1、目的
确保Agilent 1260高效液相色谱仪的正确使用及管理。
2、范围
island研发分析中心实验室Agilent 1260高效液相色谱仪。
goldrush
3、责任
仪器使用者对本标准的实施负责。
4、内容
4. 1 开机
4.1.1打开计算机，进入Windows 画面。
4.1.2自下而上打开1260LC各模块电源，待各模块自检完成后，双击电脑桌面上LC1260-1(Online)图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面。
4.1.3单击【View】菜单选择【Method and Run control】项，也可单击工作站
画面左下角【Method and Run control】项，进入方法和运行控制窗口。
4.2 安装色谱柱
正确安装实验所需的色谱柱，注意色谱柱流速箭头方向，试验过程中需检查是否存
在漏液。
sip
4.3 溶剂瓶体积设置
把事先配好的流动相倒入相应的溶剂瓶中，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下【Bottle filling】，在参数设置处输入各溶剂瓶（A、B、C、D）内溶液实际体积和停泵体积，单击【OK】键，即可。
4.4 设置【Seal wash】
单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在al wash这栏中选择“On”, 清洗功能开始运行，并设置清洗时间，每隔5min清洗0.1min。
4.4 脱气
逆时针旋开Purge阀，单击【instrument】菜单,选择【More 英华兰魔法少儿英语Quat Pump】项下“control”,
在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运行。设置“solvents”一栏中相应参数，将试验
中所用到的管道逐一脱气，直至管内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止所需时间，
3ml/min冲洗大约需5min～10 min ,,完成后选择“off” , 单击OK键关泵，顺时针旋
紧Purge阀。
4.5 平衡色谱柱
单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】项下 “Quat Pump”, 在
“solvents”一栏将试验中要用到的有机相通道（甲醇/乙腈）设置为100%，并将
“Flow”从低流速逐级设为1ml/min， 在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运行，冲
洗约10min钟后，设定与测试方法相同的柱流速和流动相比例平衡色谱柱(梯度采
用起始流动相比例)，冲洗色谱柱，直至基线走平，一般需要30 min ～60医学考研科目 min。若
测试方法用到缓冲盐作为流动相，还需10%甲醇或乙腈水溶液冲洗过渡色谱柱，
约30min，再设置为流动相得比例，平衡色谱柱。
4.5 方法编辑
4.5.1 进样体积设定
标准进样： 单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，在此窗口上方选择“Sampler”模块, 在“Injection Volume”处输入进样体积，选择“Standard Injection”方式，单击OK键即可。
带洗针进样：单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】, 在此窗口上方选择“Sampler”模块, 在“Injection Volume”处输入进样体积，选择“Injection with needle wash”方式，单击OK键即可。此方式进样后会在事先放置的洗瓶中洗针，减少样品残留此种方式比较，比较适合
4.5.2 柱温设定
单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，此窗口上方选择 “column” 模块,输入柱温，左右两边柱温要保持一致。
4.5.3 泵参数设定better than i know mylf
predestination单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，在此窗口上方选择 “Quat Pump” 模块, 在“Flow”处输入所需的流速，在“solvents”处输入各通道的溶液比例,若实验为梯度洗脱程序，则需在“Timetable”下编辑，输入相应的时间和流动相比例。“Stoptime”为运行停止时间，“Posttime”指的是两次运行之间流动相的平衡时间，一般剃度洗脱需设置这一项。
4.5.4 检测波长设定
单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，在此窗口上方选择“DAD”模块,输入检测波长和带宽，一般带宽设置为4nm,参比波长视情况设定，一般不需要设定。
4.5.5 样品信息设定
单针进样：单击【Runcontrol】菜单,选择【Sample info】,在弹出窗口“Path”
处输图谱保存路径；“subdirectory”处输入文件夹；“prefix/counter”处输入图谱编号；“prefix”为前缀，输入年月日；“counter”为计数，从“00001”开始；“Sample parameters”下的“location”处输入进样瓶放置位置；“Sample name”处输入样品名称。
序列进样：单击【Sequence】菜单,选择【Sequence parameters】,在弹出窗口“DataFile”下“Path”处输入图谱保存路径，“subdirectory”处输入文件夹，“prefix/counter”处输入图谱编号，“prefix”为前缀，输入年月日，“counter”为计数，从“00001”开始。保存路径设置好后，单击【Sequence】菜单，选择【Sequence Table】，在“Vial”输入进样瓶位置；“Sample name”输入样品名称，“Method name”输入方法名称，“inj/vial”输入进样次数，【Cut】删掉所选中行，点击【centOK】，退出当前界面，待基线系统稳定后，再点击运行界面上【Sequence】，仪器则开始按照当前设置好的系列进行样品检测。
4.5.6 方法保存
单击【Method】菜单,选择【Save Method】,即可保存当前方法；选择【Save Method as】,即可另存方法。
4.6 方法运行
单针进样：单击【Runcontrol】菜单,选择【Run Method】。
序列进样：单击【Runcontrol】菜单,选择【Run Sequence】。
4.7 图谱处理（不详细说明）
4.8 关机
4.8.1 冲洗色谱柱
做完试验,及时用适当溶剂冲洗柱子，特别是流动相中含有缓冲盐，一定要用足量的水冲洗彻底洗净其中的盐类，如先用甲醇或乙腈10%的水溶液冲洗不少于30分钟，再用100%甲醇或乙腈冲洗冲洗系统约30分钟，然后关泵,尽量保存在乙腈中（适用反相色谱柱）。
4.8.2 关闭计算机howareyoudoing
退出化学工作站，用shut down关闭计算机。
4.9 维护保养
4.9.1旋开【Purge】阀脱气时，查看柱前压力，若大于5Bar颜色看性格，则应更换过滤白
头，不过实际中，除非过滤白头已经很脏，一般都不会大于5 Bar，但是还是需定期更换。
4.9.2所使用的蒸馏水需当天开瓶的，才可以配流动相。
4.9.3仪器运行时需打开【Seal wash】清洗，防止高压盐析和推杆与泵之间的摩
擦。
4.9.4长期不用的通道，需定期冲洗，防止管道内液体干涸，产生气泡。
