cDNA制备
抽提细胞总RNA（Isolation of RNA using Trizol）
谨慎行事
ashlynn总则：防止RNA降解是提取RNA的关键注意事项。RNA酶的来源是实验室，如做质粒提取的过程接触到的物品，尤其是枪，架子，台子和手套等，而由于工厂发出的未开分物品如tips不会有酶存在。因而，所有已经在实验室用过的都要用DEPC处理，其余要用未开封的EP管，tips。
准备：
苍狼是什么意思quarrelling用螺口瓶加500ml水，0.5mlDEPC溶解。用烧杯装0.1%DEPC浸泡移液器枪头部分30min，并擦拭枪身，浸泡细胞刮板30min,擦拭。直接使用未开封的tips和EP 管（15ml）,无菌烘烤过的10ml玻璃吸管，在桌上铺未曾接触过人手的垫纸，换新手套。
试剂：Trizol, chloroform(新分出，RNA单用)，3M NaAc (新分出单用)，Ethanol 100%,异丙醇（新分出，单用），新鲜去离子水（水由制水机用新50ml管接装）。在50ml新管中配75%ethanol乙醇，（40ml ethanol +10ml水，混匀）。
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步骤：
csav 1．10cm培养皿中+50ml1×PBS洗细胞，吸干；侧倾培养皿30s,吸干液体。
2．加4ml Trizol，刮下细胞，置于15ml管，用手剧烈上下震荡5次，室温5min。
3．加0.8ml 氯仿，剧烈震荡；静置1min,离心3600rpm 5min，取上清2ml。（宁愿丢掉一些上清，不要吸入杂质）
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beat it mp3 4．加1.8ml异丙醇，上下倒置3次混匀，室温静置10min;离心3600rpm 10min,弃上清。
5．加10ml 75% Ethanol ,上下倒置2次混匀，离心3600rpm 2min,弃上清。
6．加约1ml 75% Ethanol,将沉淀转至1.5mlEP管，再离心2min，弃上清，吸尽上清，晾干。有时
7．将EP管放置冰上，加入400ul去离子水，泡5min后，用1ml枪上下吹动10-20次溶解；加入50ul 3M NaAc,1ml 100% Ethanol,盖紧，上下倒置混匀，存于-20℃盒子。
blue jeans8．检测，测量OD260/OD280；在1ml石英管中加800ulTE溶液，波长260nm调零后，直接加入1ml枪头或是15ml管中残留的RNA溶液4ul，混匀，检测。
10OD260=40μg/mL
