胶体金免疫层析法快速检测流感病毒应用研究
李月越 陈杭薇 王萍 李兵 郭文忠
【摘要】 目的： 观看胶体金免疫层析（GICA）法检测流感病毒的成效. 方式： 用间接免疫荧光法(IFA)作为“金标准”，比较GICA与IFA两种方式对同一份标本甲型及乙型流感病毒检测成效，对GICA法诊断实验做出评判. 结果： 两种方式的检测结果有较好的一致性，GICA法检测流感病毒与IFA法检测结果之间不同无统计学意义（P>0.05）. 结论： GICA法操作简单、方便、快速，特异、灵敏，在临床流感病毒抗原的检测中具有较好的应用价值.
【关键词】 胶体金免疫层析；快速检测；流感病毒A型；流感病毒B型
0引言
目前检测流感病毒的方式很多，但都存在各类不足，免疫金标记技术是以胶体金作为示踪标志物，基于抗原抗体反映原理而产生的一种新型免疫标记技术. 其中免疫层析技术（GICA）因其具有检测速度快、灵敏度高、特异性好、操作简便等特点，已在医学查验中广为应用［1］. 咱们应用GICA法检测患者鼻咽部份泌物中的流感病毒A，B（influenza virus A，B，F
terrible怎么读lu A，B）抗原，并与间接免疫荧光法（IFA）做对照，对GICA法检测流感病毒方式作出科学、客观的评判，验证此方式在流感病毒检测中的靠得住性，并探讨其应用价值.
1对象和方式
02/2020 ±19.6）岁. 病种包括肺炎、上呼吸道感染、急性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、发烧待查、肺癌、间质性肺病等. 对以上患者用细导管鼻咽部负压吸取法搜集其鼻咽部份泌物作为本研究的实验样本. 胶体金免疫层析法试剂盒： Flu A型（国药准字S20063095），Flu B型（国药准字S20063135）均由北京阿斯可来生物工程提供，有效期内利用. IFA法所利用抗Flu A，B mAb由北京庄笛浩禾生物技术公司提供，有效期内利用. IFA法所利用二抗： 异硫氰酸荧光素（FITC）标记山羊抗小鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术公司，有效期内利用.
板障 1.2方式
cocker 1.2.1GICA法检测于患者入院24 h内进行，利用定制的玻璃试管中加入5 mL缓冲液（PBS），一端连接负压吸引器，一端连接细塑料导管，操作时将细导管经鼻腔插入7～8
cm抵达鼻咽部，接通负压，旋转细导管并缓慢退出，吸取分泌物1～2 mL分泌物，后用滴管吹打数次（必要时加入抗粘液剂），然后将细胞悬液离心，弃上清，取沉淀液少量充分溶于裂解液中，用细管吸取裂解液，3～4滴于检测卡加样孔中，10～15 min后观看结果，在检测区和对照区各显现一条红色色带为阳性，仅在对照区超卓一条红色色带为阴性.
1.2.2IFA法检测与GICA法同时进行，将用上述方式取得的同一患者的鼻咽部份泌物离心后弃上清液，取沉淀细胞涂片，风扇吹干后丙酮固定. 在制备好的细胞涂片上别离加入Flu A,B特异性单克隆抗体20 μL，置37℃恒温箱20 min，掏出后用PBS液冲洗3遍，PB液洗1次，风干. 加入FITC标记的二抗，置37℃恒温箱20 min，洗片同上. 荧光显微镜下观看结果，病毒感染的鼻咽部纤毛柱状上皮细胞质内呈分泌物草绿色荧光，找到3 个以上典型感染细胞为阳性.
统计学处置： 应用SPSS10.0 for windows 成立数据库，进行临床诊断一致性Kappa检测，检测两种方式的吻合程度，计算出Kappa值，并进行配对设计的McNemar χ2查验.
2结果 bbx
2.1GICA法与IFA法比较532例取鼻咽部份泌物别离用GICA法与IFA法检测FluA，B. 应用GICA法检出FluA抗原阳性59例次，其中4例IFA法测阴性；应用GICA法检出FluA抗原阴性473例次，其中5例IFA法检测阳性. GICA法检出FluB抗原阳性31例次，其中2例IFA法检测阴性； GICA法检出FluB抗原阴性501例次，其中3例IFA法检测阳性. GICA法检测Flu阳性结果见图1.
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图1GICA法快速诊断试纸条检测Flu结果
2.2临床诊断一致性Kappa检测GICA法检测FluA，B结果与IFA法结果进行一致性查验Kappa别离为0.915，0.916，P=0.000，P<0.05. 说明用GICA法检测FluA，B与用IFA法检测有较好的吻合性.
12 angry men 2.3配对设计的McNemar χ2查验GICA法检测FluA,B结果与IFA法结果采纳McNemar χ2查验, P均＞0.05；因此以为GICA法检测FluA，B与用IFA法检测结果之间不同无统计学意义.
2.4经常使用诊断实验评判指标以IFA法为对照组，对GICA法检测流感病毒进行评判,其中灵敏度、特异性、总符合率、Youden指数、阳性预测值计阴性预测值均较高，假阳性率及
假阴性率较低，而Kappa值较高，吻合性较好(表1). 表1GICA法检测FluA，B的评判指标 3讨论
流感对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人群有较高的发病率及致死率，危害专门大. 流感病毒分为甲、乙、丙三型，其中变异大、危害重的主若是甲型和乙型流感病毒［2］. 流感的确诊需要实验室检查证明. 目前较为经常使用检测流感病毒要紧有病毒分离培育、酶免疫、免疫荧光及PCR技术［3］. 因抗流感病毒药物最好要在起始病症发生48 h内利用才能发挥较好疗效，故快速流感检测技术对制定预防方法及指导初期利用抗病毒药物超级重要［4-5］. 免疫荧光技术检测病毒抗原已有20连年历史，是快速而准确的方式［6］. 而其中IFA法因其具有稳固、灵敏、特异性强的优势，目前是诸多快速检测病毒方式中的金标准，但缺点是需价钱昂贵的免疫荧光显微镜，工作人员需具有必然的体会. GICA技术具有更简单、快速、准确和无污染等优势，得以快速进展，已在医学、动植物免疫、食物平安监督各领域取得了普遍的应用 ［7］. 该技术为成立了一种快速检测流感病毒方式提供了专门好的技术平台 ［8］. 咱们以IFA法为检测流感病毒的“金标准”， 对GICA法进行评判,结果发觉，利用两种方式检测FluA,B结果的总符合率及吻合性较好，二者之间的不同无统计学意义. 通过各项评判指标的计算，能够看出GICA法检测流感病毒特异、灵敏
性高，且与其他方式对照用GICA法检测流感病毒具有简便易行、报告速度快（仅需15 min）的特点，大大缩短了实验时刻，结果直观，为快速检测流感病毒感染提供一种新的、有效的检测方式，尤其在基层单位对流感病人检测及筛查工作中具有较大的应用价值.
【参考文献】
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