各种特殊的荧光蛋白[20081228]
很久前，2004年的一个关于GFP的贴子。
经过很多年的发展，荧光蛋白的发展超出想像。
大致总结如下：
1，普通的绿色荧光蛋白（GFP）；
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2，增强型的绿色荧光蛋白（EGFP）；
Schmitt, M., et al., 2006. U of PMA1 as a houkeeping biomarker for asssment of toxicant-induced stress in Saccharomyces cerevisiae. Applied and Environmental Microbiology. 72, 1515-1522.
Tang, J. B., et al., 2008. Expression and cretion of recombinant ZZ-EGFP fusion protein by the methylotrophic yeast Pichia pastoris. Biotechnology Letters. 30, 1409-1414.
3，通过定向进化和定点突变得到的一系列的不同颜色的荧光蛋白；
Clontech等公司可以购买到。
4，特殊的荧光蛋白：
4.1，随pH值改变而改变发光性质的荧光蛋白（pHluorin)；
Kuhn, Y., et al., 2007. Quantitative pH measurements in Plasmodium falciparum-infected erythrocytes using pHluorin. Cellular Microbiology. 9, 1004-1013.
Schuster, S., et al., 2005. pHluorin-bad in vivo assay for hydrola screening. Analytical Chemistry. 77, 2727-2732.
4.2，随ROS浓度改变而改变发光性质的荧光蛋白（rxYFP）；
Hu, J. J., et al., 2008. The Redox Environment in the Mitochondrial Intermembrane Space Is Maintained Separately from the Cytosol and Matrix. Journal of Biological Chemistry. 283, 29126-29134.
4.3，随合成时间延长改变光谱的荧光蛋白Fluorescent Timer；
可以在Clontech买到。
4.4，跨膜电位敏感的荧光蛋白
南京蛋糕培训学校有看过，但是没有找到相关的文献。
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4.5，一种过氧化氢敏感的黄色荧光蛋白（HyPer）
Belousov, V. V., et al., 2006. Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide. Nature Methods. 3, 281-286.
这些荧光蛋白通过融合表达，可以精确的进行亚细胞定位，在活体细胞中检测某种蛋白的细胞定位，或者各个微小区间的pH值、ROS浓度，甚至进一步得到一些其它的数据。
大家在实验室中如果遇到这一类的问题，可以多往荧光蛋白上想想，也许会有很巧妙的解决方法。
绿色萤光蛋白
法语b1是什么水平(green fluorescent protein)，简称GFP，这种蛋白质最早是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca2+)可产生交互作用。
kike由水母Aequorea victoria中发现的野生型绿色萤光蛋白，395nm和475nm分别是最大和次大的激发波长，它的发射波长的峰点是在509nm，在可见光绿光的范围下是较弱的位置。由海肾(a pansy)所得的绿色萤光蛋白，仅有在498nm有一个较高的激发峰点。
在细胞生物学与分子生物学领域中，绿色萤光蛋白基因常被用作为一个报导基因(reporter gene)。一些经修饰过的型式可作为生物探针，绿色萤光蛋白基因也可以克隆到脊椎动物(例如:兔子上进行表现，并拿来映证某种假设的实验方法。
冲上云霄2的英文插曲GFP的性质在线翻唱
GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素(fluorescein)强，特别在450～490nm蓝光波长下更稳定。
GFP需要在氧化状态下产生荧光,强还原剂能使GFP转变为非荧光形式,但一旦重新暴露在空气或氧气中,GFP荧光便立即得到恢复。而一些弱还原剂并不影响GFP荧光。中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定、脱水剂戊二酸或甲醛等。雄伟壮丽的意思
GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白。
由于GFP荧光是生物细胞的自主功能,荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。
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GFP在肿瘤发病机制研究中的应用
GFP 是一个分子量较小的蛋白,易与其他一些目的基因形成融合蛋白且不影响自身的目的基因产物的空间构象和功能。GFP 与目的基因融合,将目的基因标记为绿色,即可定量分析目的基因的表达水平,显示其在肿瘤细胞内的表达位置和量的变化,为探讨该基因在肿瘤发生、发展中的作用及其分子机制提供便利条件。
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在肿瘤的形成过程中,增殖和凋亡是一对相互矛盾的统一体。若肿瘤细胞凋亡占优势,肿瘤组织将长期处于休眠状态或自行消亡。肿瘤细胞的凋亡受凋亡相关基因调控。用GFP转染肿瘤细胞凋亡相关基因,并与正常组织进行比较,则大致可判断此基因为抑制肿瘤细胞凋亡的基因;反之,为促进肿瘤细胞凋亡的基因。
肿瘤细胞浸润是肿瘤细胞粘连、酶降解、移动和基质内增殖等一系列过程的表现,其根本原因在于肿瘤细胞内某些基因表达异常。利用GFP 的示踪特性,研究肿瘤细胞内某些基因异常表达与肿瘤细胞浸润的关系,即可揭示肿瘤细胞浸润的某些机制。
