温度敏感型UNG酶(TS-UNG)使用说明

更新时间:2023-07-19 11:16:57 阅读: 评论:0

温度敏感型UNG酶(TS-UNG)使用说明
货号:U8170
英文作文规格:1U/μl
保存:保存于-20℃。并避免保存时反复冻融。
产品介绍:
TS-UNG(Temperature Sensitive UNG)是经大肠杆菌重组表达获得的温度敏感型UNG酶。该酶能够催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,对RNA无活性,主要应用于PCR 扩增中防止产物污染。TS-UNG酶与E.coil基因来源的常规UNG酶相比,对温度敏感、易于灭活,避免了常规UNG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dUTP扩增产物的降解作用。TS-UNG酶可以在20℃~37℃,5~10min反应,以消化含dUTP的模板;然后,在50℃10min或95℃2min进行灭活。
利用TS-UNG酶低温消化、易于灭活的特性,它可以很好地与RT-PCR扩增反应程序相匹配,从而应用于反转录扩增防止产物污染。
活性定义:37℃条件下,1小时降解1µg含dU碱基的单链DNA的酶量为1单位。
储存缓冲液:
英语心理测试国外成人聊天室20mM Tris-HCl,100mM NaCl,0.1mM EDTA,1Mm DTT,0.1%Triton X-100,50%glycerol,pH7.5
反应条件:
1、反应体系:
Component
Volume per
Reaction(μl)
thebibliographyConcentration in Master
Mix涨价 英文
stealthTemplate*<1μg/reaction Primer11~50.2~1.0μM
Primer21~50.2~1.0μM
d NTPs
(dATP、dGTP、dCTP)
*200μM
d UTP
(replace dTTP)
*400μM 10×PCR Buffer51×
25mM MgCl
2
2~8  1.0~4.0mM Taq(5U/μl)0.25  1.25U
TS-UNG(1U/μl)
0.5
餐具英文
(0.1-0.5)
0.5U
(0.1~0.5U)
H
2
O*——
四级成绩什么时候出来的Total volume50μl
2、Incubate the product for10min at37℃;
3、Inactivate TS-UNG by heating to50℃for10min,
or95℃for2min;
质量控制:
1、SDS-PAGE电泳纯度大于98%;
2、降解活性、批间差异、稳定性;
3、无核酸外切酶和核酸内切酶活性、RNa酶活性;
注意事项:
bite怎么读
1、在20℃~37℃范围内,TS-UNG酶的活性随温度的升高有所增加,常用20℃、25℃、
37℃进行反应,可对酶的用量(0.1~0.5U)及反应时间(5~10min)进行优化;特别适合RT-PCR防污染使用;
2、由于不同待扩增基因对dUTP的利用效率和对UNG酶的敏感度不同,因此,如果采
用UNG体系导致检测灵敏度下降,应对反应体系进行调整优化;
3、避免多次冻融,切勿暴露在温度波动较大之处。温度波动对产品的稳定性有较大影
provinces响;
4、扩增前后要使用专用的区域和移液器,戴手套操作并经常更换,PCR反应完成后切勿打开反应管。以最大限度的减少PCR产物对样品的污染。

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标签:反应   扩增   活性   温度   产物   灭活   尿嘧啶   体系
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