牛乳检验方法
一.感官检验。
验收牛乳时,应先做感官鉴定,是否有异常气味,如酸味、牛粪味、腥味和煮熟乳气味等。用搅拌棒
搅匀牛乳时,观察下列异常点:
1.色泽是否带红色、绿色或明显的黄色;
2.是否有大量杂质,如煤屑、豆渣、牛粪、尘埃和昆虫等;
3.牛乳是否发粘或呈凝块。
二.杂质度的测定:
1.仪器:a.杂质度过滤机;b.杂质度过滤板。
2.方法:将杂质度过滤板置于杂质度过滤机上,将滤体慢慢倾入待完全过滤后,用蒸馏水冲洗,将杂质
度过滤板与标准板对比得出结果。
三.净容量的测定:
1.仪器:250ml容量瓶;10ml刻度移液管。
2.方法:将20oC时的样品从折翼一角小心剪开,缓慢沿容量瓶壁倒入,尽量不形成泡沫,将样品彻底
倒净,静置1-2min,读数,超过刻度线的部分以刻度移液管吸出读数。读数时液面的弯月面应与眼光平
行。
3.将所取样品全部用250ml量筒测其平均值,要求平均值大于等于250ml方为合格。
四.PH值的测定:
1.仪器:PHS-2C酸度计
2.方法:将酸度计的电极插入装有纯牛奶的量筒中(纯牛奶
保持在25oC的温度,在水浴中保温)。待显示数字稳定后,读数。
五.牛乳新鲜度检验。
1.滴定酸度:吸取10ml牛乳,置于250ml三角瓶中,加入20ml水,再加入0.5ml0.5%和酚酞乙醇溶液,
小心摇匀,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色(见注),在1min内不消失为止。消耗0.1N氢氧化钠
标准溶液的毫升数乘以10,即得酸度(OT)。
注:滴定酸度终点判定标准颜色的制备方法如下。取滴定酸度测定的同批和同样数量的样品如牛乳
10ml置于250ml三角瓶中,加入20ml水,再加入3滴0.005%碱性品红溶液,摇匀后作为该样品滴定
酸度终点判定的标准颜色。
2.酒精试验:于试管内用等量的乙醇(中性)与牛乳混合(一般用1-2ml等量混合),振摇后不出现絮
片的牛乳符合表1酸度标准,出现絮片的牛乳为酒精试验阳性乳,表示酸度较高。
试验温度以20℃为标准,不同温度需进行校正。根据收乳标准,采用68O、70O和72O的酒精。
酒精浓度不出现絮片的酸度
68O20OT以下
70O19OT以下
72O18OT以下
3.煮沸试验:取约10ml牛乳,放入试管中,置于沸水浴中5min,取出观察管壁有无絮出现或发生凝固
现象。如产生絮片或发生凝固,表示牛乳已不新鲜,酸度大于26OT。
4.利色唑林(刃天青)试验:
a.刃天青基础液:取100g刃天青(分析纯)于烧杯中,加少量煮沸过的水溶解,入200ml容量瓶中,
最后加水至刻度,贮藏在冰箱中,此液含刃天青0.05%。
b.刃天青工作液:用煮沸过的、经玻璃器皿蒸馏的水以1:10的比例将基础液稀释即可,工作液贮
于棕色瓶中,避光保存。
c.方法:向刻度试管中加入牛乳10ml,加刃天青工作液1ml,混匀,用灭菌橡胶塞塞好,但不要塞
严,在38-40℃的水浴中放置5min。当试管加热到57℃时,用胶塞把管口塞住,慢慢转动试管
(不振荡),使受热均匀,用温度计测被检样液温度(可将温度计放在对照组试管中测得),样液
温度在57℃下维持60min。
经过20min和60min的观察结果按表2分级。
级别乳的质量
乳的颜色
经过20min经过60min
1良好青蓝色青蓝色
2合格青蓝色蓝紫色
3差青蓝色或蓝紫色粉红色
4劣白色―――
经20min观察后的记录结果,除去白色乳试管,其他试管进行转动,继续放入水浴中保温60min,记
录结果,试验时试管应避光。
试验用试管需在160℃温度下保温60min,干燥灭菌后,用无菌胶塞盖紧。所用胶塞应在杀菌釜中灭
菌(压力为1kg/cm2;保温10min)或煮沸30min。
六.乳的比重测定。
本方法规定牛乳比重为20℃的牛乳与同体积4℃水的重量比值。
1.仪器:a.乳稠计:20℃/4℃;b.250ml的量筒(量筒的高应大于乳稠计的长度。其直径大小应使乳稠
计沉入后,量筒内壁与乳稠计的周边距离不小于5mm)。
2.方法:
将10-25℃的牛乳样品小心地沿壁注入容积为250ml的量筒中,加到量筒容积的3/4勿使发生泡沫,用
手拿住乳稠计上部,小心地将它沉入到相当标尺30o处,放手让它在乳中自由浮动。但不能与筒壁接触,
待静止1-2min后读取乳稠计度数,以牛乳表面层与乳稠计的接触点,即新月形表面的顶点为准。
3.计算:比重=1+乳稠计读数/1000(温度每上升1℃比重下降0.002)
4.也可根据牛乳的温度和乳稠计读数查看附表1。计算举例:牛乳样品温度为16℃,测得比重为1.0305,
即乳稠计读数为30.5O。换算成20℃时的乳稠计数,查表,同16℃、30.5O对应的乳稠计度数为29.5O。
却20℃时的牛乳比重为1.0295。
七.全乳固体的测定:
1.重量法:
(1)仪器:铝皿盒直径50-70mm
(2)方法:
将皿盒置于105-110℃烘箱中烘2h后至恒重取出,放入干燥器中冷却30分钟后先称盒重量W1。再将
10ml牛乳注入到皿盒中称重W,然后放在电热板上烘干。然后再放在105-110℃烘箱中烘1.5h取出,放入
干燥容器中0.5hr后称重W2,计算。
公式:全乳固体(%)=(W2-W1)/(W-W1)
W2--烘干后皿盒和牛乳的重量,g
W1--空皿盒的重量,g
W--牛乳的重量,g
2.计算法:利用下式,可由上述所测得的比重和脂肪含量来计算全乳固体的含量。
T=0.25L+1.2F+0.14
T---全乳固体%
L---乳稠计(15℃/15℃)度数
F---脂肪%
八.乳脂肪的测定(盖脖法)。
1.原理:利用硫酸破坏牛乳的胶质性,使牛乳中的酪蛋白钙盐变成可溶性的硫酸酪蛋白化合物和硫酸钙,
并促使脂肪成为游离的脂肪球与其他成分分开,同时利用异戊醇加速脂肪球的合并、分离,形成脂肪层,
从而能在乳脂肪计刻度上反映脂肪含量。
2.仪器:a.牛乳乳脂计;b.乳脂计架;c.盖勃牛乳专用离心机;d.11ml牛乳移液管。
3.试剂:a.硫酸:比重为1.820-1.825;b.异戊醇:沸点128-132oC、比重0.8090-0.8115
4.方法:
量取硫酸10ml注入牛乳乳脂计内,颈中勿沾湿硫酸。用11ml牛乳吸管吸取牛乳样品至刻度。加入同一
牛乳乳脂计内。再加入异戊醇1ml,塞紧橡皮塞,充分摇动,使牛乳凝块溶解。将乳脂计放入离心机中转
速1200转/分,离心5min(要求温度恒定在40-55度)取出。立即读数,读数时以液面下限为准,所得数
值即为脂肪的百分数。
九.蛋白质测定(凯氏定氮法):
1.仪器:a.通风橱;b.凯氏定氮蒸馏装置。
2.试剂:a.硫酸铜—硫酸钾(1:15):分析纯;b.2%硼酸溶液;c.0.1%甲基红乙醇溶液;d.0.5%溴甲酚
绿乙醇溶液;e.40%氢氧化钠溶液;f.0.05N盐酸溶液。
3.方法:
消化:精密吸取10ml液体样品称重,移入干燥的500ml定氮瓶中,加入3.2g硫酸铜—硫酸钾(1:15)
混合催化剂及25ml硫酸使样品全部浸泡在消化液中,防止样品粘附瓶颈上部,稍摇匀后,将瓶以45度角
斜支在电炉上,微火加热,小心瓶内泡沫冲出影响结果。当样品炭化变黑产生泡沫时要减小火力,勿使黑
色物质上升到凯氏定氮瓶颈部,当泡沫完全停止,消化液均匀沸腾后,加大火力,直至瓶内容物的颜色逐
渐成透明的淡绿色后继续消化0.5-1hr,若凯氏烧瓶壁上粘有炭化粒时进行摇动,或待瓶内容物冷却数分
钟后,用过氧化氢溶液冲下继续消化0.5hr直至完全透明为止,放冷,加蒸馏水约10ml放冷后,移100ml
容量瓶中加水至刻度,混匀备用,同时作空白试验(除不加样品外其余消化步骤一致)。
蒸馏:检查定氮装置各连接部分不漏气,在水蒸汽发生瓶内装水约2/3加硫酸使水呈酸性目的使水中的
NH3不致蒸出,加数粒玻璃珠以防爆沸,加热煮沸定氮蒸汽蒸馏瓶的水。吸取10ml样液于定氮蒸气蒸馏瓶
中,用洗瓶冲洗管壁将塞用水封好,在冷凝器的下端入置一个盛有10ml硼酸、2滴混合指示剂的250ml锥
形瓶。使冷凝器下端的玻璃管正好在液面下,一切准备好后将约10ml140%氢氧化钠慢慢加入蒸馏瓶,一切
准备好后,通入蒸气进行蒸馏,蒸馏至锥形瓶内液体内液体在约100-125ml时即用蒸馏水冲洗冷凝管下端,
将洗液一并收集于锥形瓶内,蒸馏途中不得停火断气,否则发生倒吸。
滴定:使用微量滴定管以0.05N的盐酸溶液滴定锥形瓶中的溶液,使之由蓝绿色滴定至紫色为止,同时
做空白试验。
计算:
(V-V0)×N×0.014
X=×F×100
10
m×
100
X---样品中蛋白质的含量,%;
V---滴定时样品消耗盐酸标准溶液的体积,ml;
V0---滴定时试剂空白消耗盐酸标准溶液体积,ml;
N---盐酸标准溶液的当量浓度;
0.014---1N盐酸标准溶液的当量浓度;
m---样品的质量(体积),g(ml);
F---氮换算为蛋白质的系数牛乳:6.38
清洗:蒸馏前,要将蒸馏装置清先至少3次,实验完毕后也要清洗3-4次。
十.牛乳掺碱的测定(方法一)。
1.原理:生鲜牛乳如掺有碱性物质,可使指示剂溴麝香草酚蓝变色。溴麝香草酚蓝又称溴百里香酚蓝,
是一种酸碱指示剂。PH值变化范围在6.0-7.6颜色由黄变蓝,加碱的生鲜牛乳氢离子浓度发生了变化,
因而使溴麝香草酚蓝显示出与正常牛乳不同的颜色。同时根据颜色的不同,还可以判断其加碱量的多少。
2.试剂:0.04%溴麝香草酚蓝(C27H28O5BR2S)乙醇溶液:称取0.04gC27H28O5BR2S溶于少量95%的乙醇
溶液,然后将溶液移至100ml容量瓶内,再用95%乙醇稀释至刻度。
3.操作:先用洗瓶冲洗试管,然后取鲜牛乳5ml于试管中,将试管保持倾斜位置,沿管壁小心向试管
中加入0.04%C27H28O5BR2S乙醇溶液5滴,然后将试管轻轻斜转2-3回,使其更好的相互接触,但切匆使
液体相互配合,然后把试管垂直放置,2min后根据环层指示剂的颜色特征判定结果。同时与不含碱的正
常鲜牛乳对照。
4.掺碱量的判定:
生鲜牛乳中Na2CO3的浓度环层颜色特征
无黄
0.03%黄绿
0.05%淡绿
0.1%绿
0.3%深绿
0.5%青绿
0.7%淡青
1.0%青
1.5%深青
玫瑰红酸定性法:
1.试剂:玫瑰红酸(0.05%乙醇溶液)。
2.方法:于盛有5ml牛乳的试管中加入5ml玫瑰红酸液,用手指堵住管口,摇匀,乳中如无碱性物质则
呈黄色,有碱时则呈玫瑰红色,其加入量与颜色的深浅成正比(在检验时应做对照试验)。
十一.食盐的检出。
1.原理:CRO4
2-、Cl-均可与Ag+反应生成难溶性沉淀,但二者浓度积不同,Ag2CRO4沉淀遇一定浓度的
Cl-而褪色,Ag++Cl-作用生成AgCl沉淀,褪色程度与Cl-含量成正比,AgCl白色沉淀因CRO4
2-的存在
而呈黄色。
2.试剂:(1)0.009mol/LAgNO3溶液:将1.533gAgNO3溶于少量水中,然后移入1000ml容量瓶中稀
释到刻度,制得的溶液保存于棕色的试剂瓶中。
(2)10%K2RO4溶液:称取10gK2RO4,用少量水溶解,然后移入100ml容量瓶稀释至刻度。
3.操作:取AgNO3溶液5ml于试管中,滴加K2RO42滴,混匀,试管中呈红褐色,再取生鲜牛乳1ml于试
管中,充分摇匀。如红褐色消失变为黄色,说明该牛乳为异常乳。
正常牛乳中Cl-含量为<0.15%(产乳期)。若呈黄色,Cl->0.16%,折合成NaCl为0.26%以上。
十二.硝酸盐的检出。
1.原理:在柠檬酸的酸性溶液中,NO3
-能被Zn还原为NO2
-,NO3
-与氨基笨磺酸及盐酸萘乙二胺作用,能
生成红色的偶氮化合物。
2.试剂:锌粉(Zn)0.6g
硫酸钡(BaSO2)100g
柠檬酸(C6H8O7.H2O)75g
硫酸锰(2)10g
无水对氨基笨磺酸[(C6H4CNH2)(SO3H)]4g
盐酸萘乙二胺(C10H7NHCH2CH2NH2.2HCl)2g
研细后,将锌粉与硫酸钡充分混合,再与其它试剂完全混合成固体试剂,密封保持干燥存放于棕色瓶
中。
3.操作:取生鲜牛乳2ml于试管中,加上述固体试剂0.3g振荡1.5,若试管中呈红色,说明生鲜牛乳
中的含量超过正常值。
十三.硫酸盐的检出。
1.原理:掺入硫酸盐的生鲜牛乳,SO2
-的含量高,可以利用玫瑰红酸钡与BaCl2作用,生成红色的玫瑰
红酸钡,当SO2
-进入时,SO2
-与Ba2+反应生成较细腻的BaSO2沉淀,使玫瑰红酸钠的红色褪去的反应,有
过量的硫酸盐存在于牛乳中。
2.试剂:20%CH3COOH溶液:用市销售36%的分析纯醋酸稀释而得。
1%BaCl2溶液:取1gBaCl2.H2O溶于少量水,稀释至100ml。
2%玫瑰红酸钠溶液:取0.2g玫红酸溶于少量水中,稀释到100ml,用时现配。
3.操作:取生鲜牛乳样5ml,加CH3COOH2滴,BaCl25滴,玫红酸2滴,充分振荡,若试管中呈黄色,
则为阳性结果。
若为红色,则为阴性结果。红色褪去的程度与SO2
-的含量成正比。注:若为红色属不正常乳。
十四.淀粉酶的检出。
1.原理:利用碘遇淀粉变蓝的特效反应,检查牛乳中是否存有淀粉酶。
2.试剂:
2%碘溶液:取4gKI溶于少量水中,然后用此溶液溶解结晶碘2g,待结晶碘完全溶解后转入100ml
容量瓶中,加水至刻度。
2%可溶性淀粉液:取2g可溶性淀粉,先用少量水搅成糊状,用用沸水浴溶解,冷却后转移至100ml
容量瓶中,加水至刻度。
3.操作:取鲜牛乳5ml于试管中,加入2滴2%可溶性淀粉液,加热至75℃,保温5min,然后冷却至
室温后再加入2滴2%碘溶液,如有淀粉酶存在不显蓝色;而正常乳呈浅蓝-深蓝色。
4.淀粉类物质的检出:取生鲜牛乳5ml于试管中,稍稍煮沸,冷却后加入2-3滴碘液,若有淀粉类物
质存在,则试管中呈蓝色或青蓝色。如有糊精类,则显紫红色。
十五.尿素的检出。
1.理:尿素能和亚销酸钠在酸性溶液中反应生成CO2、N2气体,生鲜牛乳中如掺有尿素、亚销酸钠后会
发生该反应;如无尿素存在,那么引入的NO2
-就遗留在生鲜牛乳中,可通过检验NO2
-是否存在,判定乳样
中有无尿素存在。
2.试剂:
格里斯干试剂:滴石酸89g
无水对氨基笨磺酸10g
a-萘胺1g小心在研钵中研细均匀,密封干燥保存在棕色瓶中。
1%亚销酸钠水溶液:取1gNaNO2用少量水溶解,定容到100ml容量瓶中。
3.操作:取鲜牛乳3ml于试管中,加入1%NaNO2溶液、浓H2SO4各1ml,摇匀,待气泡消落,加入0.3
g格里斯干试剂,混匀观察试管中的颜色变化。(要求NaNO2的浓度与加入量要准确。)
正常乳为紫红色。
掺尿素样乳试管中无颜色变化或呈黄色,灵敏度为0.01%。
4.尿的检验:取生鲜牛乳5ml于试管中,加10%NaOH溶液5滴,再加苦味酸0.5ml,混匀,加热,立即观
察试管颜色的变化。正常生鲜牛乳,颜色呈黄色,掺尿乳则呈橙红色,尿掺入量越大,红色出现的越快。
十六.蔗糖的检出。
1.原理:蔗糖与硫酸反应脱水生成羟甲基呋喃甲醛,再与葱酮缩合成红色化合物。如有还原糖在时,先
用碱使还原糖转向异构化,然后再进行蔗糖的测定。
2.试剂:0.1%葱酮(C14H100)溶液:取0.1g葱酮溶于100ml3:1H2SO4溶液中,用时现配。
3.操作:取生鲜牛乳1ml于试管中,加葱酮试剂2ml,振荡观察试管中的颜色变化,如在5min内变
为透明红色,则说明有糖掺入,颜色浓度与掺入量成正比。
十七。蔗糖含量的测定:
1.仪器:
250ml三角瓶(蒸馏水洗净烘干);酸式滴定管(0-50ml、0.1ml精确度);250ml、100ml容量瓶;5ml、
50ml移液管。
2.试剂:
20%的乙酸铅溶液:取20g乙酸铅溶解于100ml水中。
草酸钾-磷酸氢二钠溶液:取草酸钾3g,磷酸氢二钠7g溶解于100ml的水中。
费林试液(甲液及乙液):(1)甲液――取34.639g硫酸铜溶于水中,加入0.5ml浓硫酸加水至500ml。
(2)乙液――取173g洒石酸钾钠及50g氢氧化钠溶解于水中,稀释到500ml,
静止两天后过滤。
1%次甲基蓝溶液;
1:1盐酸;
30%氢氧化钠溶液;
0.2%甲基红-乙醇溶液:取0.2g甲基红溶于100ml20%乙醇溶液中。
3.乳糖的测定方法
(1)样品处理
取25ml奶用50ml水分数次溶解并洗入250ml容量瓶中,加入4ml乙酸铅溶液,4ml草酸钾-磷酸氢二钠
溶液,每次加入试剂是都要途徐徐加入,并摇动容量瓶,用水稀释至刻度,摇匀,静置数分钟,用于干燥
滤纸过滤弃去最初25ml,所得样液作滴定用。
(2)预备滴定
在50ml滴定管中注入上述待测液15ml,取费林试液10ml(用甲、乙液各5ml)于250ml三角烧瓶中,
置电炉上加热,使其在2min内沸腾,沸腾后关小火焰,保持沸腾状态15S,加入次甲基蓝3滴,徐徐滴入
样液。样液至蓝色完全褪尽为止,读取所用样液的亳升数。
(3)精密滴定
取10ml费林试液(甲、乙液各5ml),一次加入比预备滴定量少0.5-1.0ml的样液,置于电炉上,使其在
2min内沸腾,沸腾后关小火焰,维持沸腾状态2min,加入3滴次甲基蓝液,一滴一滴地滴入样液,待蓝色褪尽
即为终点,以滴定定量作为计算的依据(在同时测定蔗糖时,此即为转化前滴定量。
计算:
F1×fl×250×100
乳糖(%)=12
V1×W
式中:V1---滴定消耗样液是,ml
W---样品重,mg
F1---由消耗样液的毫升数查表4所得乳糖数,mg
fl---费林试液乳糖校正值
4.蔗糖测定方法
(1)转化前转化糖量的计算
利用测乳糖时的滴定量,自表4中查出相对应的化
糖量按式13计算
F2×f2×250×100
转化前转化糖量(%)=—————————13
V1×W×1000
式中:F2---由测定有乳糖时消耗样液的毫升数查表
4所得转化糖的毫克数
f2---费林试液蔗糖校正值
V1,W同式12
(2)样液的转化及滴定
取50ml样液于100ml容量瓶中加20ml水,再加入10ml1:1的盐酸,置于75℃水浴锅中,时时摇动,在
2min30S至2min45S之间使瓶内升温至69.5℃后继续在水浴中保持5min,取出,用冷水冷却,当瓶内温度冷
却至35℃加酚酞指
示剂2滴,用30%氢氧化钠中和呈中性冷却至20℃,用水稀释至刻度,摇匀并在此温度下保温半小时后再滴
定。
F3×f3×500×100
转化后转化糖量(%)=———————————14
V2×W×1000
式中:F3---由V2查得转化糖的数,mg
V2---转化后消耗样液量,ml
f3,W同式13
蔗糖量计算:蔗糖(%)=(L1-L2)×0.9515
式中:L1---转化后转化糖的含量,%
L2---转化前转化糖的含量,%
滴定量,ml乳糖,mg转化糖,mg滴定量,ml乳糖,mg转化糖,
mg1568.350.53367.851.71668.250.63467.951.71768.250.73567.951.81868.15
0.83667.951.81968.150.83767.951.92068.050.93867.951.92168.051.03967.9
52.02268.051.04067.952.02367.951.14168.052.12467.951.24268.052.12567.9
51.24368.052.22667.951.34468.052.22767.851.44568.152.32868.851.44668.
152.32967.851.54768.252.43067.851.54868.252.43167.851.64968.252.53267
.851.65068.352.5溶液中乳糖,蔗糖共存时,测定乳糖时应在滴定量中加上的校正数见表5
表5(用10ml费林试液)
滴定终点时所用的糖液量,
ml
蔗糖对乳糖比
3:16:1
150.150.30
200.250.50
250.300.60
300.350.70
350.400.80
400.450.90
450.500.95
500.551.05
十八.抗生素残留的检出。
1.试剂:脱脂乳:经113℃、20min灭菌。
4%氯化三笨四氮唑溶液:称取1g氯化三笨四氮唑溶液溶于5ml灭菌蒸馏水中,装褐色瓶内于7℃
水箱内保存。临用时用灭菌蒸馏水按1:5稀释。若溶液变为玉色或淡褐色,则不能再用。
2.操作:
(1)菌液制作:将菌种移种脱脂乳,经36±1℃水浴培养15h后,以灭菌脱脂乳1:1稀释待用。
(2)取检样9ml于15*150mm试管内,80℃水浴加热5min,冷却37℃以下,加菌液1ml,36±1℃水浴
培养2h,加0.3ml氯化三笨四氮唑,36±1℃水浴培养30min观察,如为阳性,再于水浴中培养30min做
第二次观察。每份检样做二份,另外再做阴性和阳性对照各一份。阴性对照管用无抗生素的乳9ml加菌液
和氯化三笨四氮唑。
(3)判断方法:准确培养30min,观察结果,如为阳性,再继续培养30min做第二次观察。在观察时要
迅速,避免光照过久干扰,乳中有抗生素存在,则在向检样中加入菌液培养液时细菌不增殖,此时由于加
入的指示剂氯化三笨四氮唑不还原,所以不显色。与此相反,如果没有抗生素存在,则加入菌液即进行增
殖,氯化三笨四氮唑被还原而显红色,也就是说检样呈乳的原色时为阳性,成红色为阴性。见表如下:
显色状态判断
未显色者阳性
微红色者可疑
桃红色-红色阴性
检测各种抗生素的灵敏度:
抗生素名称最低检出量
青霉素0.004单位
链霉素0.5单位
庆大霉素0.4单位
卡那霉素5单位
十九。PH值的测定:
1.仪器:PHS-2C酸度计
2.方法:将酸度计的电极插入装有纯牛奶的量筒中(纯牛奶)保持在25oC的温度,在水浴中保温)。待
显示数字稳定后,读数。
二十。细菌总数及大肠菌群检验。
见乳的微生物检验。
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