌后

仍保持无菌状态各种玻璃器皿均需包扎。1、培养皿洗净烘干后每10套迭在一起用牢固

的纸卷成一筒外面用绳子捆扎以免散开然后进行灭菌。到使用时在无菌室中才打开取出培

养皿。2、吸管洗净烘干后的吸管在口吸的一端用尖头摄子或针塞入少许脱脂棉花以防止

菌体误吸口中及口中的微生物吸入管而进入培养物中造成污染。塞入棉花的量要适宜棉花

不宜露在吸管口的外面多余的棉花可用酒精灯的火焰把它烧掉。每支吸管用一条宽约45

厘米以45°左右的角度螺旋形卷起来吸管的尖端在头部吸管的另一端用剩余纸条迭打结不

使散开标上容量。若干支吸管扎成一束灭菌后同样要在使用时才从吸管中间拧断纸条抽去

吸管图见下页。3、试管和三角瓶试管和三角瓶都要作合适的棉花塞。棉花塞的作用是起

过滤作用避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。棉花塞的制作要求使棉花塞紧贴玻璃壁

没有皱纹和缝隙不能过松过紧易挤破管口和不易塞入过松易掉落和污染。棉花塞的长度不

少于管口直径的二倍约2/3塞进管口见下页图。若干支管用绳子扎在一起在棉花塞部分外

包油纸或牛皮纸再在纸外用绳扎紧。三角瓶每个单独用油纸包扎棉花塞。合格的棉塞不

合格的棉塞三灭菌使玻璃器皿达到无菌状态叫灭菌玻璃器皿主要用电热干燥箱进行灭

菌。1、干燥箱灭菌的物品放在箱内堆置时要留空隙勿使接触四壁关闭箱门。2、接通电

源把箱顶的通气口适当打开使箱内湿空气能逸出至箱内温度达到100℃时关闭。3、调节温

度控制器旋扭直至箱内温度达到所需温度为止观察温度是否衡定若温度不够再行调节调节

完毕后不可再拨动调节旋扭和通气口保持140160℃23小时。4、切断电源冷却到60℃时

才能把箱门打开取出灭菌物品。5、将温度调节控制旋扭返回原处并将箱顶通气口打开所

有空箱干净的玻璃器皿及其它耐热器皿等一般都可用此法灭菌。如培养基和其它不耐热的

橡皮塞等不可用此法灭菌。五、实验作业附1、常用玻璃器皿量筒、三角瓶、试管、培养

皿、漏斗、玻棒、吸管、防水油纸2、洗涤液浓配方重铬酸钾工业用40.0克蒸馏水160.0

毫升浓硫酸粗800.0毫升稀配方重铬酸钾工业用50.0克蒸馏水850.0毫升浓硫酸粗

100.0毫升配法将重铬酸钾溶解在蒸馏水中可加热待冷却后再慢慢地加入浓硫酸边加边搅

拌配好后存放备用。此液可使用很多次每次用后倒回瓶中贮存直至洗涤液变成青褐色时才

失去效用。器皿上有大量有机质时不可直接用洗涤液来洗涤应尽量先行清除后再用否则洗

涤液很快会失败。洗涤液不能用手洗涤金属器皿洗涤液有强腐蚀性如溅于桌椅上应立即用

水冲洗然后用碳酸钠溶液或氨水洗。.